領域特異的腸管とのリンパ伝達の選択的障害のためのマウス腸系膜リンパ節摘出術

私たちの研究は新抗原や末梢組織に対するT細胞の応答に焦点を当てており、これらの反応はプライミングの影響を強く受けているため、主にプライミングイベントがどこで起こるかに焦点を当てています。現在、リンパ節と組織間の輸送を阻止するために広く使われているのは、S1P受容体作動薬やインテグリン遮断などの全身的治療法のみです。しかし、この広範な抑制が特定の局所リンパ節の寄与を研究することを妨げています。

当プロトコルでは、主要な4つの腸系膜リンパ節各ステーションで非常に選択的なリンパ節摘出術を詳細に説明しており、これらのリンパ節は排出する腸セグメントに特化しているため、この耐容性の高い生存手術により、腸リンパ軸の特定の区画を破壊しつつ、残りはそのまま維持できます。後足で適切な麻酔深度を確認した後、無菌外科用ハサミを使って麻酔マウスの皮膚の中央線に0.5〜1センチの切開を入れます。滅菌鉗子を使い、腹壁から離れた皮膚を剥離し、白線を同定します。

その後、白線にさらに0.5〜1センチの切開を入れて腹膜腔にアクセスします。鈍い先端のガベージ針を使い、腹膜腔に体温の無菌生理食塩水を1ミリリットル注入します。腸の位置調整の準備として無菌のカーテンを湿らせてください。

最初のリンパ節を切除するには、外側に出た腸を湿ったカーテンに合わせ、盲腸は下側、近位結腸は上方、末端回腸は外科医側に位置させます。結腸に沿って縦方向に走る腸系膜リンパ節の鎖を特定してください。角度のある細かい鉗子を使い、閉まった鉗子を回腸結腔から離して最初のリンパ節を鈍く切り離し、閉じた鉗子をこれらの構造の間に置いて優しく開けます。

近傍リンパ節への側副流の理論リスクを減らすため、単線ナイロン縫合と細かい先端鉗子を用いて、リンパ節鎖に沿った単一中断縫合を用いて、1mm遠位と1ミリ近位に任意で縫合を行います。リンパ節を後方に優しく引き戻し、細かいハサミで標的リンパ節を頭側から尾側方向に切除します。回腸結腸血管、回腸血管、空腸血管の遠位枝を観察し、血液供給が無事であることを確認しましょう。

第二リンパ節を切除するには、小腸を優しく内臓切除し、外側の腸を湿ったカーテンに配置します。盲腸は下方、近位結腸は上方、小腸は外科医の右側に位置します。次に、結腸に沿って縦方向に走り、回腸血管と空腸血管の合流点から始まる第二リンパ節ステーションを特定します。斜めの細い鉗子を使い、大腸管から離れた第2リンパ節を鈍く切り離します。

近傍リンパ節への側副流のリスクを理論的に低減するため、単線ナイロン縫合と細かい鉗子を用いて、リンパ節鎖に沿った単一中断縫合を、2番目のリンパ節の遠位1ミリメートル、近位1ミリメートルの縫合を用いて、任意の縫合結紮を行います。リンパ節を後方に優しく引き戻し、その後細かいハサミで頭側から尾側方向に向かって第二リンパ節を切除します。手術部位を点検して止血を確認しましょう。

第4リンパ節を切除するには、後部の固定点まで小腸全体を優しく内臓切除します。腸を湿ったカープの上に合わせ、盲腸は下側、近位結腸は上方、小腸は外科医の右側に置きます。第4リンパ節ステーションを特定します。これは遠位結腸のすぐ内側にあり、3番目のリンパ節の外側に位置します。

角度のある細かい鉗子や超細い尖りのハサミを使い、第四リンパ節を大腸血管や周囲の脂肪組織から鈍く切り離します。周辺のリンパ節への側副流の理論リスクを減らすために、通常はリンパ節から1ミリ離れた場所で、単線ナイロン縫合と細かい鉗子を用いて、各リンパ節に単一途切縫を組み合わせた任意の縫合結紮を行います。次に、第4リンパ節の頭側を優しく引き戻します。

細かいまたは超細細い尖りのハサミを使い、尾から頭側にかけてリンパ節の位置を切除します。第4リンパ節の第2リンパ節にも同じ手順を繰り返します。リンパ節を慎重に切り離し、必要に応じて縫合結紮を行い、切除してください。

手術室を調べて止血を確認してください。腹腔内に戻した後、蒸発性液体の損失を補うために体温に応じた無菌生理食塩水を1ミリリットル腹部に注入します。腹部を2層で閉じます。まず腹壁、次に6-0モノフィラメントポリプロピレン縫合糸で皮膚を縫い、ランニングパターンで閉じます。

腸系膜リンパ節摘出術で採取された組織は、PBSが即座に沈むことから一貫して低脂肪含有量のサンプルが得られました。フローサイトメトリー解析により、リンパ節摘出が成功し、腸系リンパデナンクト摘出由来のサンプルの95%以上がCD45陽性と確認されたのに対し、内臓脂肪組織対照群では7%にとどまりました。