Name: 哺乳類細胞における細胞膜および細胞内ニコチン性アセチルコリン受容体の局在化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-19T14:05:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: 学ぶ、pH感受性蛍光タグと共焦点顕微鏡を用いて哺乳類N2a細胞におけるニコチン性アセチルコリン受容体の細胞膜および細胞内局在を定量化する方法。受容体輸送と創薬研究に有用です。

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<table><tbody><tr><td>0.25% トリプシン-EDTA(1X)&nbsp;</td><td>ギブコ</td><td>25200-056</td><td>細胞剥離試薬</td></tr><tr><td>アルファ・ブンガロトキシン アレクサ フルー 647</td><td>インビトロジェン</td><td>B35450</td><td>アルファ-ブンガロトキシン共役体</td></tr><tr><td>BSLレベル1 バイオセーフティキャビネット&nbsp;</td><td>ヌアイレ</td><td>NU-425-400</td><td>無菌細胞培養作業区域</td></tr><tr><td>塩化カルシウム</td><td>アベントル/VWR</td><td>BDH9224</td><td>バッファ成分</td></tr><tr><td>D-(+)-グルコース</td><td>ミリポア・シグマ&nbsp;</td><td>G8270</td><td>バッファ成分</td></tr><tr><td>L-グルタミンを用いたEMEM</td><td>ATCC</td><td>30-2003</td><td>細胞培地</td></tr><tr><td>エンドトキシンフリーDNA</td><td>Zymoキットを使って自社製</td><td>該当しません</td><td>細胞一時型トランスフェクションに使用されるnAChR DNA</td></tr><tr><td>エンドトキシンフリーマイクロ遠心分離管、0.5 mL &nbsp;</td><td>アベントル/VWR</td><td>89000-010</td><td>DNAおよびトランスフェクション調製</td></tr><tr><td>エンドトキシンフリーのマイクロ遠心分離チューブ、1.5 mL&nbsp;</td><td>アベントル/VWR</td><td>20170-038</td><td>DNAおよびトランスフェクション調製</td></tr><tr><td>胎児用牛血清</td><td>アベントル/VWR</td><td>97068-085</td><td>血清サプリメント</td></tr><tr><td>フルオビュー FV10i</td><td>オリンポス</td><td>FV10i</td><td>共焦点顕微鏡</td></tr><tr><td>ガラス底のMatTek皿</td><td>マットテック</td><td>P35GC-0-10-C</td><td>イメージングアンテナ</td></tr><tr><td>GraphPad プリズム v. 10</td><td>GraphPad プリズム</td><td>https://www.graphpad.com/features</td><td>データ分析ソフトウェア</td></tr><tr><td>ヘペス</td><td>ミリポア・シグマ&nbsp;</td><td>H3375</td><td>バッファ成分</td></tr><tr><td>リポフェクタミン 2000</td><td>インビトロジェン</td><td>11668019</td><td>トランスフェクション試薬</td></tr><tr><td>塩化マグネシウム六水和物</td><td>熱力学</td><td>413410025</td><td>バッファ成分</td></tr><tr><td>MESハイドレート</td><td>ミリポア・シグマ&nbsp;</td><td>M5287</td><td>バッファ成分</td></tr><tr><td>mTagBFP2-pBAD</td><td>AddGene&nbsp;</td><td>54572</td><td>細胞一時的なトランスフェクションに使用される制御DNAを指す。</td></tr><tr><td>ニューロ2a(N2a)細胞</td><td>アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション</td><td>CCL-131</td><td>DNAトランスフェクションおよびnAChR発現に用いられる細胞</td></tr><tr><td>オプティMEM</td><td>ギブコ</td><td>31985-070</td><td>還元血清培地</td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン</td><td>アベントル/VWR</td><td>K952-100mL</td><td>抗生物質</td></tr><tr><td>蠕動ポンプ</td><td>ギルソン</td><td>ミニパルス3</td><td>イメージング時のバッファの変化など;</td></tr><tr><td>リン酸塩緩衝塩水</td><td>クオリティ・バイオロジカル</td><td>119-069-131</td><td>生理食塩水バッファー</td></tr><tr><td>ピペット・エイド</td><td>Drummondとnbsp;</td><td>140084</td><td>精密な液体移動</td></tr><tr><td>ピペットチップ(無菌・内毒素フリー、1000uL)</td><td>レイニン</td><td>30389216</td><td>精密な液体移動</td></tr><tr><td>ピペットチップ(滅菌・内毒素フリー、20uL)</td><td>レイニン</td><td>30389229</td><td>精密な液体移動</td></tr><tr><td>ピペットチップ(滅菌・内毒素フリー、250uL)</td><td>レイニン</td><td>30389246</td><td>精密な液体移動</td></tr><tr><td>ピペットス、P10</td><td>レイイン&nbsp;</td><td>L-10XLS</td><td>精密な液体移動</td></tr><tr><td>ピペット、P100</td><td>レイイン&nbsp;</td><td>L-100XLS</td><td>精密な液体移動</td></tr><tr><td>ピペット、P1000</td><td>レイイン&nbsp;</td><td>L-1000XLS</td><td>精密な液体移動</td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td>ミリポア・シグマ&nbsp;</td><td>P3911</td><td>バッファ成分</td></tr><tr><td>血清学的ピペット(無菌かつ内毒素フリー、10ML)</td><td>アベントル/VWR</td><td>89130-898</td><td>精密な液体移動</td></tr><tr><td>血清学的ピペット(無菌かつ内毒素フリー、25 mL)</td><td>アベントル/VWR</td><td>89130-900</td><td>精密な液体移動</td></tr><tr><td>血清学的ピペット(無菌かつ内毒素フリー、5 mL)</td><td>アベントル/VWR</td><td>76201-710</td><td>精密な液体移動</td></tr><tr><td>血清学的ピペット(無菌かつ内毒素フリー、50 mL)</td><td>アベントル/VWR</td><td>75816-088</td><td>精密な液体移動</td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>アベントル/VWR</td><td>BDH9286</td><td>バッファ成分</td></tr><tr><td>組織培養フラスコ</td><td>ファルコン</td><td>353109</td><td>料理の栽培</td></tr><tr><td>ZymoPure II プラスミド Maxiprepキット</td><td>ザイモリサーチ</td><td>D4203-A + D4203-B</td><td>エンドトキシンフリーDNAの産生</td></tr><tr><td>&alpha;4-SEP&nbsp;</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック GeneArt遺伝子合成サービス&nbsp;&nbsp;</td><td>https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cloning/c-misc/geneart.html</td><td>カスタム遺伝子合成サービス</td></tr><tr><td>&alpha;7-pフジ</td><td>ツイスト・バイオサイエンス</td><td>https://www.twistbioscience.com/</td><td>カスタム遺伝子合成サービス</td></tr><tr><td>&ベータ;2-pフジ</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック GeneArt遺伝子合成サービス&nbsp;&nbsp;</td><td>https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cloning/c-misc/geneart.html</td><td>カスタム遺伝子合成サービス</td></tr></tbody></table>

哺乳類細胞における細胞膜および細胞内ニコチン性アセチルコリン受容体の局在化

Localization of Plasma Membrane and Intracellular Neuronal Nicotinic Acetylcholine Receptors Using Quantitative Imaging in Mammalian Cells

Quantification of neuronal nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs) expressed on the plasma membrane of mammalian cells is important for the development ...

localization-plasma-membrane-intracellular-neuronal-nicotinic

Research

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

私たちはより良いアプローチノックインおよびスペクトルを用いた受容体の蛍光タンパク質タグを含むアプローチの組み合わせを使用して、ニコチン中毒のメカニズムを理解するCNSニューロンの特定のサブタイプの細胞内領域内のニコチン性アセチルコリン受容体の変化を定量化する新しい技術を開発しました共焦点イメージング。...

慢性ニコチン投与によるマウスノックインで蛍光標識ニコチン性受容体のスペクトル共焦点イメージング

膜受容体の細胞外ドメインにsuperecliptic...

イメージング初代培養マウス神経細胞における形質膜に受容体の挿入をpHluorinタグ付き

出典:Zhang, J., et al.網膜リボンシナプスにおける膜受容体の高分解能定量的免疫金分析。J. Vis.

網膜シナプスにおける神経伝達物質受容体の高解像度イメージング

本稿では、急性単離した脳スライスのニューロンにおけるリガンド依存性イオンチャネルの機能を研究するための有用な方法を説明します。このメソッドは、標準パッチクランプ法を用いて記録された神経細胞への薬物のローカルアプリケーションのための薬剤を充填したマイクロピペットの使用を含む。...

マウスの脳スライスにおけるニコチン性アセチルコリン受容体機能を研究するための薬物のローカルアプリケーション

私たちは、ニコチン性アセチルコリン受容体(nAChR)を介したシナプス伝達のシナプス前メカニズムを直接ライブイメージングで分析するための、腹側海馬-側坐回路の遺伝子キメラ製剤をin...

ニコチン誘導性カルシウムシグナリングおよび腹側海馬軸索に沿って神経伝達物質放出のライブイメージング

ポストエンベッドイムノゴールド法は、特定の分子の細胞内局在を高解像度で分析するための最も効果的な方法の一つです。ここでは、網膜リボンシナプスにおけるグルタミン酸受容体を定量的に解析するためのプロトコールについて述べます。...

網膜リボンシナプスにおける膜受容体の高分解能定量的イムノゴールド分析

光学顕微鏡技術と生化学的アッセイを組み合わせることで、ネトリン依存性軸索分岐におけるSNARE媒介性エキソサイトーシスの関与を解明します。この技術の組み合わせにより、軸索の分岐と細胞形状の変化を制御する分子メカニズムの同定が可能になります。...

軸索分岐と神経形態形成中に形質膜配信の役割を定義するために組み合わせる方法論を活用

pH感受性蛍光体で膜タンパク質の細胞外ドメインをラベリング、superecliptic pHluorin（SEP）は、細胞内局在、発現、および人身売買を決定することができます。全反射蛍光顕微鏡（TIRFM）の撮像SEP-標識されたタンパク質は、末梢ERおよび原形質膜中のタンパク質レベルの定量化を可能にします。...

細胞内局在や人身売買を監視するpHluorinタグ付き受容体を利用します

この記事は、ニコチンの調査によるマウス脳切片でニコチン性アセチルコリン受容体 (nAChRs) を研究するための方法を示します。同時パッチ ・...

活性型のニコチンのレーザー フラッシュ ・ フォトリシス法によるマウス脳切片でのニコチン性アセチルコリン受容体の機能を探る

ここでは、蛍光染色を使用してマーカー蛋白質、共焦点顕微鏡、コンピューターによる解析を基準にしてシナプス蛋白質の分布を決定する定量的アプローチについて述べる。...

蛍光抗体法を用いたマウス脳内シナプス蛋白質の不均質分布の定量化

現在の方法は、容易に入手可能な遺伝的にコードされたカルシウム指標を使用して、カエノラブディティスエレガンスのin...

in vivoでの神経細胞カルシウムハンドリングの細胞内イメージング

学ぶ、pH感受性蛍光タグと共焦点顕微鏡を用いて哺乳類N2a細胞におけるニコチン性アセチルコリン受容体の細胞膜および細胞内局在を定量化する方法。受容体輸送と創薬研究に有用です。

哺乳類細胞における細胞膜および細胞内ニコチン性アセチルコリン受容体の局在化

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