Name: 宿主-病原体相互作用を研究するためのマウス前立腺オルガノイドモデルの生成 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: 学ぶマウス前立腺オルガノイド由来の2次元培養モデル構築法。上皮細胞の多様性を保持し尿路上皮性大腸菌（UPEC）感染動態を解析可能。前立腺疾患と宿主-病原体相互作用の研究に有用なプラットフォームを提供する。

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<table><tbody><tr><td>48ウェルプレート</td><td>サーステット</td><td>83.3923</td><td>底面の形状:平ら</td></tr><tr><td>5&α;-アンドロスタン-17&β;-ol-3-1 ジヒドロテストステロン</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>A8380</td><td>それはDHTと呼ばれていました。ストック解10&μ;Mは100%エタノールに溶けています</td></tr><tr><td>8ウェルPETスライド(1ウェルあたり40電極)およびnbsp;</td><td>応用生物物理学</td><td>8W10E+</td><td>TEER測定に使用されるスライド</td></tr><tr><td>96個のウェルプレート</td><td>サーステット</td><td>82.1583</td><td>底面形状:円錐形</td></tr><tr><td>前進、ダルベッコ改良型イーグル中型/F12&nbsp;</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>12634028</td><td>10 mmol L&minusを補給するとadDMEM/F12+/+と指定されました。HEPES1錠とグルタMAX1錠</td></tr><tr><td>アンピシリン</td><td>ロス</td><td>K029.2&nbsp;</td><td>濃度ストック 100 mg/mL</td></tr><tr><td>抗CD24a抗体</td><td>プロテインテック</td><td>10600-1-AP</td><td>一次抗体;1xPBS 1%BSAでの希釈1:100</td></tr><tr><td>抗サイトケラチン5 Alexa fluor 647抗体&nbsp;</td><td>アブカム&nbsp;</td><td>AB193895</td><td>一次抗体;1xPBS 1%BSAでの希釈1:100</td></tr><tr><td>抗ウサギIgG、Alexa、フルオロ488&nbsp;抗体</td><td>インビトロジェン</td><td>A21441</td><td>二次抗体;1倍PBS 1%BSAでの希釈1:500</td></tr><tr><td>抗ZO-1ポリクローナル抗体</td><td>プロテインテック</td><td>21773-1-AP</td><td>一次抗体;1xPBS 1%BSAでの希釈1:750</td></tr><tr><td>B27、50倍</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Bovines 血清アルブミン(BSA)フラクションV、NZ-Origin</td><td>ロス</td><td>8076.3</td><td>1x PBSで1%で使用されるブロッキングバッファの成分</td></tr><tr><td>チャンバード&マイクロスライド8ウェル</td><td>イビディ</td><td>80806</td><td>表面改造:ibiTreat</td></tr><tr><td>円錐形チューブ(15 mL)</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>T1943</td><td>平らな底は小さなペレットには適しています。&nbsp;</td></tr><tr><td>ジナトリウムエチレンジアミネテトラアセテート2H2O(EDTA)</td><td>ロス&nbsp;</td><td>8043.2</td><td>自家製:400 mLの水に93.0 g、pHを8.0に調整、H2Oで最大500 mLまで体積を調整;0.5 M EDTA;フローサイトメーターバッファーのコンポーネント</td></tr><tr><td>ダルベッコのバランス塩溶液(DPBS)</td><td>ギブコ</td><td>14190-144</td><td>PBS</td></tr><tr><td>ECHO回転顕微鏡&nbsp;</td><td>エコー</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ECIS&nbsp;Z-シータ -&nbsp;インピーダンスベースのセル解析システム</td><td>応用生物物理学</td><td>ECIS&nbsp;Z-シータ</td><td>システムには以下が含まれます:16井戸および/または96井戸ステーション;外部制御モジュール;ノートパソコン;ECIS制御、取得、表示ソフトウェア;自動セル移動および電気穿孔のための高架フィールドモジュール&nbsp;</td></tr><tr><td>胎児牛血清(FBS)スーペリア</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>S0615</td><td>フローサイトメーターバッファーの成分;293T細胞株の培養培地成分;培養培地HEK293T細胞株の構成要素</td></tr><tr><td>フラッシュ・ファロイディン レッド 594</td><td>バイオレジェンド</td><td>424203</td><td>希釈1:250を1xPBS 1%BSAで使う</td></tr><tr><td>フローサイトメーターバッファー</td><td></td><td></td><td>PBS1回、FBS10%、5mM EDTA</td></tr><tr><td>ゲンタミシン&nbsp;</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>G1272</td><td></td></tr><tr><td>グルタMAX&nbsp;</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>35050-038</td><td>L-アラニル-L-グルタミンジペプチド、adDMEM/F12+/+&nbspの成分;</td></tr><tr><td>ハーバード・バイオクロム・ウルトロスペック10セル密度計</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>10704417</td><td></td></tr><tr><td>HCS CellMask 深紅ステイン</td><td>ライフ・テクノロジーズ</td><td>H32721</td><td>1倍のPBS 1%BSAでの希釈1:1,000</td></tr><tr><td>マウスHEK293T Noggin-Fc発現ベクターをトランスフェクトした細胞株</td><td>クレバーズ教授の細胞株</td><td></td><td>ノギンを生産するために使われていました。培養培地:500ml DMEM、高グルコース、グルタMAX、ピルビン酸(Gibco Life Technologies, 31966)+ 50ml FBS;Farinら 消化器病学 143巻6号(2012年):1518-1529</td></tr><tr><td>HEPES&nbsp;</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>15630056</td><td>adDMEM/F12++&nbspの成分;</td></tr><tr><td>ホエスト 33342&nbsp;</td><td>ライフ・テクノロジーズ</td><td>H3570</td><td>1倍PBSでの希釈1:5,000</td></tr><tr><td>ヒト表皮成長因子(EGF)とnbsp;</td><td>ペプロテック</td><td>AF-100-15</td><td>集中ストック500 & マイクロ;g/mL</td></tr><tr><td>接種ループ</td><td>サーステット</td><td>86.1567.010</td><td></td></tr><tr><td>接種チューブ</td><td>サーステット</td><td>62.515.006</td><td></td></tr><tr><td>ライカ ステラリス 5 共焦点顕微鏡</td><td>ライカ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ルリア・ベルターニ・ブロス(LBブロス)</td><td>ロス&nbsp;</td><td>X968.1</td><td></td></tr><tr><td>マトリゲル</td><td>コーニング</td><td>356231</td><td>細胞外マトリックス(ECM)</td></tr><tr><td>N-アセチルシステイン&nbsp;</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>A9165-25G</td><td>濃縮ストック 500 mM</td></tr><tr><td>ノギンCM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NovoCyte Quanteon&nbsp;</td><td>アジレント</td><td></td><td>フローサイトメーター</td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド(PFA)</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>P6148</td><td>1xPBSで4%使用、4%ショ糖で使用されます</td></tr><tr><td>プリモシン</td><td>インビボジェン</td><td>アント-pm-1</td><td></td></tr><tr><td>Q-VETTESセミマイクロ</td><td>Ratiolab</td><td>2712120</td><td></td></tr><tr><td>RHOKi(Y-27632)</td><td>アブモール</td><td>M1817</td><td>RhoA/ROCK阻害剤;濃縮ストック 10 mM</td></tr><tr><td>R-スポジン1 CM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>R-スポンディン1が293T細胞株を発現</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>SCC111</td><td>R-spo1 CMの製造に使用;培養培地:500ml DMEM、高グルコース、グルタMAX、ピルビン酸(Gibco Life Technologies, 31966)+ 60ml FBS&nbsp;</td></tr><tr><td>TGF&beta;i(A-83-01)</td><td>トクリス</td><td>2939</td><td>ALK4/5/7阻害剤;濃縮ストック5m&nbsp;</td></tr><tr><td>トリトン X-100&nbsp;</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>T9284</td><td>PBSで希釈した0.5%を1回使用しました</td></tr><tr><td>TrypLE発現酵素&nbsp;</td><td>ギブコ</td><td>12605028</td><td>3Dマウス前立腺オルガノイドを消化するための酵素細胞解離剤</td></tr><tr><td>尿路病原性大腸菌 株UTI89</td><td>ドブリント教授からのWT株</td><td></td><td>pFPV-mCherry(追加遺伝子#20956)で形質転換</td></tr></tbody></table>

宿主-病原体相互作用を研究するためのマウス前立腺オルガノイドモデルの生成

Generation of a Mouse Prostate Organoid-Based Model for Studying Host-Pathogen Interactions

Aging men are highly affected by prostate diseases, such as benign prostatic hyperplasia, prostatitis, and prostate cancer. Together, these conditions ...

generation-mouse-prostate-organoid-based-model-for-studying-host

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

腫瘍由来のオルガノイドは、腫瘍の病理学的特徴と臓器特異的な細胞系統を維持できる3D細胞培養モデルの一種です。このプロトコルの例では、科学者が遺伝子操作マウスモデルから前立腺腫瘍からオルガノイドを生成する様子を見ていきます。...

腫瘍からのオルガノイドの調製:3D In Vitro腫瘍モデル

このビデオでは、マトリックスゲルリングベースの培養技術を使用して、単離されたマウス前立腺上皮細胞の培養を実演します。このアプローチは、遺伝的または薬理学的操作に応答して前立腺上皮細胞が3D腺構造を形成する分化能力に関する補完的な情報を提供できます。...

前立腺オルガノイドアッセイ:前立腺上皮細胞の分化能力を研究するためのマトリックスゲルリングベースのex vivo培養技術

幹細胞由来の培養物は、感染症をモデル化する大きな可能性を秘めています。ここでは、成体幹細胞に由来するマウスおよびヒト胃オルガノイドの培養について説明する。オルガノイドには、胃病原体であるヘリコバクター・ピロリをマイクロインジェクションします。...

感染症のためのモデルとしてのオルガノイド：人間の文化とマウス胃オルガノイドとピロリ菌のマイクロインジェクション

遺伝子改変マウスは、前立腺癌のメカニズムを調査するための有用なモデルです。識別とマウス泌尿生殖器から前立腺の丸い突出部を解剖、組織学に基づく区別と分離および下流解析の回転楕円体として体外主な前立腺細胞文化プロトコルをご紹介します。...

培養 3 D 回転楕円体モデルでのマウス前立腺の葉の解剖組織学的特性及び

ここでは、人間プライマリ前立腺における処理をガイドし、表現型を評価するためにエンドポイントを提案するプロトコルを提案する.播種、文化の維持、マトリックス ゲルからの回復形態の定量化、埋め込み断面、FFPE...

処理と人間プライマリ前立腺培養の評価

前立腺腫瘍解剖に焦点を当て、マウス前立腺癌モデルの壊死および解剖の方法を示す。マウス前立腺腫瘍オルガノイドの生成のためのステップバイステッププロトコルも提示される。...

前立腺癌の遺伝子組み換えマウスモデルからの腫瘍オルガノイドの生成

マウス前立腺オルガノイドは、分化を調節するメカニズムを評価する有望な文脈を表す。本論文では、前立腺オルガノイドを確立するための改善されたアプローチについて述べ、(1)オルガノイドからタンパク質リサートを採取する方法、および(2)全マウント共焦点顕微鏡のためのオルガノイドを修正および染色する方法を紹介する。...

オルガノイド培養を用いたマウス前立腺上皮細胞の分化能力の評価

ここで提示する前立腺上皮オルガノイドにおける薬理学的応答を研究するためのプロトコルである。オルガノイドは生体内生物学によく似ており、患者の遺伝学を再現し、魅力的なモデルシステムとなっています。前立腺オルガノイドは、野生型前立腺、遺伝子操作されたマウスモデル、良性ヒト組織、および進行前立腺癌から確立することができる。...

遺伝子型と突然変異プロファイルを薬理学的応答に変換するツールとしての前立腺オルガノイド培養

患者のBMPC標本および骨転移性前立腺癌の異種移植片の三次元培養は、嚢胞、回転楕円および複雑な腫瘍様オルガノイドをもたらす元の腫瘍の機能的不均一性を維持する。本稿は、異種患者由来サンプルの3D培養とIFCを用いた解析のための最適化戦略とプロトコルを提供します。...

患者前立腺癌骨転移標本及びその異種移植片に由来する3次元(3D)オルガノイドの確立と解析

前立腺がんの不均一性と治療抵抗性は依然として課題です。主要な親腫瘍の特徴を保持する患者由来オルガノイド(PDO)を生成するためのプロトコルについて説明します。この標準化されたモデルは、薬物スクリーニングと精密医療の進歩をサポートします。...

患者由来前立腺癌オルガノイドの確立と維持:詳細な実験プロトコル

本研究は、組織幹細胞由来の腸オルガノイドを用いた細菌感染の in vitro 調査方法を提示します。このプロトコルは、2次元でオルガノイドを培養・分化する方法、浸潤性大...

宿主と細菌の相互作用を研究するための侵入膜抽出物または基底膜抽出物を用いた二次元オルガノイド培養

学ぶマウス前立腺オルガノイド由来の2次元培養モデル構築法。上皮細胞の多様性を保持し尿路上皮性大腸菌（UPEC）感染動態を解析可能。前立腺疾患と宿主-病原体相互作用の研究に有用なプラットフォームを提供する。

宿主-病原体相互作用を研究するためのマウス前立腺オルガノイドモデルの生成

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