病原体関連分子パターンによる精巣上体炎のマウスモデル

私たちは、男性の生殖能力における精巣上体の生理学に対する炎症の影響を調査します。損傷なく正確に区画化された炎症誘導剤注射。マウスモデルにおける上体管は高度な外科的技術と訓練の組み合わせを必要とします。

まず、麻酔された動物を手術フィールドの上で仰向けに置きます。電動トリマーペンを使って、マウスの腹部の毛を完全に取り除きます。次に、0.25%クロルヘキシジン溶液に浸した滅菌綿を使用します。

そしてアルコールで腹部無菌を行います。サイズ15のメスで、腹壁右側に約4ミリメートルの垂直切開を行ってください。次に、斜めの鈍い手術用鉗子で優しく皮膚を切り離します。

その後、同じメスを使い、最初の切開の側面の腹膜に約4ミリメートルの垂直切開をもう一度行います。陰嚢の右側を優しく押して精巣の精巣上体を腹腔から慎重に持ち上げます。湾曲した手術用鉗子を使い、精巣上体白色脂肪組織を優しく引き寄せて、精巣上体の最初の部分を位置づけます。

上体白い脂肪組織の助けを借りて、切開部の初期セグメントを露出させます。次に、注入液をあらかじめ装填したハミルトン注射器を、初期セグメントの第1セグメントに約90度平行な角度で配置します。刃取りを下向きにして、針を間質部に慎重に挿入します。

次に、湾曲した手術用鉗子を針の挿入部位に位置させ、精巣上体包と針を優しくつまみます。注射器のプランジャーをゆっくりと押し、刺激液全体が注入されるまで続けます。湾曲した手術用鉗子をそのままにし、約30秒後に慎重に針を抜き、曲がった手術用鉗子を離します。

次に、精巣上体白い脂肪組織を使い、精巣組織を優しく腹腔に戻します。腹膜を特定し、針ホルダーとサイズ5-0の外科用縫合糸を使って2針縫合し、皮膚切開部を2針の縫合糸で閉じます。手術後はマウスの様子を観察し、術後の回復が適切かどうか確認してください。

麻酔をかけた後、マウスを手術部位で仰向けにします。人差し指と親指を陰嚢の下に置いて触診し、精巣と精巣上体の位置を確認します。必要に応じて、腹部の側面を陰嚢に向かって優しくマッサージし、精巣と精巣上体を位置に導きます。

電動トリマーペンを使い、陰嚢の三毛切除術を行い、毛を完全に除去し、0.25%クロルヘキシジン溶液に浸した滅菌綿で消毒し、その後アルコールで消毒します。陰嚢の下の人差し指と親指で、陰嚢の皮膚を優しく伸ばします。サイズ15のメスを使い、陰嚢の内側に約2ミリメートルの垂直切開を行います。

次に、左精巣と精巣上体を優しく腹腔内に戻し、右精巣と精巣上体は陰嚢内に留めます。人差し指と親指を右精巣と精巣上腺の下に置き、陰嚢の皮膚を優しく伸ばしておいてください。その後、斜めの鈍頭手術用鉗子を使い、内精筋膜の先端を慎重に開閉し、内精膜と膣のチュニックを破裂させます。

次に、人差し指と親指の圧力を和らげ、膣のチュニックの開口部から斜めの手術用鉗子を陰嚢の根元に差し込みます。鉗子を使って、尾部精巣上体脂肪を慎重に引き抜き、尾部の精巣上体を局所的にします。次に、精管を局所化し、まっすぐな手術用鉗子をその下に配置します。

ブルドッグピンセットクランプを輸精管に置き、尾骨上体とクランプの間に十分なスペースを確保します。次に、注射液をあらかじめ装填したハミルトン注射器を精管に対して約10度から15度の平行な角度で位置し、ベベルを上に向けて針を挿入します。まっすぐな手術用鉗子を優しく絞って精管を解放し、注射プランジャーをゆっくりと押し込んで刺激液全体を注入します。

さて、まっすぐな手術用鉗子を外してください。湾曲した手術用鉗子を使って、針の挿入部位の周囲を優しくつまみ、慎重に注射針を抜きます。約30秒後に、湾曲した手術用鉗子とブルドッグピンセットクランプを外し、精管を優しく陰嚢に戻します。

次に膣のチュニックを特定し、針ホルダーとサイズ5-0の外科用縫合糸を使って1目縫い合わせます。人差し指を使って、右精巣と精巣上体を優しく腹部に戻し、左の精巣と精巣上体を陰嚢に移します。最後に、針ホルダーとサイズ5-0の外科用縫合糸を使って陰嚢の皮膚切開部を2針の縫合糸で閉じ、マウスの術後の回復を観察します。

初期セグメントの間質性注射により、注入された青いエバンス染料は注射後最大30分間主にセグメント1に限定され、その後隣接するセグメントやカプット精上腺に拡散しました。精管内注射により、青いエバンス染料は注射後最大30分間、セグメント10の腔内に閉じ込められました。組織学的写真顕微鏡写真により、生理食塩水制御注射は治療後72時間の精巣上体形態に変化を与えなかったことが確認されました。

初期セグメントへの間質性LPS注射は、治療後72時間で間質性浮腫および激しい間質性、上皮内、腔内免疫細胞の浸潤を引き起こしました。尾部精巣上体へのLPSまたはLTAの腸内注射により、治療後72時間で間質性浮腫と間質および腔内区画に免疫細胞浸潤が生じました。局所的な精巣上体炎症とそれが男性の生殖能力に与える影響を研究する再現可能な動物モデルの欠如。

炎症誘発性化学物質の直接局所注射により、精巣上体の結果における領域特異的な免疫応答の精密解析が可能になります。