Name: マウスにおける最適化された低侵襲経強膜網膜下注射技術 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-25T13:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: 学ぶマウスにおける最適化された低侵襲経強膜網膜下注射技術。網膜色素上皮と光受容体への治療薬送達を向上させ、再現性と成功率を高めながら網膜損傷を最小限に抑える方法です。

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<ol><li>Trapani, I., Banfi, S., Simonelli, F., Surace, E. M., Auricchio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+of+inherited+retinal+degenerations%3A+prospects+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Gene therapy of inherited retinal degenerations: prospects and challenges.</a> Hum Gene Ther. 26, 193-200 (2015).</li>
<li>Peng, Y., Tang, L., Zhou, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+Injection%3A+A+Review+on+the+Novel+Route+of+Therapeutic+Delivery+for+Vitreoretinal+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Res%22%5BJournal%5D)">Subretinal Injection: A Review on the Novel Route of Therapeutic Delivery for Vitreoretinal Diseases.</a> Ophthalmic Res. 58, 217-226 (2017).</li>
<li>Simunovic, M. P., Xue, K., Jolly, J. K., MacLaren, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+Functional+Recovery+Following+Limited+Iatrogenic+Macular+Detachment+for+Retinal+Gene+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Structural and Functional Recovery Following Limited Iatrogenic Macular Detachment for Retinal Gene Therapy.</a> JAMA Ophthalmol. 135, 234-241 (2017).</li>
<li>Parikh, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Alternative+and+Validated+Injection+Method+for+Accessing+the+Subretinal+Space+via+a+Transcleral+Posterior+Approach%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An Alternative and Validated Injection Method for Accessing the Subretinal Space via a Transcleral Posterior Approach.</a> J Vis Exp. (118), e54808(2016).</li>
<li>Testa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-year+follow-up+after+unilateral+subretinal+delivery+of+adeno-associated+virus+in+patients+with+Leber+congenital+Amaurosis+type+2%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Three-year follow-up after unilateral subretinal delivery of adeno-associated virus in patients with Leber congenital Amaurosis type 2.</a> Ophthalmology. 120, 1283-1291 (2013).</li>
<li>Ghazi, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+retinitis+pigmentosa+due+to+MERTK+mutations+by+ocular+subretinal+injection+of+adeno-associated+virus+gene+vector%3A+results+of+a+phase+I+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Treatment of retinitis pigmentosa due to MERTK mutations by ocular subretinal injection of adeno-associated virus gene vector: results of a phase I trial.</a> Hum Genet. 135, 327-343 (2016).</li>
<li>Bennett, J., Anand, V., Acland, G. M., Maguire, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-species+comparison+of+in+vivo+reporter+gene+expression+after+recombinant+adeno-associated+virus-mediated+retinal+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Cross-species comparison of in vivo reporter gene expression after recombinant adeno-associated virus-mediated retinal transduction.</a> Methods Enzymol. 316, 777-789 (2000).</li>
<li>Muhlfriedel, R., Michalakis, S., Garcia Garrido, M., Biel, M., Seeliger, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+technique+for+subretinal+injections+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Optimized technique for subretinal injections in mice.</a> Methods Mol Biol. 935, 343-349 (2013).</li>
<li>Hejri, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-surgical+method+for+subretinal+delivery+by+trans-scleral+microneedle+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Bioeng+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">A non-surgical method for subretinal delivery by trans-scleral microneedle injection.</a> Bioeng Transl Med. 10 (3), e10755(2025).</li>
<li>Sastry, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscope-Integrated+OCT-Guided+Volumetric+Measurements+of+Subretinal+Blebs+Created+by+a+Suprachoroidal+Approach%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Vis+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Microscope-Integrated OCT-Guided Volumetric Measurements of Subretinal Blebs Created by a Suprachoroidal Approach.</a> Transl Vis Sci Technol. 10, 24(2021).</li>
<li>Blanc, V. F., Jacob, J. L., Milot, J., Cyrenne, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oculorespiratory+reflex+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Anaesth%22%5BJournal%5D)">The oculorespiratory reflex revisited.</a> Can J Anaesth. 35, 468-472 (1988).</li>
<li>Dewar, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+oculocardiac+reflex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+R+Soc+Med%22%5BJournal%5D)">The oculocardiac reflex.</a> Proc R Soc Med. 69, 373-374 (1976).</li>
<li>Katzung, B. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKatzung%2C+BG+%22Basic+%26amp%3B+clinical+pharmacology%22">Basic &amp; clinical pharmacology</a>. , 9th ed, Lange Medical Books/McGraw Hill. New York, USA. (2004).</li>
<li>Mai, X., Huang, S., Chen, W., Ng, T. K., Chen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+Optical+Coherence+Tomography+to+a+Mouse+Model+of+Retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Application of Optical Coherence Tomography to a Mouse Model of Retinopathy.</a> J Vis Exp. (179), e63421(2022).</li>
<li>L'Abbate, D., Prescott, K., Geraghty, B., Kearns, V. R., Steel, D. H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomechanical+considerations+for+optimising+subretinal+injections%5BTitle%5D)+AND+%22Surv+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Biomechanical considerations for optimising subretinal injections.</a> Surv Ophthalmol. 69, 722-732 (2024).</li>
<li>Huang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+injection+in+mice+to+study+retinal+physiology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Subretinal injection in mice to study retinal physiology and disease.</a> Nat Protoc. 17, 1468-1485 (2022).</li>
<li>Stockslager, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+method+for+automated+measurement+of+glass+micropipette+tip+geometry%5BTitle%5D)+AND+%22Precis+Eng%22%5BJournal%5D)">Optical method for automated measurement of glass micropipette tip geometry.</a> Precis Eng. 46, 88-95 (2016).</li>
<li>Li, Q., Rycaj, K., Chen, X., Tang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells+and+cell+size%3A+A+causal+link%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells and cell size: A causal link.</a> Semin Cancer Biol. 35, 191-199 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.9%塩化ナトリウム注射、USP</td><td>ホスピラ</td><td>PAA130066</td><td></td></tr><tr><td>1% 硫酸アトロピン点眼液、USP</td><td>アコーン</td><td>NDC 17478-215-05</td><td></td></tr><tr><td>30&度;ダイヤモンドナイフ</td><td>カテナ</td><td>K2-6560</td><td></td></tr><tr><td>AmScope 6W LEDデュアルグースネックイルミネーター</td><td>アムスコープ</td><td>LED-11CR</td><td></td></tr><tr><td>アングルドヴァンナスハサミ</td><td>ロボズ</td><td>RS-5618</td><td></td></tr><tr><td>BSS滅菌灌漑ソリューション</td><td>アルコン</td><td>289010-0902</td><td></td></tr><tr><td>シクロミドリル拡張点眼薬</td><td>アルコン</td><td>0065-0359-02</td><td>0.2%シクロペントレート、1%フェニレフリン</td></tr><tr><td>epT.I.P.S. MicroloaderTMピペットチップ</td><td>エッペンドルフ</td><td>5242 956.003</td><td></td></tr><tr><td>FemtoJet 4iマイクロインジェクター</td><td>エッペンドルフ</td><td>E5252000021</td><td>生産終了品</td></tr><tr><td>GenTeal Tears 潤滑眼軟膏</td><td>アルコン</td><td>16027802</td><td></td></tr><tr><td>ガラス製マイクロインジェクション針</td><td>クランベリーサイエンティフィック</td><td>B100-58-50</td><td>30&度;斜面。直径:50&マイクロ;m アウター、29 & マイクロ;M インナー</td></tr><tr><td>イソフルラン溶液</td><td>コベトラス</td><td>29405</td><td></td></tr><tr><td>画像誘導OCT付きMICRON IV網膜イメージング顕微鏡</td><td>フェニックス</td><td>該当なし</td><td></td></tr><tr><td>実体顕微鏡 SteREO Discovery.V8</td><td>ツァイス</td><td>495015-0001-000</td><td></td></tr><tr><td>Stern-Castroviejoロッキング歯付き鉗子</td><td>カテナ</td><td>K5-2552</td><td></td></tr><tr><td>歯付き鉗子</td><td>ロボズ</td><td>RS-5172</td><td></td></tr><tr><td>23sゲージ針用タングステンクリーニングワイヤー</td><td>ハミルトン</td><td>18306</td><td></td></tr><tr><td>ウルトラセルPVAアイスピア</td><td>BVIメディカル</td><td>40400-8</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-Fine2015インスリン注射器&nbsp;</td><td>BDの</td><td>328438</td><td>3/10 mL、8 mm (5/16インチ)、31G</td></tr></tbody></table>

マウスにおける最適化された低侵襲経強膜網膜下注射技術

Optimized Minimally Invasive Transscleral Subretinal Injection Technique in Mouse

この経強膜技術を使用した注射が成功すると、注射手順の直後にOCTで観察可能な網膜下水疱が生成されます(図2A)。この技術の技術的課題を考えると、注射に成功した動物を特定するにはイメージングステップが不可欠です。遺伝子治療実験にこの技術を使用する予定の研究者には、蛍光レポーター遺伝子を保有するアデノ随伴ウイルス(AAV)粒子による練習注射を行うことをお勧めします。この技術を使用して送達されたAAV粒子は、RPE(図2B)、光受容体(図2C、D)、またはそれらの組み合わせ(図2E、F)の非常に大きな形質導入領域を達成します。形質導入された領域は通常、鋸歯口から視神経乳頭を越えて下に伸びています。他の網膜下注射技術と同様に、形質導入効率は通常不均一に分布し、水疱の中心の領域でピークに達し、中心から離れると徐々に減少します(<strong c...

The conventional method of material delivery to the subretinal space in the mouse involves dual perforation of the neural retina, which causes extensive ...

optimized-minimally-invasive-transscleral-subretinal-injection

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

この手術法は、マウスの眼の網膜下腔への遺伝子治療用ベクターと幹細胞の注入を示しています。...

マウスの眼の中に遺伝子治療ベクターと幹細胞の網膜下注入

出典: Park, SW, et al.マウス網膜色素上皮における遺伝子治療のためのウイルスベクタの輪部アプローチ‐網膜下注射J. Vis. 経験。(2015年)このビデオでは、マウスモデルで網膜色素上皮(RPE)にウイルスベクターを網膜下注射する方法を説明しています。麻酔と眼の準備から正確なレンチウイルスベクター送達までの手順が詳細に説明されており、RPE...

マウスモデルにおける網膜色素上皮へのウイルスベクターの網膜下注射

出典: Parikh, S., et al.経強膜後方アプローチを介して網膜下腔にアクセスするための代替的で検証済みの注射法。J. Vis.

マウスの網膜下腔への蛍光色素の送達

ここでは、ラットとマウスにRPE細胞のボーラスを網膜下注射するためのマルチメディア形式でコミュニティが受け入れたプロトコルを紹介します。このアプローチは、網膜変性の動物モデルに移植された移植されたRPE細胞のレスキューの可能性、安全性プロファイル、および生存能力を決定するために使用できます。...

懸濁液中の網膜色素上皮細胞を送達するげっ歯類における網膜下注射の実行

ラットの視神経への直接注射は、再生研究に役立ちます。私たちは、頭蓋骨を開くことなくラットの視神経に直接注射する低侵襲技術を示しています。この方法を使用すると、外科的合併症が最小限に抑えられ、回復が迅速になります。...

ラット視神経への注入のための低侵襲テクニック

網膜下注射は、マウスの眼の網膜色素上皮に効果的な遺伝子送達を行うための外科的技術です。...

マウス網膜色素上皮における遺伝子治療用ウイルスベクターの縁アプローチ、網膜下注射

網膜下注射は、タンパク質やウイルスベクターなどの大きな治療薬を光受容体や網膜色素上皮に送達するための最も一般的な技術です。ここでは、付随的な損傷を最小限に抑え、迅速な回復時間で網膜下腔をうまく標的とするマウスの代替方法について説明します。...

網膜下腔にアクセスするための代替と検証済みの注入方法<i&gt;経由で</i&gt;経強後方アプローチ

網膜の注射は、加齢黄斑変性症に対する幹細胞補充療法の臨床研究で広く適用されています。この可視化の記事でラットの目に細胞を提供する強膜によるリスクの少ない、再現性と正確に変更された網膜注入手法について述べる。...

強膜網膜移植ひと網膜色素上皮細胞のラットの目の洗練されたプロトコルの開発

網膜への遺伝子治療薬の配達をお手伝いし、その地域の範囲を評価する視細胞活力を特徴付ける高分解能スペクトル領域光干渉断層法 (HR-SD-OCT)...

超高解像度マウス光コヒーレンストモグラフィー網膜遺伝子治療研究における眼内注入を支援するために

このプロトコルは、網膜変性の有無にかかわらず、マウスレシピエントにおいて、外科的合併症の発生率が低い網膜下細胞移植片を安全かつ正確に送達するための経瞳孔ビジョン誘導経強膜アプローチを提示します。...

網膜変性マウスモデルにおける網膜下移植片の経瞳孔ガイド下経強膜移植

この記事では、ラットにおける網膜下注射の方法について、術中の視覚化を利用して注射部位と網膜剥離の領域の両方を制御する方法について説明します。...

ラットにおける網膜下注射と網膜剥離の術中可視化

学ぶマウスにおける最適化された低侵襲経強膜網膜下注射技術。網膜色素上皮と光受容体への治療薬送達を向上させ、再現性と成功率を高めながら網膜損傷を最小限に抑える方法です。

マウスにおける最適化された低侵襲経強膜網膜下注射技術

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