Name: N‐メチル‐D‐アスパラギン酸(NMDA)誘発興奮毒性下における網膜神経節細胞の解剖学的特徴の検討 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T12:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 11 s
Description: 学ぶ遺伝子導入アルカリホスファターゼ標識法を用いた網膜神経節細胞のNMDA誘発興奮毒性下での変性機構。この手法により、マウス網膜における細胞死過程の新規表現型を解明し、治療標的の探索に貢献する。

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<ol><li>Blennow, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+brain+injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Dis+Primers%22%5BJournal%5D)">Traumatic brain injuries.</a> Nat Rev Dis Primers. 2, 16084(2016).</li>
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<li>Bai, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NMDA+receptor+subunits+have+different+roles+in+NMDA-induced+neurotoxicity+in+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Brain%22%5BJournal%5D)">NMDA receptor subunits have different roles in NMDA-induced neurotoxicity in the retina.</a> Mol Brain. 6, 34(2013).</li>
<li>Cull-Candy, S., Brickley, S., Farrant, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NMDA+receptor+subunits%3A+diversity%2C+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">NMDA receptor subunits: diversity, development and disease.</a> Curr Opin Neurobiol. 11 (3), 327-335 (2001).</li>
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<li>Chen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Tbr2-expressing+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Characterization of Tbr2-expressing retinal ganglion cells.</a> J Comp Neurol. 529 (15), 3513-3532 (2021).</li>
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<li>Kiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+Roles+of+Tbr1+in+the+Formation+and+Maintenance+of+the+Orientation-Selective+J-RGCs+and+a+Group+of+OFF-Sustained+RGCs+in+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Essential Roles of Tbr1 in the Formation and Maintenance of the Orientation-Selective J-RGCs and a Group of OFF-Sustained RGCs in Mouse.</a> Cell Rep. 27 (3), 900-915.e5 (2019).</li>
<li>Kiyama, T., Chen, C. K., Zhang, A., Mao, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+Susceptibility+of+Retinal+Neurons+to+the+Loss+of+Mitochondrial+Biogenesis+Factor+Nrf1%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Differential Susceptibility of Retinal Neurons to the Loss of Mitochondrial Biogenesis Factor Nrf1.</a> Cells. 11 (14), 2203(2022).</li>
<li>Badea, T. C., Wang, Y., Nathans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+noninvasive+genetic%2Fpharmacologic+strategy+for+visualizing+cell+morphology+and+clonal+relationships+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A noninvasive genetic/pharmacologic strategy for visualizing cell morphology and clonal relationships in the mouse.</a> J Neurosci. 23 (6), 2314-2322 (2003).</li>
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<li>Muzyka, V. V., Brooks, M., Badea, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+developmental+dynamics+of+cell+type+specification+genes+in+Brn3a%2FPou4f1+Retinal+Ganglion+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Dev%22%5BJournal%5D)">Postnatal developmental dynamics of cell type specification genes in Brn3a/Pou4f1 Retinal Ganglion Cells.</a> Neural Dev. 13 (1), 15(2018).</li>
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<li>Park, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promoting+axon+regeneration+in+the+adult+CNS+by+modulation+of+the+PTEN%2FmTOR+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Promoting axon regeneration in the adult CNS by modulation of the PTEN/mTOR pathway.</a> Science. 322 (5903), 963-966 (2008).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.5%エリスロマイシン点眼軟膏&nbsp;</td><td>バウシュ+ロンブ</td><td>24208-910-55</td><td></td></tr><tr><td>0.5%プロパラカイン塩酸塩&nbsp;</td><td>バウシュ+ロンブ</td><td>24208-730-06</td><td></td></tr><tr><td>10%中性緩衝ホルマリン&nBSP;</td><td>VWRの</td><td>89370-094</td><td></td></tr><tr><td>10cmのペトリディッシュ</td><td>コーニング</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>10 倍の PBS</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>BP399</td><td>水で希釈して1x PBSとオートクレーブを作成します。</td></tr><tr><td>2.0mlチューブ</td><td>VWRの</td><td>525-1136</td><td></td></tr><tr><td>30ゲージ注射針</td><td>エクセリントインターナショナル</td><td>26437</td><td></td></tr><tr><td>30 mm ペトリディッシュ</td><td>隼</td><td>35208</td><td></td></tr><tr><td>ベンジルアルコホル&nbsp;</td><td>アクロスオーガニック</td><td>447000010</td><td></td></tr><tr><td>ベンジルベンゼート</td><td>アクロスオーガニック</td><td>105860010</td><td></td></tr><tr><td>硝酸セルロース膜フィルター</td><td>サイトバ</td><td>7188-002</td><td></td></tr><tr><td>カバー伝票</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>72204-01</td><td></td></tr><tr><td>両面テープ</td><td>スコッチ</td><td>597020</td><td></td></tr><tr><td>エタノール</td><td>デコンラボ</td><td>2716</td><td>AP染色後の脱水にはFisher Bioreagents(Cat#:BP2818)を使用しないでください。この試薬は網膜を歪めます。</td></tr><tr><td>鉗子</td><td>テッド・ペラ</td><td>505</td><td></td></tr><tr><td>加熱パッド</td><td>セラサーム</td><td>710298-001</td><td></td></tr><tr><td>インスリン注射器</td><td>BDの</td><td>329424</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン</td><td>デクラ</td><td>17033010110</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>ツァイス</td><td>アクシオイメージャー2</td><td></td></tr><tr><td>ネールポリッシュ</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>ナノフィルインジェクター</td><td>世界の精密機器</td><td>ナノフィル</td><td></td></tr><tr><td>ナノフィル針</td><td>世界の精密機器</td><td>NF25BLシリーズ</td><td></td></tr><tr><td>NBT/BICP試薬キット</td><td>インビトロゲン</td><td>N6547</td><td></td></tr><tr><td>NMDAの</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>M3262</td><td></td></tr><tr><td>ペイントブラシ</td><td>キングアート</td><td>6650</td><td></td></tr><tr><td>スライドガラス</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>モティック</td><td>DM143</td><td></td></tr><tr><td>ヒマワリ種子油</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>S5007</td><td></td></tr><tr><td>タモキシフェン</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>T5648</td><td>タモキシフェン溶液を4°Cで保管します。Cは遮光箱に入っています。タモキシフェン溶液を1週間以内に使用してください。</td></tr><tr><td>ヴァンナハサミ&nbsp;</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>ウォーターバス</td><td>ラボライン</td><td>18052</td><td></td></tr><tr><td>キシラジン</td><td>デクラ</td><td>17033-0099-05</td><td>製品名:ロンプン</td></tr></tbody></table>

n‐メチル‐d‐アスパラギン酸(nmda)誘発興奮毒性下における網膜神経節細胞の解剖学的特徴の検討

Examination of Anatomical Features of Retinal Ganglion Cells Under N-methyl-D-aspartic Acid (NMDA)-induced Excitotoxicity

硝子体へのNMDAの適用はRGC死を誘発しますが、これは従来、RGCマーカーによる組織学的染色または免疫蛍光(IF)染色を使用して検出されてきました。私たちの実験設定では、汎RGCマーカーRBPMSを用いた従来のIF戦略を使用することにより、NMDA注入の1週間後にRGCの数が約65%減少することを確認しました(図2E-G)。以前の研究では、Tbr2 を発現する RGC が実際に ipRGC であることが発見されています34,35。Tbr2CreER2 での AP 染色の使用。RosaiAP網膜では、少数のTbr2発現RGCのみが生き残ったのに対し、Tbr2発現RGCおよびACの大部分は注射後1週間で消失したことを観察しました(図2A、Bを比較)<stron...

N‐メチル‐D‐アスパラギン酸(NMDA)誘発興奮毒性下における網膜神経節細胞の解剖学的特徴の検討

Retinal ganglion cells (RGCs) are the output neurons of the retina, responsible for transmitting visual information to the brain. In the mature mouse ...

examination-anatomical-features-retinal-ganglion-cells-under-n-methyl

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

硝子体内注射、眼の疾患のためのまたは局所治療の直接的な応用として、視覚科学の研究に広く使用されている技術です。このビデオでは、ガラスピペットで1ミリリットル注射器を使用して硝子体内注射のためのプロトコルを示した。大量出血し、レンズの損傷を避けることについての有用なヒントが与えられている。...

眼疾患モデルを確立するための硝子体内注射

このビデオでは、内顆粒層の厚さ、網膜神経節細胞（RGC）の数を定量化し、RGCのサイズを測定する測定含まれる網膜の形態学的分析、3つのタイプを示しています。技術は、形態学的解析のためのシンプルでありながら科学的なプラットフォームを提供することができます。...

網膜切片の形態学的解析

このビデオでは、ナイーブマウス視覚投影の造影MRイメージングのための急性視神経挫滅損傷および慢性視神経変性に関連視神経変性の繰り返しと縦のin vivo試験では、臨床3 Tスキャナを使用して、方法を示しているノックアウトマウス（P50 KO）。...

マウスにおける造影MRIによる視神経線維の整合性in vivoイメージング

免疫組織化学プロトコルは、網膜中の特定のタンパク質の局在化を研究するために使用される。カルシウムイメージング技術は、網膜神経節細胞および軸索のカルシウム動態を研究するために使用される。...

ホールマウントラット網膜における免疫組織化学的およびカルシウムイメージング法

このプロトコルを記述する簡易分離し培養 6 7 日古い子犬、CGNs の損失のための効率的な伝達と機能の研究、益からプライマリ マウス脳顆粒ニューロン (CGNs) と nmda 刺激による神経毒性、モデリング法低カリウムによって誘導される細胞死、DNA...

神経細胞死とマウス プライマリ小脳顆粒ニューロンの変性をモデリング

このプロトコルの目標より大きな規模での NMDA 受容器 (NMDAR)...

感受性グリシン/D-セリン、グルタミン酸と NMDA 受容体を研究する高スループット カルシウム変化分析

in vivoイメージングは、健康と疾患における生物学の研究のための強力なツールです。このプロトコルは、標準的な2光子顕微鏡によるマウス網膜の経瞳孔イメージングについて説明しています。また、網膜の複数の細胞コホートを蛍光標識するためのさまざまなin...

経瞳孔二光子マウス網膜のin vivoイメージング

本稿では、共焦点ライブ顕微鏡を用いた一次海馬および皮質ニューロンにおける急性摂動に対する基底レドックス状態と酸化還元反応の違いを判断するためのプロトコルについて説明する。このプロトコルは、他の細胞タイプや顕微鏡に最小限の変更で適用できます。...

レシオメトリック指標を用いた一次ニューロンにおけるミトコンドリアグルタチオンレドックス状態の生画像化

メタノールは、網膜ホールマウント製剤および長期保存のための補助固定培地として使用することができ、網膜神経節細胞の調査に有用である。...

網膜神経節細胞の研究のためのメタノールベースのホールマウント調製

このビデオでは、上丘（SC）の表面にフッ素金（FG）を適用することで、RGCの逆行性標識法の方法を説明します。テクニックは、頭蓋骨をドリル皮質を吸引し、SCの全体の背側表面上にゼラチンスポンジを適用する必要があります。...

上丘の表面上にフッ素金の適用により網膜神経節細胞の逆行性標識法

学ぶ遺伝子導入アルカリホスファターゼ標識法を用いた網膜神経節細胞のNMDA誘発興奮毒性下での変性機構。この手法により、マウス網膜における細胞死過程の新規表現型を解明し、治療標的の探索に貢献する。

N‐メチル‐D‐アスパラギン酸(NMDA)誘発興奮毒性下における網膜神経節細胞の解剖学的特徴の検討

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