Name: 蛍光脂肪酸類似体を用いた内皮脂肪酸取り込みの定量化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-15T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 3 s
Description: 学ぶ BODIPY蛍光類似体を用いた内皮細胞の脂肪酸取り込み定量化法。ラクテートや3-ヒドロキシイソ酪酸の影響を解析し、代謝性疾患の治療標的発見に貢献する研究手法を習得できます。

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<ol><li>Schwenk, R. W., Holloway, G. P., Luiken, J. J. F. P., Bonen, A., Glatz, J. F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+transport+across+the+cell+membrane%3A+regulation+by+fatty+acid+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins+Leukot+Essent+Fatty+Acids%22%5BJournal%5D)">Fatty acid transport across the cell membrane: regulation by fatty acid transporters.</a> Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids. 82 (4-6), 149-154 (2010).</li>
<li>He, Q., Chen, Y., Wang, Z., He, H., Yu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+uptake%2C+metabolism+and+sensing+of+long-chain+fatty+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci+%28Landmark+Ed%29%22%5BJournal%5D)">Cellular uptake, metabolism and sensing of long-chain fatty acids.</a> Front Biosci (Landmark Ed). 28 (1), 10(2023).</li>
<li>Mashek, D. G., Coleman, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+fatty+acid+uptake%3A+the+contribution+of+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Lipidol%22%5BJournal%5D)">Cellular fatty acid uptake: the contribution of metabolism.</a> Curr Opin Lipidol. 17 (3), 274-278 (2006).</li>
<li>Jang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+branched-chain+amino+acid+metabolite+drives+vascular+fatty+acid+transport+and+causes+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A branched-chain amino acid metabolite drives vascular fatty acid transport and causes insulin resistance.</a> Nat Med. 22 (4), 421-426 (2016).</li>
<li>Hagberg, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+B+controls+endothelial+fatty+acid+uptake%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor B controls endothelial fatty acid uptake.</a> Nature. 464 (7290), 917-921 (2010).</li>
<li>Hwangbo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+APLNR+regulates+tissue+fatty+acid+uptake+and+is+essential+for+apelin%27s+glucose-lowering+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Endothelial APLNR regulates tissue fatty acid uptake and is essential for apelin's glucose-lowering effects.</a> Sci Transl Med. 9 (407), eaad4000(2017).</li>
<li>Ibrahim, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-stimulated+adipocytes+secrete+lactate+to+promote+endothelial+fatty+acid+uptake+and+transport%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Insulin-stimulated adipocytes secrete lactate to promote endothelial fatty acid uptake and transport.</a> J Cell Sci. 135 (5), jcs258964(2022).</li>
<li>Kuo, A., Lee, M. Y., Sessa, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplet+biogenesis+and+function+in+the+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Lipid droplet biogenesis and function in the endothelium.</a> Circ Res. 120 (8), 1289-1297 (2017).</li>
<li>Ibrahim, A., Arany, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+endothelium+buffer+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Does endothelium buffer fat.</a> Circ Res. 120 (8), 1219-1221 (2017).</li>
<li>Kim, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+lipid+droplets+suppress+eNOS+to+link+high-fat+consumption+to+blood+pressure+elevation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Endothelial lipid droplets suppress eNOS to link high-fat consumption to blood pressure elevation.</a> J Clin Invest. 133 (24), e173160(2023).</li>
<li>Dubikovskaya, E., Chudnovskiy, R., Karateev, G., Park, H. M., Stahl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+long-chain+fatty+acid+uptake+into+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Measurement of long-chain fatty acid uptake into adipocytes.</a> Methods Enzymol. 538, 107-134 (2014).</li>
<li>Watkins, O. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+13C-labeled+fatty+acids+in+term+human+placental+explants+by+liquid+chromatography-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Metabolism of 13C-labeled fatty acids in term human placental explants by liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Endocrinology. 160 (6), 1394-1408 (2019).</li>
<li>Spangenburg, E. E., Pratt, S. J. P., Wohlers, L. M., Lovering, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+BODIPY+%28493%2F503%29+to+visualize+intramuscular+lipid+droplets+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Use of BODIPY (493/503) to visualize intramuscular lipid droplets in skeletal muscle.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 598358(2011).</li>
<li>Fraser, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+uptake+in+diabetic+rat+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Fatty acid uptake in diabetic rat adipocytes.</a> Mol Cell Biochem. 167 (1-2), 51-60 (1997).</li>
<li>Ibrahim, A., Yucel, N., Kim, B., Arany, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+mitochondrial+ATP+production+regulates+endothelial+fatty+acid+uptake+and+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Local mitochondrial ATP production regulates endothelial fatty acid uptake and transport.</a> Cell Metab. 32 (2), 309-319.e7 (2020).</li>
<li>Mehling, M., Tay, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Microfluidic cell culture.</a> Curr Opin Biotechnol. 25, 95-102 (2014).</li>
<li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Organoids.</a> Nat Rev Methods Primers. 2 (1), 1-21 (2022).</li>
<li>Maiullari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+breast+cancer+dynamics+through+modulable+small+vessel+environment+bioreactor+%28sVEB%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Modeling breast cancer dynamics through modulable small vessel environment bioreactor (sVEB).</a> Biomaterials. 323, 123441(2025).</li>
<li>Murphy, A. R., Franco, R. A., Allenby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabricating+microfluidic+co-cultures+of+immortalized+cell+lines+uncovers+robust+design+principles+for+the+simultaneous+formation+of+patterned%2C+vascularized%2C+and+stem+cell-derived+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Fabricating microfluidic co-cultures of immortalized cell lines uncovers robust design principles for the simultaneous formation of patterned, vascularized, and stem cell-derived adipose tissue.</a> Small. , e2501834(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>3-ヒドロキシイソブチレート(3-HIB)</td><td>ケイマン・ケミカルズ</td><td>26105</td><td>陽性コントロール、最終濃度5または20 mM。</td></tr><tr><td>96枚の黒い透明底ポリスチレンマイクロプレート</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>CLS3603-48EA</td><td>プレートセルのアッセイのために</td></tr><tr><td>ボディピー FL C12(ボディピー-FA)</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>D3822</td><td>緑色蛍光長鎖脂肪酸</td></tr><tr><td>ボディピーFL C16(ボディピー-FA)</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>D3821</td><td>緑色蛍光の非常に長鎖脂肪酸</td></tr><tr><td>牛血清アルブミン溶液</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>A9205-50ML</td><td>ボディピー:BSA複合体の準備に使われます</td></tr><tr><td>ジメチルスルホキシド(DMSO)</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>D2650</td><td>医薬品株の溶剤</td></tr><tr><td>使い捨てピペット貯水池</td><td>VWR</td><td>89094-680</td><td>細胞にピペットで送り込むさまざまな溶液を含んでいます</td></tr><tr><td>ダルベッコ改良イーグルS Medium</td><td>コーニング・ライフサイエンス</td><td>10-013-CV</td><td>EA.hy926セル用のメディア</td></tr><tr><td>EA.hy926 セル</td><td>ATCC</td><td>CRL-2922&nbsp;</td><td>不死化内皮細胞ハイブリッド系統</td></tr><tr><td>EGM-2 内皮細胞成長培地-2 BulletKit</td><td>ロンザ</td><td>CC-3162</td><td>HUVEC用メディア</td></tr><tr><td>胎児用牛血清(FBS)&nbsp;</td><td>VWR</td><td>97068-085</td><td>EGM-2およびDMEMに10%の補足</td></tr><tr><td>蛍光マイクロプレートリーダー</td><td>様々な</td><td>該当なし</td><td>蛍光測定が可能なマイクロプレートリーダーは</td></tr><tr><td>ゼラチン溶液</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>G1393-100ml</td><td>0.1%の作業濃度でプレートをコーティングするために使われます</td></tr><tr><td>Hoechst 33342 ソリューション</td><td>生命科学</td><td>62249</td><td>細胞正規化のための核染色(4 & μ;M)</td></tr><tr><td>ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVECs)</td><td>ロンザ</td><td>C2519A</td><td>一次ヒト内皮細胞</td></tr><tr><td>マルチチャネルピペット</td><td>VWR</td><td>76627-768</td><td>96ウェルプレートへのピペッティング用</td></tr><tr><td>ニクロスアミド&nbsp;</td><td>ミリポール・シグマ</td><td>N3510-50G</td><td>ネガティブコントロール、1&mu;M&nbsp;最終集中</td></tr><tr><td>PBS、カルシウムとマグネシウム配合</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>21031CV</td><td>処理の準備や洗浄バッファー(BSA使用)に使用されます。</td></tr><tr><td>カルシウムとマグネシウムなしのPBS</td><td>ジェネシー・サイエンティフィック</td><td>25-508</td><td>ゼラチン希釈、ホエスト染色、一般的な洗浄用</td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>15140122</td><td>EGM-2およびDMEMに1%のサプリメントが加えられています</td></tr><tr><td>L-乳酸ナトリウム</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>L7022-5G</td><td>陽性コントロール、最終濃度5または20 mM。</td></tr><tr><td>トリパンブルー溶液</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>T8154-20ML</td><td>細胞外蛍光消光に0.08%で使用</td></tr><tr><td>真空ろ過システム、500ml PES膜、0.45&micro;m</td><td>ジェンクローン</td><td>25-227</td><td>ゼラチン溶液を滅菌するために</td></tr></tbody></table>

蛍光脂肪酸類似体を用いた内皮脂肪酸取り込みの定量化

Quantification of Endothelial Fatty Acid Uptake using Fluorescent Fatty Acid Analogs

Endothelial cells (ECs) play a central role in regulating fatty acid (FA) transport from the bloodstream into metabolic tissues, yet tools to quantify EC ...

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Research

JoVE Journal

Biology

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蛍光脂肪酸類似体を用いた内皮脂肪酸取り込みの定量化

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