Name: K562細胞のエピジェネティック工学:dCas9-DNMT3Aおよび-HDAC1融合タンパク質を用いた安定な標的DNAメチル化のためのデュアルベクターエピソーム戦略 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-31T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: 学ぶ CRISPR/dCas9を用いたK562細胞のエピジェネティック編集法。dCas9-DNMT3AとdCas9-HDAC1のデュアルエフェクターにより、標的DNAメチル化を安定かつ高精度に誘導し、オフターゲット効果を低減する革新的な手法です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Firdaus, Z., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+explorations+of+neurological+disorders%2C+the+identification+methods%2C+and+therapeutic+avenues%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Epigenetic explorations of neurological disorders, the identification methods, and therapeutic avenues.</a> Int J Mol Sci. 25 (21), 11658(2024).</li>
<li>Yu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+epigenetics%3A+from+laboratory+studies+and+clinical+trials+to+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Discov%22%5BJournal%5D)">Cancer epigenetics: from laboratory studies and clinical trials to precision medicine.</a> Cell Death Discov. 10 (1), 1-12 (2024).</li>
<li>Wang, S. E., Jiang, Y. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+epigenetic+molecular+therapies+for+imprinting+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Novel epigenetic molecular therapies for imprinting disorders.</a> Mol Psychiatry. 28 (8), 3182-3193 (2023).</li>
<li>Gilbert, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+CRISPR-mediated+control+of+gene+repression+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-scale CRISPR-mediated control of gene repression and activation.</a> Cell. 159 (3), 647-661 (2014).</li>
<li>Ptak, C., Petronis, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetics+and+complex+disease%3A+from+etiology+to+new+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Pharmacol+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Epigenetics and complex disease: from etiology to new therapeutics.</a> Annu Rev Pharmacol Toxicol. 48 (1), 257-276 (2008).</li>
<li>Stepper, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+targeted+DNA+methylation+with+chimeric+dCas9-Dnmt3a-Dnmt3L+methyltransferase%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Efficient targeted DNA methylation with chimeric dCas9-Dnmt3a-Dnmt3L methyltransferase.</a> Nucleic Acids Res. 45 (4), 1703-1713 (2017).</li>
<li>Sapozhnikov, D. M., Szyf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unraveling+the+functional+role+of+DNA+demethylation+at+specific+promoters+by+targeted+steric+blockage+of+DNA+methyltransferase+with+CRISPR%2FdCas9%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Unraveling the functional role of DNA demethylation at specific promoters by targeted steric blockage of DNA methyltransferase with CRISPR/dCas9.</a> Nat Commun. 12 (1), 5711(2021).</li>
<li>Kwon, D. Y., Zhao, Y. -T., Lamonica, J. M., Zhou, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locus-specific+histone+deacetylation+using+a+synthetic+CRISPR-Cas9-based+HDAC%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Locus-specific histone deacetylation using a synthetic CRISPR-Cas9-based HDAC.</a> Nat Commun. 8 (1), 15315(2017).</li>
<li>Vojta, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repurposing+the+CRISPR-Cas9+system+for+targeted+DNA+methylation%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Repurposing the CRISPR-Cas9 system for targeted DNA methylation.</a> Nucleic Acids Res. 44 (12), 5615-5628 (2016).</li>
<li>Giehrl-Schwab, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease+motor+symptoms+rescue+by+CRISPRa-reprogramming+astrocytes+into+GABAergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease motor symptoms rescue by CRISPRa-reprogramming astrocytes into GABAergic neurons.</a> EMBO Mol Med. 14 (5), e14797(2022).</li>
<li>Moreno, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+gene+therapy+via+AAV-CRISPR-Cas9-mediated+targeted+gene+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">In situ gene therapy via AAV-CRISPR-Cas9-mediated targeted gene regulation.</a> Mol Ther. 28 (8), 1931(2020).</li>
<li>Sokka, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR+activation+enables+high-fidelity+reprogramming+into+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">CRISPR activation enables high-fidelity reprogramming into human pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Rep. 17 (2), 413-426 (2022).</li>
<li>Galonska, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+tracking+of+dCas9-methyltransferase+footprints%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Genome-wide tracking of dCas9-methyltransferase footprints.</a> Nat Commun. 9 (1), 1-9 (2018).</li>
<li>Lin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+determination+of+on-target+and+off-target+characteristics+for+RNA-guided+DNA+methylation+by+dCas9+methyltransferases%5BTitle%5D)+AND+%22GigaScience%22%5BJournal%5D)">Genome-wide determination of on-target and off-target characteristics for RNA-guided DNA methylation by dCas9 methyltransferases.</a> GigaScience. 7 (3), 1-19 (2018).</li>
<li>Kennedy, M. E., Cullen, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+CRISPR%2FCas+DNA+endonucleases%3A+a+revolutionary+technology+that+could+dramatically+impact+viral+research+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Bacterial CRISPR/Cas DNA endonucleases: a revolutionary technology that could dramatically impact viral research and treatment.</a> Virology. 479 - 480, 213-220 (2015).</li>
<li>Rothe, M., Modlich, U., Schambach, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosafety+challenges+for+use+of+lentiviral+vectors+in+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Biosafety challenges for use of lentiviral vectors in gene therapy.</a> Curr Gene Ther. 13 (6), 453-468 (2013).</li>
<li>Cappelluti, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Durable+and+efficient+gene+silencing+in+vivo+by+hit-and-run+epigenome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Durable and efficient gene silencing in vivo by hit-and-run epigenome editing.</a> Nature. 627 (8003), 416-423 (2024).</li>
<li>Hanzawa, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+DNA+demethylation+of+the+Fgf21+promoter+by+CRISPR%2FdCas9-mediated+epigenome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Targeted DNA demethylation of the Fgf21 promoter by CRISPR/dCas9-mediated epigenome editing.</a> Sci Rep. 10 (1), 1-14 (2020).</li>
<li>O'Geen, H., Tomkova, M., Combs, J. A., Tilley, E. K., Segal, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determinants+of+heritable+gene+silencing+for+KRAB-dCas9+%2B+DNMT3+and+Ezh2-dCas9+%2B+DNMT3+hit-and-run+epigenome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Determinants of heritable gene silencing for KRAB-dCas9 + DNMT3 and Ezh2-dCas9 + DNMT3 hit-and-run epigenome editing.</a> Nucleic Acids Res. 50 (6), 3239-3253 (2022).</li>
<li>Sgourou, A., Routledge, S., Spathas, D., Athanassiadou, A., Antoniou, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+levels+of+HBB+transgene+expression+from+S%2FMAR+element-based+replicating+episomal+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Physiological levels of HBB transgene expression from S/MAR element-based replicating episomal vectors.</a> J Biotechnol. 143 (2), 85-94 (2009).</li>
<li>Lazaris, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-viral+episomal+vector+mediates+efficient+gene+transfer+of+the+%CE%B2-globin+gene+into+K562+and+human+haematopoietic+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Non-viral episomal vector mediates efficient gene transfer of the β-globin gene into K562 and human haematopoietic progenitor cells.</a> Genes. 14 (9), 1774(2023).</li>
<li>Mulia, G. E., Picanço-Castro, V., Stavrou, E. F., Athanassiadou, A., Figueiredo, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+development+and+the+applications+of+nonviral%2C+episomal+vectors+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Advances in the development and the applications of nonviral, episomal vectors for gene therapy.</a> Hum Gene Ther. 32 (19-20), 1076-1095 (2021).</li>
<li>Piechaczek, C., Fetzer, C., Baiker, A., Bode, J., Lipps, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+vector+based+on+the+SV40+origin+of+replication+and+chromosomal+S%2FMARs+replicates+episomally+in+CHO+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">A vector based on the SV40 origin of replication and chromosomal S/MARs replicates episomally in CHO cells.</a> Nucleic Acids Res. 27 (2), 426-428 (1999).</li>
<li>Nuñez, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+programmable+transcriptional+memory+by+CRISPR-based+epigenome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide programmable transcriptional memory by CRISPR-based epigenome editing.</a> Cell. 184 (9), 2503-2519.e17 (2021).</li>
<li>Doench, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+sgRNA+design+to+maximize+activity+and+minimize+off-target+effects+of+CRISPR-Cas9%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Optimized sgRNA design to maximize activity and minimize off-target effects of CRISPR-Cas9.</a> Nat Biotechnol. 34 (2), 184-191 (2016).</li>
<li>Brezgin, S., Kostyusheva, A., Kostyushev, D., Chulanov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dead+Cas+systems%3A+types%2C+principles%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Dead Cas systems: types, principles, and applications.</a> Int J Mol Sci. 20 (23), 6041(2019).</li>
<li>Holmes, D. S., Quigley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+boiling+method+for+the+preparation+of+bacterial+plasmids%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A rapid boiling method for the preparation of bacterial plasmids.</a> Anal Biochem. 114 (1), 193-197 (1981).</li>
<li>Harwood, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rapid+boiling+method+for+small-scale+preparation+of+plasmid+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The rapid boiling method for small-scale preparation of plasmid DNA.</a> Methods Mol Biol. 58, 265-367 (1996).</li>
<li>Rio, D. C., Ares, M., Hannon, G. J., Nilsen, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+RNA+using+TRIzol+%28TRI+reagent%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Purification of RNA using TRIzol (TRI reagent).</a> Cold Spring Harb Protoc. 2010 (6), (2010).</li>
<li>Labuhn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Refined+sgRNA+efficacy+prediction+improves+large-+and+small-scale+CRISPR-Cas9+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Refined sgRNA efficacy prediction improves large- and small-scale CRISPR-Cas9 applications.</a> Nucleic Acids Res. 46 (3), 1375-1385 (2018).</li>
<li>Hofacker, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+of+effector+domains+for+targeted+DNA+methylation+with+reduced+off-target+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Engineering of effector domains for targeted DNA methylation with reduced off-target effects.</a> Int J Mol Sci. 21 (2), 502(2020).</li>
<li>Yang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EpiCas-DL%3A+predicting+sgRNA+activity+for+CRISPR-mediated+epigenome+editing+by+deep+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Comput+Struct+Biotechnol+J%22%5BJournal%5D)">EpiCas-DL: predicting sgRNA activity for CRISPR-mediated epigenome editing by deep learning.</a> Comput Struct Biotechnol J. 21, 202-211 (2023).</li>
<li>Mu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Machine+learning+methods+for+predicting+guide+RNA+effects+in+CRISPR+epigenome+editing+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Machine learning methods for predicting guide RNA effects in CRISPR epigenome editing experiments.</a> bioRxiv. , (2024).</li>
<li>Batra, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicting+the+effect+of+CRISPR-Cas9-based+epigenome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Predicting the effect of CRISPR-Cas9-based epigenome editing.</a> bioRxiv. , (2025).</li>
<li>Stavrou, E. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Episomal+vectors+based+on+S%2FMAR+and+the+%CE%B2-globin+replicator%2C+encoding+a+synthetic+transcriptional+activator%2C+mediate+efficient+%CE%B3-globin+activation+in+haematopoietic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Episomal vectors based on S/MAR and the β-globin replicator, encoding a synthetic transcriptional activator, mediate efficient γ-globin activation in haematopoietic cells.</a> Sci Rep. 9 (1), 19765(2019).</li>
<li>Stavrou, E. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%CE%B2-globin+replicator+greatly+enhances+the+potential+of+S%2FMAR+based+episomal+vectors+for+gene+transfer+into+human+haematopoietic+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">The β-globin replicator greatly enhances the potential of S/MAR based episomal vectors for gene transfer into human haematopoietic progenitor cells.</a> Sci Rep. 7 (1), 40673(2017).</li>
<li>Hagedorn, C., Antoniou, M. N., Lipps, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+cis-acting+sequences+improve+expression+and+establishment+of+a+nonviral+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Nucleic+Acids%22%5BJournal%5D)">Genomic cis-acting sequences improve expression and establishment of a nonviral vector.</a> Mol Ther Nucleic Acids. 2 (8), e118(2013).</li>
<li>Stehle, I. M., Rupprecht, S., Cremer, T., Jackson, D. A., Lipps, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+mitotic+stability+of+an+extra-chromosomal+mammalian+replicon%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Establishment and mitotic stability of an extra-chromosomal mammalian replicon.</a> BMC Cell Biol. 8, 33(2007).</li>
<li>Lufino, M. M. P., Manservigi, R., Wade-Martins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+S%2FMAR-based+infectious+episomal+genomic+DNA+expression+vector+provides+long-term+regulated+functional+complementation+of+LDLR+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">An S/MAR-based infectious episomal genomic DNA expression vector provides long-term regulated functional complementation of LDLR deficiency.</a> Nucleic Acids Res. 35 (15), e98(2007).</li>
<li>Hsu, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+targeting+specificity+of+RNA-guided+Cas9+nucleases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">DNA targeting specificity of RNA-guided Cas9 nucleases.</a> Nat Biotechnol. 31 (9), 827-832 (2013).</li>
<li>Fu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-frequency+off-target+mutagenesis+induced+by+CRISPR-Cas+nucleases+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">High-frequency off-target mutagenesis induced by CRISPR-Cas nucleases in human cells.</a> Nat Biotechnol. 31 (9), 822-826 (2013).</li>
<li>Ewaisha, R., Anderson, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenicity+of+CRISPR+therapeutics-critical+considerations+for+clinical+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Immunogenicity of CRISPR therapeutics-critical considerations for clinical translation.</a> Front Bioeng Biotechnol. 11, 1138596(2023).</li>
<li>Raghavan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rational+engineering+of+minimally+immunogenic+nucleases+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Rational engineering of minimally immunogenic nucleases for gene therapy.</a> Nat Commun. 16 (1), 105(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Absolute Q DNA デジタルPCRマスターミックス(5回)</td><td>応用バイオシステム</td><td>A52490</td><td></td></tr><tr><td>年齢-HF&nbsp;</td><td>NEB</td><td>R3552</td><td></td></tr><tr><td>ASCI</td><td>NEB</td><td>R0558</td><td></td></tr><tr><td>AseI</td><td>NEB</td><td>R0526</td><td></td></tr><tr><td>バンヒ-HF</td><td>NEB</td><td>R3136</td><td></td></tr><tr><td>BD FACS メロディセルソーター</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ブグル</td><td>NEB</td><td>R0144</td><td></td></tr><tr><td>BSPEEI</td><td>NEB</td><td>R0540</td><td></td></tr><tr><td>デオキシヌクレオチド(dNTP)溶液ミックス(10 mM)</td><td>NEB</td><td>N0447</td><td></td></tr><tr><td>DMEM高グルコース(安定グルタミン、ピルビン酸ナトリウム配合)を含んでいました</td><td>バイオウエスト</td><td>L0103</td><td></td></tr><tr><td>DNAポリメラーゼI、大型(クレノウ)断片</td><td>NEB</td><td>M0210</td><td></td></tr><tr><td>DNMT3A(CD)、HDAC1配列</td><td>IDT</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DreamTaq DNAポリメラーゼ&nbsp;</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>EP0712</td><td></td></tr><tr><td>エピテクト</td><td>キアゲン</td><td>59104</td><td>ビスアルファイト変換キット&nbsp;</td></tr><tr><td>エピテクトビアルファイトキット</td><td>キアゲン</td><td>59104</td><td></td></tr><tr><td>ESP3I</td><td>NEB</td><td>R0734</td><td></td></tr><tr><td>胎児用牛血清</td><td>ギブコ</td><td>A5256701</td><td></td></tr><tr><td>ジェネティシン選択抗生物質(G418硫酸塩)</td><td>ギブコ</td><td>11811031</td><td></td></tr><tr><td>リポフェクタミン3000型トランスフェクションキット</td><td>インビトロジェン</td><td>L3000015</td><td></td></tr><tr><td>NEB&reg;&nbsp;5-α 有能&nbsp;大腸菌&nbsp;(高効率)</td><td>NEB</td><td>C2987I</td><td></td></tr><tr><td>NEB&reg;&nbsp;5-α F'Iq&nbsp;大腸菌、(高効率)</td><td>NEB</td><td>C2992H</td><td></td></tr><tr><td>ヌクレオスピン組織およびnbsp;</td><td>マッシェレイ・ナーゲル</td><td>740952.50</td><td></td></tr><tr><td>PBS、10倍溶液pH 7.4</td><td>ロンザ</td><td>BE17-517Q</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン・ストレプトマイシン溶液100倍</td><td>バイオウエスト</td><td>L0022</td><td></td></tr><tr><td>pGuideベクトル</td><td>オリジーン・テクノロジーズ</td><td>GE100042</td><td></td></tr><tr><td>フェノール:クロロホルム:イソアミルアルコール 25:24:1 10 mM Tris、pH 8.0、1 mM EDTA</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>P2069</td><td></td></tr><tr><td>プライマー、sgRNAsおよびnbsp;</td><td>ユーロフィン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>パイロマークアッセイデザイン&nbsp;</td><td>キアゲン</td><td>バージョン2.0</td><td>ビアナルファイトプライマー設計ツール&nbsp;</td></tr><tr><td>パイロマークゴールドQ24試薬</td><td>キアゲン</td><td>970802</td><td></td></tr><tr><td>PyroMark PCRキット&nbsp;</td><td>キアゲン</td><td>978703</td><td></td></tr><tr><td>パイロマーク Q24 MDx</td><td>キアゲン</td><td></td><td>パイロシーケンシングワークステーション&nbsp;</td></tr><tr><td>PyroMark Q24 ソフトウェア&nbsp;</td><td>キアゲン</td><td>v2.0.8</td><td>パイロシーケンシングソフトウェア&nbsp;</td></tr><tr><td>Q5&reg;高精度DNAポリメラーゼ</td><td>NEB</td><td>M0491</td><td></td></tr><tr><td>QuantiTect逆転写キット</td><td>キアゲン</td><td>205311</td><td></td></tr><tr><td>QuantStudio Absolute Q MAP16 プレートキット</td><td>応用バイオシステム</td><td>A52865</td><td>デジタルPCRシステムおよびnbsp;</td></tr><tr><td>SYBR Green I 核酸ゲル染色、DMSO濃度10,000倍</td><td>インビトロジェン</td><td>S7563</td><td></td></tr><tr><td>T4 DNAリガーゼ</td><td>NEB</td><td>M0202</td><td></td></tr><tr><td>T4ポリヌクレオチドキナーゼ</td><td>NEB</td><td>M0201</td><td></td></tr><tr><td>トリゾル試薬</td><td>インビトロジェン</td><td>15596026</td><td></td></tr></tbody></table>

k562細胞のエピジェネティック工学:dcas9-dnmt3aおよび-hdac1融合タンパク質を用いた安定な標的dnaメチル化のためのデュアルベクターエピソーム戦略

Epigenetic Engineering of K562 Cells: Dual-Vector Episomal Strategy for Stable Targeted DNA Methylation using dCas9-DNMT3A and -HDAC1 Fusion Proteins

K562細胞のエピジェネティック工学:dCas9-DNMT3Aおよび-HDAC1融合タンパク質を用いた安定な標的DNAメチル化のためのデュアルベクターエピソーム戦略

Investigating the precise role of DNA methylation in gene transcriptional regulation and developing therapies targeting specific gene methylation patterns ...

epigenetic-engineering-k562-cells-dual-vector-episomal-strategy-for

Research

JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

ここでは、再プログラミング戦略とヒス​​トンデアセチラーゼ阻害剤ベースのエピソームを用いて末梢血からのヒト人工多能性幹細胞を生成するためのプロトコルを記述している。...

エピソームおよびHDAC阻害剤を用いて血液からの効率的なiPS細胞の生成

我々 はマウス胚性幹細胞を培養するための 2 つの化学ベースのプロトコルについて説明します。この新しいメソッドは、(ビタミン C)、テトを介した酸化を促進し、DNA 低いメチル化とマウス胚性幹細胞の多能性を維持するために、5-メチルシトシン (PD0325901)...

MEK 阻害剤 PD0325901 とビタミン C を用いたマウス胚性幹細胞のゲノムの低いメチル化を維持するために代替カルチャ メソッド

哺乳類細胞化学誘導型 DNA hydroxymethylation およびエピジェネティックな改造のために設計された分割型 TET2 酵素 (サイダー)...

化学誘導型 DNA Hydroxymethylation およびエピジェネティックな改造のために設計された分割型 TET2 酵素

クロマチン環境規制、適切な遺伝子発現に必要な重要なプロセスです。ここでは、クロマチン修飾の採用によって遺伝子発現を制御する手法について述べる遺伝子特異的かつ可逆的に機械。...

化学のエピジェネティックな修飾剤の細胞機械装置をリダイレクトすることによって遺伝子の転写を抑制

編集を表す DNA エピゲノム強力な治療アプローチを対象としました。このプロトコルは、生産、精製、ひと誘導多能性幹細胞 (こと) のエピゲノム編集アプリケーションに CRISPR dCas9 DNMT3A 遺伝子をかくまっているオール ・ イン ・ ワン...

レンチウイルスベクター人間にエピゲノム編集ツールの効率的な配信用誘導多能性幹細胞由来の疾患モデル

ここでは、化学的エピジェネティック消去と機械化関連の手がかりを組み合わせて、遺伝子トランスフェクションやレトロウイルスベクターを必要とせずに哺乳類の多能性細胞を効率的に生成する方法を紹介します。したがって、この戦略はトランスレーショナル医療にとって有望であり、幹細胞オルガノイド技術の顕著な進歩を表しています。...

エピジェネティック修飾と生体力学的手がかりを組み合わせて哺乳類多能性細胞を生成する2段階戦略

ここでは、高い、長期にわたる、安定したオンターゲットサイレンシング効率と、低いゲノムワイドなオフターゲット活性を持つ、遺伝子操作された転写抑制因子(ETR)の in vitro...

イン・ビトロ 標的エピジェネティックサイレンシングのための遺伝子操作転写リプレッサーの選択

造血幹細胞生物学および造血悪性腫瘍をよりよく研究するためには、造血幹細胞および前駆細胞(HSPC)の体細胞変異を忠実にモデル化するための新しい戦略が必要です。ここでは、CRISPR/Cas9とデュアルrAAVドナー形質導入の使用を組み合わせることにより、HSPCにおけるヘテロ接合機能獲得変異をモデル化するためのプロトコルについて説明します。...

ヒト造血幹細胞および前駆細胞における発癌性ヘテロ接合性機能獲得変異の改変

このプロトコールは、プラスミドDNAトランスフェクションおよびmRNAヌクレオフェクションを使用したヒト細胞株におけるClustered Regularly Interspaced Short Palindromic...

プラスミドDNAトランスフェクションとmRNAヌクレオフェクションデリバリーを用いたヒト細胞におけるCRISPRエピゲノム編集

CRISPR/Cas9技術を使用して、相同性終末結合(HMEJ)DNA修復経路 を介して...

大規模DNAテンプレートの相同性を介した末端結合標的統合 による 初代ヒトT細胞の非ウイルス工学

学ぶ CRISPR/dCas9を用いたK562細胞のエピジェネティック編集法。dCas9-DNMT3AとdCas9-HDAC1のデュアルエフェクターにより、標的DNAメチル化を安定かつ高精度に誘導し、オフターゲット効果を低減する革新的な手法です。

K562細胞のエピジェネティック工学:dCas9-DNMT3Aおよび-HDAC1融合タンパク質を用いた安定な標的DNAメチル化のためのデュアルベクターエピソーム戦略

さらに動画を探す