Name: 再現性のある無細胞タンパク質合成のためのOnePot PUREおよび粗リボソーム生産の精製 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-22T13:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 26 s
Description: 学ぼう、OnePOT PUREシステムと粗リボソーム調製の標準化プロトコル。菌株の増殖制御とグリセロール濃度の最適化により、無細胞タンパク質合成の再現性と収率を向上させる方法です。

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<ol><li>Laohakunakorn, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bottom-up+construction+of+complex+biomolecular+systems+with+cell-free+synthetic+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Bottom-up construction of complex biomolecular systems with cell-free synthetic biology.</a> Front Bioeng Biotechnol. 8 (213), 1-26 (2020).</li>
<li>Silverman, A. D., Karim, A. S., Jewett, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+gene+expression%3A+an+expanded+repertoire+of+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Cell-free gene expression: an expanded repertoire of applications.</a> Nat Rev Genet. 21 (3), 151-170 (2019).</li>
<li>Shimizu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+translation+reconstituted+with+purified+components%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Cell-free translation reconstituted with purified components.</a> Nat Biotechnol. 19 (8), 751-755 (2001).</li>
<li>Shimizu, Y., Ueda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pure+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Pure technology.</a> Methods Mol Biol. 607, 11-21 (2010).</li>
<li>Wang, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+in+vivo+His-tagging+of+enzyme+pathways+for+in+vitro+single-pot+multienzyme+catalysis%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Multiplexed in vivo His-tagging of enzyme pathways for in vitro single-pot multienzyme catalysis.</a> ACS Synth Biol. 1 (2), 43-52 (2012).</li>
<li>Shepherd, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+design+and+synthesis+of+a+30-cistron+translation-factor+module%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">De novo design and synthesis of a 30-cistron translation-factor module.</a> Nucleic Acids Res. 45 (18), 10895-10905 (2017).</li>
<li>Villarreal, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+microbial+consortia+enable+rapid+assembly+of+pure+translation+machinery%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Synthetic microbial consortia enable rapid assembly of pure translation machinery.</a> Nat Chem Biol. 14 (1), 29-35 (2018).</li>
<li>Lavickova, B., Maerkl, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple%2C+robust%2C+and+low-cost+method+to+produce+the+PURE+cell-free+system%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">A simple, robust, and low-cost method to produce the PURE cell-free system.</a> ACS Synth Biol. 8 (2), 455-462 (2019).</li>
<li>Grasemann, L., Lavickova, B., Elizondo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OnePot+PURE+cell-free+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">OnePot PURE cell-free system.</a> J Vis Exp. (172), e62625(2021).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+protein+expression+in+the+One-Pot+PURE+system%3A+insights+into+reaction+composition+and+translation+efficiency%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Optimizing protein expression in the One-Pot PURE system: insights into reaction composition and translation efficiency.</a> ACS Synth Biol. 14 (5), 1496-1508 (2025).</li>
<li>Yadav, S., Perkins, A. J. P., Liyanagedera, S. B. W., Bougas, A., Laohakunakorn, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATP+regeneration+from+pyruvate+in+the+PURE+system%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">ATP regeneration from pyruvate in the PURE system.</a> ACS Synth Biol. 14 (1), 247-256 (2025).</li>
<li>Doerr, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+cell-free+RNA+and+protein+synthesis+with+minimal+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Biol%22%5BJournal%5D)">Modelling cell-free RNA and protein synthesis with minimal systems.</a> Phys Biol. 16 (2), 025001(2019).</li>
<li>Christodoulou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heteronuclear+NMR+investigations+of+dynamic+regions+of+intact+Escherichia+coli+ribosomes%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Heteronuclear NMR investigations of dynamic regions of intact Escherichia coli ribosomes.</a> PNAS. 101 (30), 10949-10954 (2004).</li>
<li>Garenne, D., Thompson, S., Brisson, A., Khakimzhan, A., Noireaux, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+all-E+coli+TXTL+toolbox+3.0%3A+new+capabilities+of+a+cell-free+synthetic+biology+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">The all-E coli TXTL toolbox 3.0: new capabilities of a cell-free synthetic biology platform.</a> Synth Biol. 6 (1), 1-8 (2021).</li>
<li>Romantseva, E., Alperovich, N., Ross, D., Lund, S. P., Strychalski, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+DNA+template+preparation+on+variability+in+cell-free+protein+production%5BTitle%5D)+AND+%22Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Effects of DNA template preparation on variability in cell-free protein production.</a> Synth Biol. 7 (1), 1-17 (2022).</li>
<li>Thornton, E. L., Boyle, J. T., Laohakunakorn, N., Regan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+protein+synthesis+as+a+method+to+rapidly+screen+machine+learning-generated+protease+variants%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell-free protein synthesis as a method to rapidly screen machine learning-generated protease variants.</a> ACS Synth Biol. 14 (5), 1710-1718 (2025).</li>
<li>Laohakunakorn, N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLaohakunakorn%2C+N+%22Cell-free+3PGA+energy+solution%22">Cell-free 3PGA energy solution</a>. , Protocols.io. (2020).</li>
<li>Kalpaxis, D. L., Theocharis, D. A., Coutsogeorgopoulos, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+studies+on+ribosomal+peptidyltransferase%3A+the+behaviour+of+the+inhibitor+blasticidin+S%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Biochem%22%5BJournal%5D)">Kinetic studies on ribosomal peptidyltransferase: the behaviour of the inhibitor blasticidin S.</a> Eur J Biochem. 154 (2), 267-271 (1986).</li>
<li>Blaha, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+functional+ribosomal+complexes+and+effect+of+buffer+conditions+on+tRNA+positions+observed+by+cryoelectron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Preparation of functional ribosomal complexes and effect of buffer conditions on tRNA positions observed by cryoelectron microscopy.</a> Methods Enzymol. 317, 292-309 (2000).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2倍のYouTubet</td><td>シグマ</td><td>Y2377-250G</td><td></td></tr><tr><td>アミノ酸</td><td>シグマ</td><td>LAA21-1KT</td><td></td></tr><tr><td>アンモニウム酢酸RNAseフリー</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>AM9070G</td><td></td></tr><tr><td>塩化アンモニウム</td><td>シグマ</td><td>09718-1KG</td><td></td></tr><tr><td>アンピシリン</td><td>シグマ</td><td>A8351-5G</td><td></td></tr><tr><td>BL21(DE3)適合した大腸菌</td><td>NEB</td><td>C2527H</td><td></td></tr><tr><td>ボトル、遠心分離機(ナルゲン)</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>3120-9500</td><td>ポリプロピレン共重合体ボトル</td></tr><tr><td>ボトル、ガラス(デュラン) 250 mL、500 mL、1 L、2 L</td><td>VWR</td><td>215-1593, 215-1594, 215-1595, 215-1596</td><td></td></tr><tr><td>ブラッドフォードアッセイ、クイックスタート 1x染色試薬</td><td>バイオ・ラッド</td><td>5000205</td><td></td></tr><tr><td>遠心機</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>ヘレウス・メガフュージ16R</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機、マイクロ</td><td>エッペンドルフ</td><td>5424R&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>クロマトグラフィーカラム</td><td>バイオ・ラッド</td><td>7321010</td><td></td></tr><tr><td>クレアチンリン酸</td><td>シグマ</td><td>27920</td><td></td></tr><tr><td>キュベット、セミマイクロ 1.6 mL</td><td>フィッシャーブランド</td><td>FB55147</td><td></td></tr><tr><td>ジナトリウム水素オルトホホスフェ酸二水和物</td><td>フィッシャー・ケミカル</td><td>S/4450/60</td><td></td></tr><tr><td>透析カセット、スライドAライザーG3、2 kDa MWCO、15 mL</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>A52962</td><td></td></tr><tr><td>二カリウム水素オルトリン酸無水</td><td>フィッシャー・ケミカル</td><td>P/5240/60</td><td></td></tr><tr><td>DTTノーウェイト</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>A39255</td><td></td></tr><tr><td>フィルターユニット、遠心3kDa MWCO Amicon Ultra 15</td><td>EMDミリポア</td><td>UFC900324</td><td></td></tr><tr><td>フラスコ、500 mL</td><td>VWR</td><td>214-1133</td><td></td></tr><tr><td>フラスコ、バッフル2.5 L&nbsp;</td><td>トゥネア</td><td>SS-5013</td><td></td></tr><tr><td>フォリン酸</td><td>シグマ</td><td>F7878-100MG</td><td></td></tr><tr><td>グリセロール</td><td>シグマ</td><td>G5516-1L</td><td></td></tr><tr><td>塩酸塩</td><td>フィッシャーブランド</td><td>H/1200/PB17</td><td></td></tr><tr><td>HEPESバッファー、1 M溶液、pH 7.3</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>BP299</td><td></td></tr><tr><td>イミダゾール</td><td>シグマ</td><td>I2399-500G</td><td></td></tr><tr><td>孵卵器</td><td>エッペンドルフ</td><td>ニューブランズウィック州イノバリッジ;42</td><td></td></tr><tr><td>IPTG</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>R0392</td><td></td></tr><tr><td>KOHペレット</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>P1767-500G</td><td></td></tr><tr><td>L-グルタミン酸 ヘミマグネシウム塩 四水和物</td><td>シグマ</td><td>49605-250G</td><td></td></tr><tr><td>L-グルタミン酸 一カリウム塩 一水和物</td><td>シグマ</td><td>49601-500G</td><td></td></tr><tr><td>酢酸マグネシウム四水和物</td><td>シグマ</td><td>M5661-50G</td><td></td></tr><tr><td>塩化マグネシウム</td><td>フルーカ</td><td>63020-1L</td><td></td></tr><tr><td>磁気攪拌装置</td><td>スチュアート</td><td>US152</td><td></td></tr><tr><td>ナノドロップ</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>ナノドロップ2000</td><td></td></tr><tr><td>NEBExpress Ni-NTA マグビーズ</td><td>NEB</td><td>S1423S</td><td></td></tr><tr><td>パラフィルム</td><td>シグマ</td><td>P7543-1EA</td><td></td></tr><tr><td>ピペット、多チャネル Eppendorf Research Plus 30-300 およびマイクロ;L</td><td>エッペンドルフ</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>プレートリーダー用のプレート接着シール</td><td>エクセルサイエンティフィック</td><td>STR-SEAL-PLT(無菌)</td><td></td></tr><tr><td>プレート通気性シール</td><td>スターラブ</td><td>E2796-3005</td><td></td></tr><tr><td>プレートホイルシール</td><td>エクセルサイエンティフィック</td><td>FCS-25</td><td></td></tr><tr><td>ナンバープレートリーダー</td><td>バイオテック</td><td>シナジーH1</td><td></td></tr><tr><td>プレートシェーカー</td><td>オールシェン</td><td>MBI100-4A</td><td></td></tr><tr><td>プレート、384井戸</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>242764</td><td></td></tr><tr><td>プレート、96深井戸 1 mL</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>736-0601</td><td></td></tr><tr><td>板、96深井2 mL</td><td>サーステット</td><td>82.1972.002</td><td></td></tr><tr><td>プレート、96ウェルPCR</td><td>サーステット</td><td>721,978</td><td></td></tr><tr><td>プレート、光学96井戸</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>10057581</td><td></td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td>シグマ</td><td>P5405-500G</td><td></td></tr><tr><td>二水素オルトリン酸カリウム</td><td>フィッシャー・ケミカル</td><td>P/4800/53</td><td></td></tr><tr><td>タンパク質抽出(バグバスター)試薬</td><td>EMDミリポア</td><td>70584-3</td><td></td></tr><tr><td>タンパク質精製樹脂(cOmplete)</td><td>ロシュ</td><td>5893682001</td><td></td></tr><tr><td>ロティサリーシェイカー</td><td>スターラブ</td><td>RM-マルチ1</td><td></td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>フィッシャー・ケミカル</td><td>S/3105/70</td><td></td></tr><tr><td>ソニックプローブ、フィッシャーブランド 15-50 mL</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>12931181</td><td></td></tr><tr><td>ソニケーター</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>FB120</td><td></td></tr><tr><td>分光 光度 計</td><td>ジェンウェイ</td><td>ジェノバ・プラス</td><td></td></tr><tr><td>スペルミジン</td><td>シグマ</td><td>S2626-1G</td><td></td></tr><tr><td>TCEP 0.5 M</td><td>スペルコ</td><td>646547</td><td></td></tr><tr><td>サーモフィッシャーNTP、トリスバッファー</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>R1481</td><td></td></tr><tr><td>大腸菌からのtRNA MRE600</td><td>ロシュ</td><td>10109541001</td><td></td></tr><tr><td>トリプトン</td><td>フォーミディアム</td><td>TRP02</td><td></td></tr><tr><td>チューブ、0.2 mL PCRグレード</td><td>サーステット</td><td>72,737,002</td><td></td></tr><tr><td>チューブ、ビジュー ステリリン 7 mL ポリスチレン</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>129A</td><td></td></tr><tr><td>チューブ、円錐形(ファルコン)15 mL</td><td>サーステット</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>チューブ、円錐形(ファルコン)50 mL</td><td>サーステット</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>チューブ、マイクロ遠心分離機(エッペンドルフ)1.5 mL</td><td>サーステット</td><td>72.690.001</td><td></td></tr><tr><td>チューブ、マイクロ遠心分離機(エッペンドルフ)2 mL</td><td>サーステット</td><td>72.695.700</td><td></td></tr><tr><td>チューブ、S100遠心分離&nbsp;</td><td>ベックマン・コールター</td><td>355619</td><td></td></tr><tr><td>チューブ、S30遠心分離&nbsp;</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>3118-0050</td><td></td></tr><tr><td>超遠心分離機</td><td>ベックマン・コールター</td><td>オプティマ XPN-100</td><td></td></tr><tr><td>超遠心分離機ローター</td><td>ベックマン・コールター</td><td>70Ti固定角ローター</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure DNase/RNaseフリー蒸留水</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>10977049</td><td></td></tr><tr><td>渦巻</td><td>VWR</td><td>444-2791</td><td></td></tr><tr><td>酵母抽出物</td><td>オキソイド</td><td>LP0021T</td><td></td></tr></tbody></table>

再現性のある無細胞タンパク質合成のためのonepot pureおよび粗リボソーム生産の精製

Refinement of OnePot PURE and Crude Ribosome Production for Reproducible Cell-free Protein Synthesis

再現性のある無細胞タンパク質合成のためのOnePot PUREおよび粗リボソーム生産の精製

Recent advances have enabled the Protein synthesis Using Recombinant Elements (PURE) cell-free system to be produced in individual laboratories ...

OnePOT PUREシステムと粗リボソーム製剤を改良し、再現性とアクセス性を向上させ、より多くの研究室が合成生物学研究のための堅牢な細胞フリーシステムの構築とトラブルシューティングを可能にしました。実験上の課題には、バッチごとの変動性、発現ベクターの不安定性、成長遅い株などがあり、これらはすべて社内でPUREシステムを構築する際の再現性と一貫した性能を妨げています。菌株の増殖、接種、グリセロール濃度の慎重な制御が、OnePOT PURおよびリボソーム製剤の再現性と収量を大幅に向上させることを、ユーザーおよび生物複製体間で明らかにしました。PUREやリボソームを社内で調製するための再現可能でアクセスしやすいプロトコルの欠如に取り組み、合成生物学研究における自己抵抗性の採用における技術的障壁を克服する研究室を支援します。当プロトコルは、成長条件とグリセロール使用を標準化することで再現性と柔軟性を高め、超遠心分離のみでリボソーム調製を効率化し、より複雑または高コストな精製方法を回避します。まず、凍結したBL21細胞ペレットを氷で解凍し、清潔な円錐形チューブにリボソームバッファーA50ミリリットルを加えます。ピペットを使って、円錐形チューブからリボソームバッファーAを100マイクロリットル取り出し、ノーウェイトDTTバイアルに加えます。DTTペレットが完全に溶けるまで優しく吸引し、0.5モルのDTTストック溶液を作ります。次に、0.5モルのDTTストック溶液100マイクロリットルを50ミリリットルの円錐形チューブに戻し、チューブを氷の上に置きます。ボルテックスミキサーを使い、解凍した細胞ペレットをリボソームバッファーAにDTTで再懸浮させ、細胞ペレット1グラムあたり2ミリリットルの比率で再懸浮させます。再懸濁したサンプルを円錐形のチューブにまとめ、総スラリー容積が10ミリリットルであることを確認します。次に、10ミリリットルのスラリーを標識された円錐形チューブ内の5ミリリットルのサンプルを2つに均等に分けます。円錐形の管をスタンドに固定し、冷却した超音波検査プローブで氷水浴で細胞を溶解します。ソニックケーターを振幅30%に設定し、20秒オン・20秒オフのサイクルで合計10サイクルを切り替えます。超音波処理後、溶解サンプルをリボソームバッファAとDTTで25ミリリットルまで補充し、短時間ボルテックスで混合します。25ミリリットルの溶解サンプルを2本の事前冷却済みS30遠心分離管に移します。チューブを遠心分離機に入れ、30,000Gで4度Cの状態で1時間回転させます。その後、膜汚染を防ぐために、各S30チューブから最大75%のペレットフリー上清液を慎重に回収します。回収した上澄液を2本のクリーンな予冷S30チューブに移します。チューブを再度30分間遠心分離した後、ペレ

refinement-onepot-pure-crude-ribosome-production-for-reproducible

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Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

CO浄化ヌクレアーゼ及びプロテアーゼによって従来の方法で精製した真核生物リボソームの調製品の汚染は否定的に下流の生化学的および構造解析に影響を与えます。迅速かつ簡単なクロマトグラフィー精製法は、モデル系として、酵母のリボソームを使用してこの問題を解決するために使用されます。...

高活性酵母のリボソームのクロマトグラフィー精製

このプロトコルの詳細手順、コスト、および大腸菌を生成に必要な装置・細胞抽出液をベースし、4 日間以内の in...

大腸菌の無細胞タンパク質合成のベース: 堅牢な柔軟性とアクセス可能なプラットフォーム技術のためのプロトコル

このプロトコルは、RNAおよびタンパク質生産合成細胞のボトムアップ調製のための方法、材料、装置およびステップを記述する。合成細胞の内部水質コンパートメントには、脂質二重層内に封入されたS30細菌リセート(すなわち、安定リポソーム)を含み、油中水エマルジョン移動法を用いた。...

細胞を含まない細菌抽出物、リポソーム、エマルジョン移動を用いた合成細胞の調製

標準的な実験装置を用いて組換え純粋な無細胞TX-TLシステムを製造するための迅速かつ費用対効果の高い方法を提示します。...

ワンポット純粋な無細胞システム

この研究は、クローニングや生きている細胞を使用せずに、合成遺伝子断片からタンパク質スクリーニングキャンペーンのための大量(μg-mg)量のDNAを作成するためのプロトコルを記述しています。最小のテンプレートは酵素的に消化され、円形化され、等熱転がり円増幅を使用して増幅される。無細胞発現反応は、非精製物で行うことができる。...

無細胞システムを用いたタンパク質プロトタイピングのための、最小の線形テンプレートの増幅のための迅速で酵素的な方法

この研究は、 大腸菌(E.coli )からの細胞抽出物の調製とそれに続く無細胞タンパク質合成(CFPS)反応を24時間未満で記載する。無細胞自己誘導(CFAI)プロトコルの説明は、研究者の監督を減らし、得られる細胞抽出物の量を増やすために行われた改善を詳述する。...

無細胞自己誘導ワークフローを使用した24時間以内に細胞から無細胞タンパク質合成へ

このプロトコルは、合成細胞の構築に使用される無細胞タンパク質合成(CFPS)システムについて説明しています。主要なステージの概要と、さまざまなマイクロコンパートメントでの代表的な結果を示します。このプロトコルは、合成細胞コミュニティの多様な研究室のベストプラクティスを確立し、合成細胞開発の進歩を促進することを目的としています。...

合成細胞を構築するための無細胞タンパク質合成システム

単分子層保護のクラスタ（MPCは）として知られているAlkanethiolate安定化金コロイドは、合成の特徴、とのような単純な酸化還元蛋白質の蛋白質の単分子層の電気化学のための吸着インタフェースなどの薄膜に組み立てられる...

合成、組立、および単分子膜のキャラクタリゼーションは、タンパク質単分子層の電気化学のための金ナノ粒子膜を保護

当社は、分割インテイン媒介タンパク質ヒドロゲルの合成を提示する。このヒドロゲルのビルディングブロックは、それぞれが分割インテインの架橋剤及び半分となる三量体タンパク質のサブユニットを含む二つのタンパク質の共重合体である。二つのタンパク質の共重合体の混合は、ヒドロゲルに自己組織化ペプチドユニットを得インテイントランススプライシング反応をトリガします。このヒドロゲルは、有機溶媒に対応して、高度なpHおよび温度安定性であり、簡単に機能的な球状タンパク質が組み込まれています。...

インテイン媒介人工タンパク質ヒドロゲルの合成

密閉可能なフェムトリットル体積の反応チャンバーを持つ微細加工されたデバイスが説明されています。このレポートには、遺伝子発現におけるクラウディングと閉じ込めの役割を理解する目的で、これらのチャンバー内に無細胞タンパク質合成反応物を封入するためのプロトコルが含まれています。...

無細胞生物学のための密封可能なフェムトリットル商工配列

学ぼう、OnePOT PUREシステムと粗リボソーム調製の標準化プロトコル。菌株の増殖制御とグリセロール濃度の最適化により、無細胞タンパク質合成の再現性と収率を向上させる方法です。

再現性のある無細胞タンパク質合成のためのOnePot PUREおよび粗リボソーム生産の精製

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