Name: 同一食道がん患者からの腫瘍オルガノイド、がん関連線維芽細胞および対応する線維芽細胞の確立 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-03T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: 学ぶ食道扁平上皮がん患者から腫瘍オルガノイド、がん関連線維芽細胞および対応する線維芽細胞を同時に分離培養する方法。患者固有の実験系により腫瘍微小環境の相互作用を再現性高く研究できる。

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<ol><li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Cancer+Statistics+2020%3A+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).</li>
<li>Abbas, G., Krasna, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+esophageal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Cardiothorac+Surg%22%5BJournal%5D)">Overview of esophageal cancer.</a> Ann Cardiothorac Surg. 6 (2), 131-136 (2017).</li>
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<li>Lagergren, J., Smyth, E., Cunningham, D., Lagergren, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oesophageal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Oesophageal cancer.</a> Lancet. 390 (10110), 2383-2396 (2017).</li>
<li>Lordick, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oesophageal+cancer%3A+ESMO+Clinical+Practice+Guidelines+for+diagnosis%2C+treatment+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Oncol%22%5BJournal%5D)">Oesophageal cancer: ESMO Clinical Practice Guidelines for diagnosis, treatment and follow-up.</a> Ann Oncol. 27 (suppl 5), v50-v57 (2016).</li>
<li>Chhabra, Y., Weeraratna, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblasts+in+cancer%3A+Unity+in+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Fibroblasts in cancer: Unity in heterogeneity.</a> Cell. 186 (8), 1580-1609 (2023).</li>
<li>Caligiuri, G., Tuveson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+fibroblasts+in+cancer%3A+Perspectives+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Activated fibroblasts in cancer: Perspectives and challenges.</a> Cancer Cell. 41 (3), 434-449 (2023).</li>
<li>Mezawa, Y., Orimo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+tumor-+and+metastasis-promoting+carcinoma-associated+fibroblasts+in+human+carcinomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">The roles of tumor- and metastasis-promoting carcinoma-associated fibroblasts in human carcinomas.</a> Cell Tissue Res. 365 (3), 675-689 (2016).</li>
<li>Mezawa, Y., Orimo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+heterogeneity%2C+stability+and+plasticity+in+tumor-promoting+carcinoma-associated+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Phenotypic heterogeneity, stability and plasticity in tumor-promoting carcinoma-associated fibroblasts.</a> FEBS J. 289 (9), 2429-2447 (2022).</li>
<li>Qiu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-associated+fibroblasts%3A+An+emerging+target+against+esophageal+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Cancer-associated fibroblasts: An emerging target against esophageal squamous cell carcinoma.</a> Cancer Lett. 546, 215860(2022).</li>
<li>Xue, M., Tong, Y., Xiong, Y., Yu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+cancer-associated+fibroblasts+in+the+progression%2C+therapeutic+resistance+and+targeted+therapy+of+oesophageal+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Role of cancer-associated fibroblasts in the progression, therapeutic resistance and targeted therapy of oesophageal squamous cell carcinoma.</a> Front Oncol. 13, 1257266(2023).</li>
<li>Dunbar, K. J., Wong, K. K., Rustgi, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-associated+fibroblasts+in+esophageal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Cancer-associated fibroblasts in esophageal cancer.</a> Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 17 (5), 687-695 (2024).</li>
<li>Pimkhaokham, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonrandom+chromosomal+imbalances+in+esophageal+squamous+cell+carcinoma+cell+lines%3A+Possible+involvement+of+the+ATF3+and+CENPF+genes+in+the+1q32+amplicon%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn+J+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Nonrandom chromosomal imbalances in esophageal squamous cell carcinoma cell lines: Possible involvement of the ATF3 and CENPF genes in the 1q32 amplicon.</a> Jpn J Cancer Res. 91 (11), 1126-1133 (2000).</li>
<li>Kijima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+organoids+reveal+therapy+resistance+of+esophageal+and+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional organoids reveal therapy resistance of esophageal and oropharyngeal squamous cell carcinoma cells.</a> Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 7 (1), 73-91 (2019).</li>
<li>Fuchino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+residual+cancer+by+comparison+of+a+pair+of+organoids+established+from+a+patient+with+esophageal+squamous+cell+carcinoma+before+and+after+neoadjuvant+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Cell%22%5BJournal%5D)">Characterization of residual cancer by comparison of a pair of organoids established from a patient with esophageal squamous cell carcinoma before and after neoadjuvant chemotherapy.</a> Hum Cell. 37 (2), 491-501 (2024).</li>
<li>Shen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advancing+precision+medicine+in+esophageal+squamous+cell+carcinoma+using+patient-derived+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Advancing precision medicine in esophageal squamous cell carcinoma using patient-derived organoids.</a> J Transl Med. 22 (1), 1168(2024).</li>
<li>Zhang, S., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+to+establish+patient-derived+xenograft+and+organoid+for+radiosensitivity+of+esophageal+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol to establish patient-derived xenograft and organoid for radiosensitivity of esophageal squamous cell carcinoma.</a> STAR Protoc. 5 (4), 103273(2024).</li>
<li>Miyoshi, H., Stappenbeck, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+expansion+and+genetic+modification+of+gastrointestinal+stem+cells+in+spheroid+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro expansion and genetic modification of gastrointestinal stem cells in spheroid culture.</a> Nat Protoc. 8 (12), 2471-2482 (2013).</li>
<li>Mashima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KIF24+depletion+induces+clustering+of+supernumerary+centrosomes+in+PDAC+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">KIF24 depletion induces clustering of supernumerary centrosomes in PDAC cells.</a> Life Sci Alliance. 5 (11), e202201470(2022).</li>
<li>Hogstrom, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+isolation+of+hormone+receptor-positive+breast+cancer+organoids+and+fibroblasts+reveals+stroma-mediated+resistance+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Simultaneous isolation of hormone receptor-positive breast cancer organoids and fibroblasts reveals stroma-mediated resistance mechanisms.</a> J Biol Chem. 299 (8), 105021(2023).</li>
<li>Schuth, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-specific+modeling+of+stroma-mediated+chemoresistance+of+pancreatic+cancer+using+a+three-dimensional+organoid-fibroblast+co-culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-specific modeling of stroma-mediated chemoresistance of pancreatic cancer using a three-dimensional organoid-fibroblast co-culture system.</a> J Exp Clin Cancer Res. 41 (1), 312(2022).</li>
<li>Farin, H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorectal+cancer+organoid-stroma+biobank+allows+subtype-specific+assessment+of+individualized+therapy+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Colorectal cancer organoid-stroma biobank allows subtype-specific assessment of individualized therapy responses.</a> Cancer Discov. 13 (10), 2192-2211 (2023).</li>
<li>Zapatero, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trellis+tree-based+analysis+reveals+stromal+regulation+of+patient-derived+organoid+drug+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Trellis tree-based analysis reveals stromal regulation of patient-derived organoid drug responses.</a> Cell. 187 (25), 7335-7349 (2024).</li>
<li>Rademaekers, M., Johansson, E. O., Johansson, E., Roberg, K., Wiechec, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-matched+and+unmatched+cancer+associated+fibroblasts+exhibit+differential+effect+on+proliferation+and+FMOD+and+MMP9+gene+expression+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cells+when+co-cultured+in+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell+Int%22%5BJournal%5D)">Tumor-matched and unmatched cancer associated fibroblasts exhibit differential effect on proliferation and FMOD and MMP9 gene expression in head and neck squamous cell carcinoma cells when co-cultured in spheroids.</a> Cancer Cell Int. 24 (1), 190(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100mmディッシュ</td><td>TPP</td><td>93100</td><td></td></tr><tr><td>100倍ペニシリン・ストレプトマイシン(PS)</td><td>ナカライ</td><td>26253-84</td><td></td></tr><tr><td>15mlチューブ</td><td>ファストジーン</td><td>FG2001</td><td></td></tr><tr><td>24ウェル細胞培養プレート</td><td>TPP</td><td>92024</td><td></td></tr><tr><td>48ウェル細胞培養プレート</td><td>TPP</td><td>92448</td><td></td></tr><tr><td>50mlチューブ</td><td>ファストジーン</td><td>FG2004</td><td></td></tr><tr><td>60mmアンテナ</td><td>TPP</td><td>93060</td><td></td></tr><tr><td>6ウェル細胞培養プレート</td><td>TPP</td><td>92006</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>ケイマン</td><td>9001799</td><td></td></tr><tr><td>高度なDMEM/F12&nbsp;</td><td>ギブコ</td><td>12634010</td><td>オルガノイド基底培地 = Advanced DMEM/F12 + GlutaMAX + 1x PS</td></tr><tr><td>Alexa488 アンチマウス IgG</td><td>インビトロジェン</td><td>A11029</td><td></td></tr><tr><td>アンフォテリシンB</td><td>サーモフィッシャー</td><td>15290018</td><td></td></tr><tr><td>抗ビメンチン抗体(V9)</td><td>サンタクルーズ</td><td>SC-6260</td><td>使用のための希釈量は1/500</td></tr><tr><td>B-27</td><td>サーモフィッシャー</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>ボトルトップフィルター</td><td>サルトリウス</td><td>180F15</td><td></td></tr><tr><td>セルストレーナー、100およびマイクロ;m 孔</td><td>BDファルコン</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>コラーゲン酵素、タイプI。</td><td>シグマ</td><td>C0130</td><td></td></tr><tr><td>コラーゲン被覆60mmディッシュ</td><td>岩城</td><td>4010-010</td><td></td></tr><tr><td>ジメチルスルオキシド(DMSO)</td><td>和子</td><td>043-07216</td><td></td></tr><tr><td>Dispase I</td><td>後道修星</td><td>386-02271</td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコ改良型イーグル・ミディアム(DMEM)</td><td>ナカライ</td><td>08459-64</td><td></td></tr><tr><td>エクリプス Ti2</td><td>ニコン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>胎児用牛血清(FBS)</td><td>セラナ</td><td>S-FBS-CO-015</td><td></td></tr><tr><td>線維芽細胞成長培地2</td><td>プロモセル</td><td>C-23020</td><td>線維芽細胞培養地-1 = 線維芽細胞成長培地2</td></tr><tr><td>G418</td><td>インビボジェン</td><td>アント-GN-1</td><td></td></tr><tr><td>グルタMAX&nbsp;</td><td>ギブコ</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>HFDM-1</td><td>KSK</td><td>87-160</td><td>線維芽細胞メディウム-2 = HFDM-1 + 1% FBS + 1 × PS</td></tr><tr><td>Hoechst33342&nbsp;</td><td>ナカライ</td><td>04929-82</td><td></td></tr><tr><td>ヒグロマイシン</td><td>インビボジェン</td><td>アント-HG-1</td><td></td></tr><tr><td>IncuCyteシステム</td><td>エッセン・バイオサイエンス</td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-WRNセル</td><td>ATCC</td><td>CRL-3276</td><td></td></tr><tr><td>マトリゲル</td><td>コーニング</td><td>354234</td><td>基底膜マトリックス = マトリゲル</td></tr><tr><td>N2</td><td>サーモフィッシャー</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>N-アセチル-L-システイン</td><td>和子</td><td>017-05131</td><td></td></tr><tr><td>ニコチナミド</td><td>TCI</td><td>N0078</td><td></td></tr><tr><td>リン酸塩緩衝生理食塩水(PBS)</td><td>ナカライ</td><td>14249-24</td><td></td></tr><tr><td>プリモシン</td><td>インビボジェン</td><td>ANT-PM-05</td><td></td></tr><tr><td>組換えヒトEGF</td><td>ペプロテック</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>組換えヒトFGF-10</td><td>ペプロテック</td><td>PEP-100-26</td><td></td></tr><tr><td>SB202190</td><td>セレック</td><td>S1077</td><td></td></tr><tr><td>メス、第11号</td><td>フェザー</td><td>8-3086-02</td><td></td></tr><tr><td>ステムフル</td><td>住友ベークライト</td><td>MS-90150</td><td>低付着型15 mLチューブ=STEMFULLです</td></tr><tr><td>TrypLEエクスプレス</td><td>ギブコ</td><td>12605028</td><td>オルガノイドのためのトリプシン = TrypLE Express</td></tr><tr><td>トリプシン</td><td>ナカライ</td><td>35556-44</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>セレック</td><td>S1049</td><td></td></tr></tbody></table>

同一食道がん患者からの腫瘍オルガノイド、がん関連線維芽細胞および対応する線維芽細胞の確立

Establishment of Tumor Organoids, Carcinoma-Associated Fibroblasts, and Counterpart Fibroblasts from the Same Esophageal Cancer Patient

In esophageal squamous cell carcinoma (ESCC), the acquisition of treatment resistance and tumor recurrence remain major clinical challenges. ...

establishment-tumor-organoids-carcinoma-associated-fibroblasts

Research

JoVE Journal

Cancer Research

がん研究

このプロトコルは、単一細胞消化の有無にかかわらず食道腺癌オルガノイドの継代培養および凍結保存の方法を記述し、研究者が実験計画に基づいて適切な戦略を選択できるようにする。...

食道腺癌オルガノイドの継代培養と凍結保存:単一細胞消化の長所と短所

このプロトコルでは、化学的発がんによって誘発される正常、腫瘍前、および扁平上皮がんの病変を表すマウスの口腔食道3Dオルガノイドを生成および特性評価するための重要なステップについて説明します。...

3Dオルガノイドによる口腔食道扁平上皮癌のモデリング

オルガノイド-線維芽細胞共培養は、 in vivo...

オルガノイド共培養を用いた食道線維芽細胞の機能特性評価と可視化

腫瘍オルガノイドは、がん研究と個別化医療へのアプローチに革命をもたらしました。これらは、臨床的に関連性のある腫瘍モデルであり、研究者は診療所で腫瘍の一歩先を行くことができます。このプロトコルは、新鮮な膵臓腫瘍組織サンプルおよび膵臓腺癌起源の患者由来の異種移植片から腫瘍オルガノイドを確立します。...

膵臓癌由来腫瘍オルガノイドおよび線維芽細胞の新鮮組織からの樹立

本プロトコルは、腫瘍進行のさまざまな段階を表す食道オルガノイドモデルの確立と組織学的分析について説明しています。この方法により、研究者は、正常組織からがん組織への移行中の細胞形態、空間構成、および分子マーカー発現パターンの変化を研究することができます。...

正常組織から癌組織への進行をモデル化する食道オルガノイドの樹立と組織学的解析

CRC の PDX 由来器官毛細細胞に緑色蛍光タンパク質 (GFP) レンチ ウイルス粒子の効率的な伝達のためのプロトコルを示す本普及のひと大腸癌の高感度検出 (CRC)...

GFP レンチ ウイルス導入オルガノイド培養患者由来大腸腫瘍によって生成される微小の高感度検出

患者のBMPC標本および骨転移性前立腺癌の異種移植片の三次元培養は、嚢胞、回転楕円および複雑な腫瘍様オルガノイドをもたらす元の腫瘍の機能的不均一性を維持する。本稿は、異種患者由来サンプルの3D培養とIFCを用いた解析のための最適化戦略とプロトコルを提供します。...

患者前立腺癌骨転移標本及びその異種移植片に由来する3次元(3D)オルガノイドの確立と解析

癌細胞と線維芽細胞を同時注入し、腫瘍の成長を経時的に監視するためのプロトコルが提供されます。このプロトコルは、腫瘍増殖の調節因子としての線維芽細胞の役割の分子基盤を理解するために使用できます。...

腫瘍増殖における癌関連線維芽細胞の役割を調べるためのマウスモデル

本論文は、三重陰性乳癌の同種マウスモデルからの原発性癌関連線維芽細胞の単離と培養と、腫瘍微小環境を標的とするように設計された新規ナノ粒子の前臨床試験への応用を目的とする。...

標的ナノ粒子の研究のための乳癌の同質性マウスモデルからの原発癌関連線維芽細胞の分離

非常に正確な インビトロ ハイスループットアッセイシステムは、がん組織と同様に患者由来の腫瘍オルガノイド(PDU)を使用して抗がん剤を評価するために開発されましたが、96ウェルプレートと384ウェルプレートを備えた インビトロ...

患者由来腫瘍オルガノイドを用いたイン ビトロ アッセイのハイスループット

学ぶ食道扁平上皮がん患者から腫瘍オルガノイド、がん関連線維芽細胞および対応する線維芽細胞を同時に分離培養する方法。患者固有の実験系により腫瘍微小環境の相互作用を再現性高く研究できる。

同一食道がん患者からの腫瘍オルガノイド、がん関連線維芽細胞および対応する線維芽細胞の確立

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