Name: 培養細胞における官能化ナノボディを用いたエンドサイトーシス輸送の生細胞イメージング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: 学ぶ官能化ナノボディを用いたHeLa細胞におけるエンドサイトーシス輸送の生細胞イメージング法。VHH-mCherryで膜タンパク質の動態を可視化し、細胞内輸送メカニズムの理解を深めます。

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<table><tbody><tr><td>抗GFP抗体およびnbsp;</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>118144600001</td><td>製品はシグマ・オルドリッチが流通していますが、製造はロッシュが担当しています</td></tr><tr><td>100mm細胞培養皿</td><td>TPP</td><td>TPP93100</td><td></td></tr><tr><td>抗アクチン抗体</td><td>EMDミリポア&nbsp;</td><td>MAB1501</td><td></td></tr><tr><td>抗HA抗体</td><td>研究室より</td><td>12CA5ハイブリドーマから作られる</td><td></td></tr><tr><td>抗His6抗体</td><td>ベチル研究所&nbsp;</td><td>A190-114A</td><td></td></tr><tr><td>抗T7抗体およびnbsp;</td><td>ベチル研究所&nbsp;</td><td>A190-117A</td><td></td></tr><tr><td>BL21(DE3) 有能&nbsp;大腸菌</td><td>NEB</td><td>C2527H</td><td></td></tr><tr><td>二水和カルシウム塩化物</td><td>メルク・ミリポール</td><td>102382</td><td>滅菌水に溶解し、ストックは1Mです</td></tr><tr><td>カルベニシリン二ナトリウム塩</td><td>アプリケム</td><td>A1491</td><td>滅菌水に溶解し、ストックは100 mg/mLです</td></tr><tr><td>クーマッシー-R(ブリリアントブルー)</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>B-0149</td><td></td></tr><tr><td>D-ビオチン</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>B4501</td><td>滅菌500 mM NaH2PO4 またはDMSOに溶解</td></tr><tr><td>使い捨てPD10脱塩カラム</td><td>GEヘルスケア</td><td>GE17-0851-01</td><td></td></tr><tr><td>DMEM グルタMAX-I</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>61965026</td><td></td></tr><tr><td>DMEM、高グルコース、グルタミンなし、フェノールレッドなし</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>31053028</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>アプリケム</td><td>A3778</td><td>無菌水に溶解</td></tr><tr><td>ダルベッコ硫酸塩緩衝塩水(DPBS)はCa2+/Mg2+</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>胎児用牛血清(FBS)</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>A5256701</td><td></td></tr><tr><td>フィルトロプルS、PES、ポレングル&ドゥム;&szlig;e: 0.45 & micro;m</td><td>サーステット</td><td>83.1826</td><td></td></tr><tr><td>FuGENE HDトランスフェクション試薬</td><td>プロメガ&nbsp;</td><td>E2311</td><td></td></tr><tr><td>ガラスカバースリップ(No. 1.5H)</td><td>VWR</td><td>631-0153</td><td></td></tr><tr><td>ヤギ対マウスHRP</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>A-0168</td><td></td></tr><tr><td>ヤギ防兎HRP</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>A-0545</td><td></td></tr><tr><td>彼のバッファーキット</td><td>サイトヴィア</td><td>11003400</td><td></td></tr><tr><td>彼のGraviTrapコラム</td><td>サイトヴィア</td><td>11003399</td><td></td></tr><tr><td>ibidi &micro;-スライド4 well, ibiTreat</td><td>80426-IBI</td><td>イビディ</td><td></td></tr><tr><td>イソプロピル&β;-D-チオガラクトピラノシド(IPTG)</td><td>アプリケム</td><td>A1008</td><td>滅菌水に溶解し、ストックは1Mです</td></tr><tr><td>カナマイシン硫酸塩</td><td>アプリケム</td><td>A1493</td><td>滅菌水に溶解し、ストックは100 mg/mLです</td></tr><tr><td>L-グルタミン</td><td>アプリケム</td><td>A3704</td><td></td></tr><tr><td>リソザイム&nbsp;</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>18037059001</td><td>製品はシグマ・オルドリッチが流通していますが、製造はロッシュが担当しています</td></tr><tr><td>塩化マグネシウム六水和物</td><td>メルク・ミリポール</td><td>105833</td><td>滅菌水に溶解し、ストックは1Mです</td></tr><tr><td>ミニプロテアンTGXゲル、4-20%、15ウェル</td><td>バイオ・ラッド</td><td>4561096</td><td></td></tr><tr><td>改造ヘラ京都</td><td>研究室より</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NEB5-α コンピテント&nbsp;大腸菌</td><td>NEB</td><td>C2987U</td><td></td></tr><tr><td>NucleoBond Xtra Midi Plus、10 プレップ</td><td>マッシェリー・ナゲル&nbsp;</td><td>740412.1</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン</td><td>バイオコンセプト&nbsp;</td><td>4-01F00-H</td><td></td></tr><tr><td>フェニルメチルスルホニルフッ化物(PMSF)</td><td>アプリケム</td><td>A0999.0025</td><td>40% DMSO、60% イソプロパノールに溶解、500 mM にストック</td></tr><tr><td>フェニックスアンフォ細胞株</td><td>ノーラン研究所</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ポリブレン(六ジメトリン臭化物)</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>H9268</td><td></td></tr><tr><td>プロマイシン</td><td>インビボジェン</td><td>アント-PR-1</td><td></td></tr><tr><td>塩化ナトリウム&nbsp;</td><td>メルク・ミリポール</td><td>106404</td><td>無菌水に溶けて、ストックは5 M</td></tr><tr><td>ピルビン酸ナトリウム&nbsp;</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>11360039</td><td></td></tr><tr><td>トランスブロットターボパック、ミニ</td><td>バイオ・ラッド</td><td>1704158</td><td></td></tr><tr><td>トリプトン</td><td>アプリケム</td><td>A1553</td><td></td></tr><tr><td>酵母抽出物&nbsp;</td><td>アプリケム</td><td>A1552</td><td></td></tr></tbody></table>

培養細胞における官能化ナノボディを用いたエンドサイトーシス輸送の生細胞イメージング

Live-cell Imaging of Endocytic Transport using Functionalized Nanobodies in Cultured Cells

Endocytosis of receptors and other transmembrane proteins from the cell surface to endosomes and beyond is critical for homeostasis, physiology, and ...

live-cell-imaging-endocytic-transport-using-functionalized-nanobodies

Research

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

オルガネラの人身売買のダイナミクスを研究するときに、ライブセルイメージングには特に有用です。ここでは、広視野蛍光顕微鏡を用いた培養神経細胞における高密度コア小胞のライブイメージングのためのプロトコルについて説明します。このプロトコルは柔軟性があり、画像その他のようなミトコンドリアなどのオルガネラ、エンドソーム、およびペルオキシソームに適合させることができます。...

初代培養海馬ニューロンにおける高密度コア小胞のライブイメージング

出典: Zhang, Y., et al.細胞内細菌によるエンドリソソーム系のリモデリング研究への蛍光ナノ粒子の応用J. Vis.

細菌感染細胞におけるエンドリソソームリモデリングのナノ粒子媒介可視化

このビデオは、官能基化されたナノボディの取り込みと逆行性輸送を研究し、その細胞内輸送経路を理解する方法を示しています。放射性標識硫酸塩を導入し、単離および検出技術を利用することにより、この方法は、カーゴタンパク質のエンドサイトーシス取り込みとトランスゴルジネットワークの到着の研究を可能にします。...

官能基化ナノボディを用いたトランスゴルジ体ネットワークへのGFPタグ付き表面タンパク質の到着のモニタリング

このビデオでは、ニューロン小胞が特定の蛍光タンパク質で標識され、その動きを視覚化する方法を示しています。まず、蛍光タンパク質をコードするプラスミドをトランスフェクション剤とインキュベートし、次にニューロンの培養物に導入します。その後、ニューロンの画像を取得して分析し、小胞の動きを追跡します。...

蛍光イメージングによるニューロンの小胞運動の可視化

私たちは、生きた細胞の共焦点イメージングにより、小胞体（ER）に常駐トランスフェクションし、蛍光タンパク質の分布や移動性を調査するために使用して画像化のアプローチについて説明します。また、超微細構造、この細胞内区画のアーキテクチャにその発現の効果を分析する。...

培養細胞における小胞体サブドメインの可視化

我々は、細胞外のエピトープに特異的なポリクローナル抗体を用いてニューロンを生体の表面上のタンパク質を標識するための方法を記載している。タンパク質、細胞表面上の抗体によって結合され、その後、エンドサイトーシスを介して内在化は、上の残りのタンパク質から区別、又はインキュベーション中に表面に輸送することができる。...

ライブ培養神経細胞の抗体供給した後細胞表面および内在化タンパク質の異なる標識化

この記事では、合成とナノ粒子（NPS）の蛍光標識するための方法を説明します。 NPは、真核細胞のエンドリソソーム系を標識するために、パルスチェイス実験に適用した。細胞内病原体サルモネラ·エンテリカの活動によって、エンド-リソソームシステムの操作は、ライブセルイメージングが続き、定量化した。...

細胞内細菌によって遠藤-リソソームシステムの再構築を検討するために、蛍光ナノ粒子の応用

住セルイメージ投射はダイナミックなプロセスを可視化する強力なツールです。固定セルの検討プロセスについての混乱と誤解につながることができます、静的画像のみを提供します。この作業は、吸収、薬物放出と細胞内リポソーム型ナノ粒子の細胞内局在性を調査する手法を示します。...

体外配信生細胞イメージング化学療法を探求する脂質ナノ粒子によってを使用してください。

膜輸送の研究は、神経機能を理解するために重要である。ここでは、ニューロンの小胞の運動性を定量化する方法を紹介します。これは、神経系における膜輸送の定量化に適合させることができる便利な方法である。...

蛍光プローブを用いた培養ニューロンにおけるエンドソームおよびリソソームの動力学の定量

ゴルジ体細胞表面からタンパク質の逆行輸送は膜の恒常性を維持するために不可欠です。ここでは、HeLa 細胞における機能性 nanobodies...

取り込みと培養細胞における機能性 Nanobodies を用いたトランスゴルジ ネットワークへの逆行性輸送の解析

学ぶ官能化ナノボディを用いたHeLa細胞におけるエンドサイトーシス輸送の生細胞イメージング法。VHH-mCherryで膜タンパク質の動態を可視化し、細胞内輸送メカニズムの理解を深めます。

培養細胞における官能化ナノボディを用いたエンドサイトーシス輸送の生細胞イメージング

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