Name: 壊死性小腸炎の新生児マウスモデルと免疫細胞プロファイリングのためのLamina Propria分離 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T14:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 13 s
Description: 学ぶ新生児マウスにおける壊死性小腸炎誘導法とlamina propria免疫細胞のフローサイトメトリーによるプロファイリング手法。このプロトコルはヒト疾患を再現し、腸管免疫応答の詳細な解析を可能にする。

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<ol><li>Alsaied, A., Islam, N., Thalib, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+incidence+of+necrotizing+enterocolitis%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Global incidence of necrotizing enterocolitis: A systematic review and meta-analysis.</a> BMC Pediatr. 20 (1), 344(2020).</li>
<li>Warner, B. B., Tarr, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotizing+enterocolitis+and+preterm+infant+gut+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Fetal+Neonatal+Med%22%5BJournal%5D)">Necrotizing enterocolitis and preterm infant gut bacteria.</a> Semin Fetal Neonatal Med. 21 (6), 394-399 (2016).</li>
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<li>Leaphart, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+role+for+TLR4+in+the+pathogenesis+of+necrotizing+enterocolitis+by+modulating+intestinal+injury+and+repair1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A critical role for TLR4 in the pathogenesis of necrotizing enterocolitis by modulating intestinal injury and repair1.</a> J Immunol. 179 (7), 4808-4820 (2007).</li>
<li>Hackam, D. J., Sodhi, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor-mediated+intestinal+inflammatory+imbalance+in+the+pathogenesis+of+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor-mediated intestinal inflammatory imbalance in the pathogenesis of necrotizing enterocolitis.</a> Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 6 (2), 229-238.e1 (2018).</li>
<li>Sulistyo, A., Rahman, A., Biouss, G., Antounians, L., Zani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+necrotizing+enterocolitis%3A+Review+of+the+literature+and+state+of+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Innov+Surg+Sci%22%5BJournal%5D)">Animal models of necrotizing enterocolitis: Review of the literature and state of the art.</a> Innov Surg Sci. 3 (2), 87-92 (2018).</li>
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<li>Mihi, B., Lanik, W. E., Gong, Q., Good, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">A mouse model of necrotizing enterocolitis.</a> Methods Mol Biol. 2321, 101-110 (2021).</li>
<li>Nolan, L. S., Gong, Q., Hofmeister, H. N., Good, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+the+induction+of+experimental+necrotizing+enterocolitis+in+neonatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol for the induction of experimental necrotizing enterocolitis in neonatal mice.</a> STAR Protoc. 2 (4), 100951(2021).</li>
<li>Kaplina, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotizing+enterocolitis%3A+The+role+of+hypoxia%2C+gut+microbiome%2C+and+microbial+metabolites%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Necrotizing enterocolitis: The role of hypoxia, gut microbiome, and microbial metabolites.</a> Int J Mol Sci. 24 (3), 2471(2023).</li>
<li>Good, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactobacillus+rhamnosus+hn001+decreases+the+severity+of+necrotizing+enterocolitis+in+neonatal+mice+and+preterm+piglets%3A+Evidence+in+mice+for+a+role+of+TLR9%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Lactobacillus rhamnosus hn001 decreases the severity of necrotizing enterocolitis in neonatal mice and preterm piglets: Evidence in mice for a role of TLR9.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 306 (11), G1021-G1032 (2014).</li>
<li>Denning, T. L., Bhatia, A. M., Kane, A. F., Patel, R. M., Denning, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+nec%3A+Role+of+the+innate+and+adaptive+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Perinatol%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of nec: Role of the innate and adaptive immune response.</a> Semin Perinatol. 41 (1), 15-28 (2017).</li>
<li>Yu, Y. -R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+the+comprehensive+flow+cytometric+analysis+of+immune+cells+in+normal+and+inflamed+murine+non-lymphoid+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">A protocol for the comprehensive flow cytometric analysis of immune cells in normal and inflamed murine non-lymphoid tissues.</a> PLOS ONE. 11 (3), e0150606(2016).</li>
<li>Mihi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-22+signaling+attenuates+necrotizing+enterocolitis+by+promoting+epithelial+cell+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep+Med%22%5BJournal%5D)">Interleukin-22 signaling attenuates necrotizing enterocolitis by promoting epithelial cell regeneration.</a> Cell Rep Med. 2 (6), 100320(2021).</li>
<li>Bautista, G. M., Cera, A. J., Chaaban, H., Mcelroy, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State-of-the-art+review+and+update+of+in+vivo+models+of+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pediatr%22%5BJournal%5D)">State-of-the-art review and update of in vivo models of necrotizing enterocolitis.</a> Front Pediatr. 11, 1161342(2023).</li>
<li>Sodhi, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+milk+oligosaccharides+2%27-fucosyllactose+and+6%27-sialyllactose+protect+against+the+development+of+necrotizing+enterocolitis+by+inhibiting+toll-like+receptor+4+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">The human milk oligosaccharides 2'-fucosyllactose and 6'-sialyllactose protect against the development of necrotizing enterocolitis by inhibiting toll-like receptor 4 signaling.</a> Pediatr Res. 89 (1), 91-101 (2021).</li>
<li>Blum, L., Vincent, D., Boettcher, M., Knopf, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+aspects+of+necrotizing+enterocolitis+models%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunological aspects of necrotizing enterocolitis models: A review.</a> Front Immunol. 15, 1434281(2024).</li>
<li>Nolan, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indole-3-carbinol-dependent+aryl+hydrocarbon+receptor+signaling+attenuates+the+inflammatory+response+in+experimental+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunohorizons%22%5BJournal%5D)">Indole-3-carbinol-dependent aryl hydrocarbon receptor signaling attenuates the inflammatory response in experimental necrotizing enterocolitis.</a> Immunohorizons. 5 (4), 193-209 (2021).</li>
<li>Valle-Noguera, A., Gómez-Sánchez, M. J., Girard-Madoux, M. J. H., Cruz-Adalia, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+protocol+for+characterization+of+mouse+gut+innate+lymphoid+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Optimized protocol for characterization of mouse gut innate lymphoid cells.</a> Front Immunol. 11, 563414(2020).</li>
<li>Booth, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+functional+properties+of+gastric+tissue-resident+memory+T+cells+from+children%2C+adults%2C+and+the+elderly%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Characterization and functional properties of gastric tissue-resident memory T cells from children, adults, and the elderly.</a> Front Immunol. 5, 294(2014).</li>
</ol>

```html
<table><tbody><tr><td>1 mL Syringe-Tuberculin Slip Tip</td><td>Becton Dickinson</td><td>309659</td><td>フォーミュラミルク投与用シリンジ</td></tr><tr><td>1.5 mL semi-micro Disposable Cuvettes</td><td>BRAND GMBH + CO KG</td><td>759085D</td><td></td></tr><tr><td>1.7 ml Microtubes Clear</td><td>Axygen - Corning Inc.</td><td>MCT-175-C</td><td>ノンパイロジェニック&amp; Rnase-/Dnase-free</td></tr><tr><td>5% Oxygen, Balance Nitrogen Certified Reference Material, Size 200 High Pressure Steel Cylinger, CGA 580</td><td>Airgas</td><td>X02NI95C2003186</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mo CD16/CD32 Purified Clone: 93</td><td>eBioscience Inc.&nbsp;</td><td>14-0161-85</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD16/CD32 Purified Clone: 93</td><td>eBioscience Inc.&nbsp;</td><td>14-0161-86</td><td></td></tr><tr><td>APC anti-mouse Ly-6C Clone: HK1.4 Isotype: Rat IgGc</td><td>BioLegend</td><td>128015</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS Rinsing Solution</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td></td></tr><tr><td>BB515 Rat Anti-CD11b Clone: M1/70</td><td>BD Biosciences</td><td>564455</td><td></td></tr><tr><td>BB700 Rat Anti-Mouse CD4 Clone: RM4-5</td><td>BD Biosciences</td><td>566408</td><td></td></tr><tr><td>BD Microtainer SST</td><td>Becton Dickinson</td><td>365867</td><td>血清チューブ</td></tr><tr><td>BIOTIX&nbsp;Rainin LTS Compatible Racked Filter Tips, p1200</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-111-365</td><td></td></tr><tr><td>BIOTIX&nbsp;Rainin LTS Compatible Racked Filter Tips, p20</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-111-366</td><td></td></tr><tr><td>BIOTIX&nbsp;Rainin LTS Compatible Racked Filter Tips, p200</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-111-362</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Stain Buffer</td><td>BD Biosciences</td><td>563795</td><td></td></tr><tr><td>BUV615 Rat Anti-Mouse Ly-6G Clone: 1A8</td><td>BD Biosciences</td><td>751263</td><td></td></tr><tr><td>BV650 Rat Anti-Mouse I-A/I-E Clone: M5/114.15.2</td><td>BD Biosciences</td><td>563415</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J Neonatal Mice</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>CD45-VioGreen mouse</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-102-412</td><td></td></tr><tr><td>CD64 Antibody, anti-mouse, PE-Vio 770, REAfinity Clone REA286</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-119-659</td><td></td></tr><tr><td>CFX Opus Real-Time PC Systems&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>12011319</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase Type 4</td><td>Worthington Biochemical Corporation&nbsp;</td><td>LS004188</td><td></td></tr><tr><td>DL-dithiothreitol&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>D9779-5g</td><td></td></tr><tr><td>eBioscience FOXP3/Transcription Factor Staining Buffer Set</td><td>Life Technologies Corp.&nbsp;</td><td>00-5523-00</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (0.5M), pH 8.0</td><td>Quality Biological Inc</td><td>351-027-721</td><td></td></tr><tr><td>Esbilac Puppy Milk Replacer</td><td>Pet-Ag, Inc.</td><td>99502-1</td><td>子犬用ミルク</td></tr><tr><td>Fisherbrand Disposable Cuvettes</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-127</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 10mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11E</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 25mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 50mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11F</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 5mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11D</td><td></td></tr><tr><td>Genie Temp-Shaker 300</td><td>USA Scientific, Inc.</td><td>SI-G1600</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS Dissociator (protocol; m_intestine-01)</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-093-235</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS&nbsp; C Tubes</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130096334</td><td></td></tr><tr><td>Ghost Dye Red 780 Viability Dye</td><td>Tonbo Biosciences</td><td>13-0865-T100</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol ReagentPlus</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7757-500ML</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prims Software, Version 10.0</td><td>GraphPad</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Greiner Bio-One Round Bottom Polypropylene Culture Tube with Two-Position Vent Stopper</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-000-212</td><td></td></tr><tr><td>Handi+ Oxygen analyzer</td><td>Maxtec</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Hanks' Balanced Salt Solution</td><td>Gibco</td><td>141650-095</td><td></td></tr><tr><td>HEPES Buffer</td><td>Mediatech, Inc.&nbsp;</td><td>25-060-CI</td><td></td></tr><tr><td>Hypoxia Chamber</td><td>Billups-Rothenburg, Inc.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Schneider et al., 2012</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex MeisterHand Iris Scissors, 10.2cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-655</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex MeisterHand Iris Scissors, 9cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-598</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex&trade; Swiss Jeweler-Style Forceps</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-110</td><td></td></tr><tr><td>Isolette Infant Incubator</td><td>Air-Shields Vickers</td><td>C100-200-2 Series 02</td><td>マウス用インキュベーター</td></tr><tr><td>Kimtech Science Kimwipes Delicate Task Wipes</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L3129-10mg</td><td></td></tr><tr><td>Luria Broth Broth, Miller Molecular Genetics Powder</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1426-500</td><td></td></tr><tr><td>MACS BSA Stock Solution</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-091-376</td><td></td></tr><tr><td>MACSmix Tube Rotator</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-090-753</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge Tubes</td><td>Thermo Scientific</td><td>3451</td><td>1.5 ml、透明、目盛付き、滅菌済み</td></tr><tr><td>NanoDrop OneC Microvolume UV-Vis Spectrophotometer</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>ND-ONEC-W</td><td></td></tr><tr><td>Ohaus scout portable balance</td><td>Fisher Scientific</td><td>302530

壊死性小腸炎の新生児マウスモデルと免疫細胞プロファイリングのためのlamina propria分離

A Neonatal Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis and Lamina Propria Isolation for Immune Cell Profiling

壊死性小腸炎の新生児マウスモデルと免疫細胞プロファイリングのためのLamina Propria分離

Necrotizing enterocolitis (NEC) is a severe inflammatory disease of the neonatal intestine, primarily affecting preterm infants. NEC is characterized by ...

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免疫学と感染症

出典:セマン、B. G.ら グラム陰性細菌敗血症の新生児画像モデル。J. Vis.

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ここでは、手順は、 大腸菌 K1の培養新生児ラットにおける全身性感染の確立のために記載されている。この非侵襲的手順は、脈絡叢での胃腸管のコロニー形成、全身循環への病原体の転座、および中枢神経系への侵入を可能にする。...

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このプロトコルは、必要な手順を確立し、7...

新生児モデル敗血症マウスの制御モデル

強制経口投与を用いた新生児マウスにおけるプロバイオティクス研究

Enteroids 人間の病気の研究に新たなモデルとして浮上しています。プロトコルでは、新生児の組織から生成された enteroids のリポ多糖 (LPS) 治療を使用して人間の壊死性腸炎の enteroid モデルをシミュレートする方法について説明します。収集した enteroids...

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生きた生物の合併症を伴わない胎児の母体炎症(FEMI)をシミュレートする絨毛膜炎のモデルを開発し、子孫の腸管の発達に及ぼすFEMIの影響を調べた。これは、絨毛膜炎後の腸の損傷の発症のための機械化原因の研究を可能にする。...

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調節不整合な腸上皮バリア機能および免疫応答は、生理学的モデルの欠如のために十分に調査されていない炎症性腸疾患の特徴である。ここでは、生体内での粘膜透過性および白血球の採用を研究するために、十分に血管化され、外装された腸セグメントを採用したマウス腸管ループモデルについて述べている。...

標準化腸ループモデルを用いたマウスにおける腸透過性と好中球経上皮移動の機能評価

壊死性腸炎(NEC)は、未熟児、特に超低出生体重児にしばしば発生する最も重篤な胃腸(GI)疾患であり、死亡率が高く、病因が不明である。NECの原因は、炎症性免疫調節系の異常に関係している可能性があります。NECの動物モデルは、NECの疾患免疫研究に欠かせないツールです。NECの動物モデルは通常、C57BL/6J新生児マウスを使用します。BALB/c新生児マウスはめったに使用されません。関連する研究は、マウスが感染すると、C57BL/6Jマウスと比較して、THB細胞分化がBALB/cマウスにおいて優勢であることを示した。研究によると、NECの発生と発達はTヘルパー2型(Th2)細胞の増加と関連しており、一般に感染を伴うことが示唆されています。そこで本研究では、新生児BALB/cマウスを用いて、NEC小児と同様の臨床特性と腸管病理学的変化を有するNECモデルを誘導した。この動物モデルがNECにおけるTh2細胞応答を研究するために使用できるかどうかを判断するために、さらなる研究が保証されている。...

壊死性腸炎の新生児BALB/cマウスモデル

このプロトコルは病気の病因に機構の調査に使用することができる壊死性腸炎(NEC)の 生体外の モデルを記述する。ヒト新生児の腸、内皮細胞、および重度のNECの新生児の腸内細菌叢に由来する腸内エンテロイドをシードしたマイクロ流体チップを特徴としています。...

ヒト新生児腸管内腸内細菌叢と腸内細菌叢異常体を組み込んだ壊死性腸炎のマイクロ流体モデル

マウスにおける上行性膣感染症、早産、および新生児罹患率のモデル化

学ぶ新生児マウスにおける壊死性小腸炎誘導法とlamina propria免疫細胞のフローサイトメトリーによるプロファイリング手法。このプロトコルはヒト疾患を再現し、腸管免疫応答の詳細な解析を可能にする。

壊死性小腸炎の新生児マウスモデルと免疫細胞プロファイリングのためのLamina Propria分離

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