Name: 低密度リポタンパク質の存在下での好中球細胞外トラップを用いた血管内皮細胞の刺激 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: 学ぶ 好中球細胞外トラップと低密度リポタンパク質を用いた血管内皮細胞刺激法。ヒト大動脈内皮細胞における炎症応答のシナジー効果を解析し、心血管疾患治療への応用可能性を探る。

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<ol><li>Papayannopoulos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+in+immunity+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps in immunity and disease.</a> Nat Rev Immunol. 18 (2), 134-147 (2018).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+in+homeostasis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps in homeostasis and disease.</a> Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 235(2024).</li>
<li>Megens, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+luminal+neutrophil+extracellular+traps+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Presence of luminal neutrophil extracellular traps in atherosclerosis.</a> Thromb Haemost. 107 (3), 597-598 (2012).</li>
<li>Meher, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+role+of+IL+%28Interleukin%29-1%CE%B2+in+neutrophil+extracellular+trap+formation+and+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Novel role of IL (Interleukin)-1β in neutrophil extracellular trap formation and abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 38 (4), 843-853 (2018).</li>
<li>Borissoff, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+levels+of+circulating+DNA+and+chromatin+are+independently+associated+with+severe+coronary+atherosclerosis+and+a+prothrombotic+state%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Elevated levels of circulating DNA and chromatin are independently associated with severe coronary atherosclerosis and a prothrombotic state.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (8), 2032-2040 (2013).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid-specific+deletion+of+Peptidylarginine+Deiminase+4+mitigates+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Myeloid-specific deletion of Peptidylarginine Deiminase 4 mitigates atherosclerosis.</a> Front Immunol. 9, 1680(2018).</li>
<li>Zhai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+traps+from+activated+vascular+smooth+muscle+cells+drive+the+progression+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Extracellular traps from activated vascular smooth muscle cells drive the progression of atherosclerosis.</a> Nat Commun. 13 (1), 7500(2022).</li>
<li>Abdo, A. I., Rayner, B. S., van Reyk, D. M., Hawkins, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+lipoprotein+modified+by+myeloperoxidase+oxidants+induces+endothelial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Low-density lipoprotein modified by myeloperoxidase oxidants induces endothelial dysfunction.</a> Redox Biol. 13, 623-632 (2017).</li>
<li>Mueller, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+lipoprotein+%28a%29+Isolation+from+a+small+volume+of+plasma+with+applications+for+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A method for lipoprotein (a) Isolation from a small volume of plasma with applications for clinical research.</a> Sci Rep. 12 (1), 9138(2022).</li>
<li>Hosseinzadeh, A., Messer, P. K., Urban, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+redox-cycling+nitroxide+tempol+inhibits+NET+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Stable redox-cycling nitroxide tempol inhibits NET formation.</a> Front Immunol. 3, 391(2012).</li>
<li>Gupta, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+endothelial+cells+induce+neutrophil+extracellular+traps+and+are+susceptible+to+NETosis-mediated+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Activated endothelial cells induce neutrophil extracellular traps and are susceptible to NETosis-mediated cell death.</a> FEBS Lett. 584 (14), 3193-3197 (2010).</li>
<li>Obama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+action+of+oxidized+low-density+lipoproteins+and+neutrophils+on+endothelial+inflammatory+responses+through+neutrophil+extracellular+trap+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cooperative action of oxidized low-density lipoproteins and neutrophils on endothelial inflammatory responses through neutrophil extracellular trap formation.</a> Front Immunol. 10, 1899(2019).</li>
<li>Schröter, J., Schiller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlorinated+phospholipids+and+fatty+acids%3A+Patho%29physiological+relevance%2C+potential+toxicity%2C+and+analysis+of+lipid+chlorohydrins%5BTitle%5D)+AND+%22Oxid+Med+Cell+Longev%22%5BJournal%5D)">Chlorinated phospholipids and fatty acids: Patho)physiological relevance, potential toxicity, and analysis of lipid chlorohydrins.</a> Oxid Med Cell Longev. 2016, 8386362(2016).</li>
<li>Nose, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crucial+role+of+perilipin-3+%28TIP47%29+in+formation+of+lipid+droplets+and+PGE2+production+in+HL-60-derived+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Crucial role of perilipin-3 (TIP47) in formation of lipid droplets and PGE2 production in HL-60-derived neutrophils.</a> PLoS One. 8 (8), e71542(2013).</li>
<li>Manda-Handzlik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+agents+differentiating+HL-60+cells+toward+granulocyte-like+cells+on+their+ability+to+release+neutrophil+extracellular+traps%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The influence of agents differentiating HL-60 cells toward granulocyte-like cells on their ability to release neutrophil extracellular traps.</a> Immunol Cell Biol. 96 (4), 413-425 (2018).</li>
<li>Ermert, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+neutrophil+extracellular+traps+in+microbial+infections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Innate+Immun%22%5BJournal%5D)">Mouse neutrophil extracellular traps in microbial infections.</a> J Innate Immun. 1 (3), 181-193 (2009).</li>
<li>Ohinata, H., Obama, T., Makiyama, T., Watanabe, Y., Itabe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-density+lipoprotein+suppresses+neutrophil+extracellular+traps+enhanced+by+oxidized+low-density+lipoprotein+or+oxidized+phospholipids%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">High-density lipoprotein suppresses neutrophil extracellular traps enhanced by oxidized low-density lipoprotein or oxidized phospholipids.</a> Int J Mol Sci. 23 (22), 13992(2022).</li>
<li>Pertiwi, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+traps+derived+from+macrophages%2C+mast+cells%2C+eosinophils%2C+and+neutrophils+are+generated+in+a+time-dependent+manner+during+atherothrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Extracellular traps derived from macrophages, mast cells, eosinophils, and neutrophils are generated in a time-dependent manner during atherothrombosis.</a> J Pathol. 247 (4), 505-512 (2019).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+roles+of+eosinophils+in+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Differential roles of eosinophils in cardiovascular disease.</a> Nat Rev Cardiol. 22 (3), 165-182 (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.1%ポリ-L-リジン</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>P8920-100MLです</td><td></td></tr><tr><td>10cm皿</td><td>コーニング</td><td>430591</td><td></td></tr><tr><td>12ウェル組織培養プレート</td><td>隼</td><td>353043</td><td></td></tr><tr><td>2%ゼラチン</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>G1393-20ML型</td><td></td></tr><tr><td>4PCチューブ</td><td>ヒマック</td><td>S404332A</td><td></td></tr><tr><td>オールトランスレチノイン酸</td><td>和光</td><td>188-01113</td><td>どのベンダーでも代用可能</td></tr><tr><td>セルロース透析チューブ</td><td>ミスミグループ株式会社</td><td>0327-23-37-07 (UC18-32-100)</td><td>どのベンダーでも代用可能</td></tr><tr><td>EDTAの</td><td>道珍島</td><td>345-01865</td><td>どのベンダーでも代用可能</td></tr><tr><td>内皮細胞増殖培地 2 キット</td><td>プロモセル</td><td>C-22111</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>ギブコ</td><td>10270-106</td><td>どのベンダーでも代用可能</td></tr><tr><td>ヘパリンナトリウム(5,000単位/5mL)</td><td>持田製薬株式会社</td><td></td><td>どのベンダーでも代用可能</td></tr><tr><td>高速冷凍遠心分離機</td><td>トミー</td><td>SRX-201型</td><td>加速:9、減速:7</td></tr><tr><td>ヒト大動脈内皮細胞</td><td>ロンザ</td><td>CC-2535</td><td></td></tr><tr><td>KBr</td><td>和光</td><td>168-03475</td><td>どのベンダーでも代用可能</td></tr><tr><td>キーエンス顕微鏡ソフトウェア</td><td>キーエンス</td><td>BZ-IIアナライザー</td><td></td></tr><tr><td>マイクロ超遠心分離機</td><td>ヒマック</td><td>CS150GX</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>オリンポス</td><td>CK40</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>キーエンス</td><td>BZ-9000</td><td>タイムラプスイメージング用(オプション)</td></tr><tr><td>顕微鏡カメラ</td><td>ニコン</td><td>DS-Fi3 (英語)</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡カメラソフトウェア</td><td>ニコン</td><td>DS-L4</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン</td><td>ギブコ</td><td>15140-122 100ML</td><td>どのベンダーでも代用可能</td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水(&times;10)</td><td></td><td></td><td>2.6 gのNaH2PO4&middot;2H2O、29 g Na2HPO4&middot;12H2O、80 g の NaCl および 2.0 g の KCl を蒸留水中に溶かし、1 L の容量に調整します。(どのベンダーでも代用可能)</td></tr><tr><td>PMA(ホルボール12-ミリスチン酸13-酢酸)</td><td>和光</td><td>162-23591</td><td>どのベンダーでも代用可能</td></tr><tr><td>試薬パック</td><td>ロンザ</td><td>CC-5034</td><td>(CC-5022:HEPES緩衝生理食塩水、CC-5012:トリプシン/ EDTA、CC-5002:トリプシン中和溶液)&nbsp;</td></tr><tr><td>ローター</td><td>ヒマック</td><td>S100AT6-0242</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640(フェノールレッド入り)</td><td>和光</td><td>189-02025</td><td>どのベンダーでも代用可能</td></tr><tr><td>RPMI-1640(フェノールレッド無し)</td><td>和光</td><td>186-02155</td><td>どのベンダーでも代用可能</td></tr><tr><td>T-25フラスコ</td><td>コーニング</td><td>3275</td><td></td></tr></tbody></table>

低密度リポタンパク質の存在下での好中球細胞外トラップを用いた血管内皮細胞の刺激

Stimulation of Vascular Endothelial Cells Using Neutrophil Extracellular Traps in the Presence of Low-Density Lipoprotein

カイロミクロンを除去した後、続いて連続超遠心分離によりヒト血漿からVLDL画分を抽出した後、ヒト血漿をKBr溶液と混合して密度をd = 1.063に調整しました。このステップでは、残りの沈殿剤は溶液に完全に溶解せず、気泡を生成する激しい混合を回避してLDLを無傷に保ちました。超遠心分離後、LDLは最上層の黄橙色9(図1)によって視覚的に評価され、そのすぐ下にある無色の溶液と区別されました。通常、PBS/EDTAに対して採取したLDL画分の透析後、45〜50mLのヒト血液から約23〜25mLの血漿を採取し、約4mg/mLのタンパク質を含む4.3mLのLDL画分を得ることができる。
HL-60細胞を2μM AtRAで処理すると、細胞サイズが減少した好中球様細胞(dHL-60)への細胞の分化が誘導されました。特に、dHL-60の調製では、dHL-60細胞が接着細胞の表面に付着する傾向があり、細胞収量の低下につながるため、接着細胞用の培養皿の使用は避けるべきである。...

Neutrophil extracellular traps (NETs) have emerged as causative factors in various non-infectious diseases and have been implicated in cardiovascular ...

stimulation-vascular-endothelial-cells-using-neutrophil-extracellular

Research

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

このビデオは、好中球の細胞外トラップ(NET)を生成および単離するin...

ヒト好中球細胞外トラップを作製するIn Vitro技術

このビデオでは、抗好中球細胞質抗体を含む患者血清を使用して、事前に標識された好中球における好中球細胞外トラップまたはNETの誘導と可視化を示しています。さらに、不透過性DNA色素と蛍光顕微鏡を用いることで、NETsの可視化が可能です。...

標識済み好中球における好中球細胞外トラップの誘導と可視化

このビデオは、TNF-α、PMA、HOCLなどのさまざまな炎症刺激を使用して、ヒト単球由来マクロファージのマクロファージ細胞外トラップ(MET)のin...

マクロファージ細胞外トラップのin vitro刺激と可視化

感染部位における活性化内皮への好中球の順守は、ホストの炎症反応に不可欠なコンポーネントです。を可能にした好中球結合アッセイは、この報告書に記載...

定量的な<em&gt;インビトロ</em静的な条件の下で活性化された初代ヒト微小血管内皮細胞への好中球の接着を測定するために&gt;アッセイ

以下のプロトコールでは、容易に入手可能な試薬を用いて、ヒト全血からの好中球細胞外トラップ（のNET）を単離するための非常に簡単な方法を記載している。次に、単離されたNETは、癌細胞を用いたin vitro接着アッセイにおいて使用することができる方法を示す。...

簡体ヒト好中球細胞外トラップ（のNET）の単離と取扱い

脂質は細胞機能に重要な役割を果たしていることが知られています。ここでは、好中球細胞外トラップ形成の基礎となるメカニズムのより良い理解を得るために、HPTLC及びHPLCの両方を使用することにより、コレステロールレベルに重点を置いて、好中球の脂質組成を決定するための方法について説明します。...

脂質好中球の変化と好中球細胞外トラップのその後の形成を研究する方法

ひと低密度好中球 (LDN) 術後の腹腔洗浄液から回収が大規模な好中球細胞外トラップ (網)...

低密度の好中球によって生成された好中球細胞外トラップは仲介する腹腔洗浄液から得られた腫瘍細胞の増殖と添付ファイル

ここで提示するプロトコルは、顕微鏡法および蛍光染色を用いて生細胞培養におけるマクロファージ細胞外トラップ(MET)産生を検出するプロトコルである。このプロトコルは、免疫蛍光染色によって特異的なMETタンパク質マーカーを調べるためにさらに拡張することができる。...

分化ヒト単球由来マクロファージにおける細胞外トラップ放出のIn Vitro刺激と可視化

ここに提示されるのは、 in vitro...

微生物・化学刺激による好中球細胞外トラップの形態・組成解析

この定義されたプロトコルは、 in...

ヒト好中球細胞外トラップ放出のリアルタイムハイスループット顕微鏡定量とアンタゴニストの薬理学の評価

低密度好中球の効率的な精製のための迅速な磁気マイクロビーズ法

学ぶ 好中球細胞外トラップと低密度リポタンパク質を用いた血管内皮細胞刺激法。ヒト大動脈内皮細胞における炎症応答のシナジー効果を解析し、心血管疾患治療への応用可能性を探る。

低密度リポタンパク質の存在下での好中球細胞外トラップを用いた血管内皮細胞の刺激

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