Name: MLVベースの偽ウイルスを用いたSARS-CoV-2侵入阻害薬の潜在的な抗ウイルス薬同定の手順 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:10:00.000+00:00
Duration: 11 min 43 s
Description: 学ぶMLVベースの偽ウイルスを用いたSARS-CoV-2侵入阻害薬の同定方法。BSL-2条件下で安全に抗ウイルス化合物をスクリーニングし、ルシフェラーゼアッセイで侵入を定量化する効率的なプロトコルです。

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<ol><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SARS-CoV-2+and+emerging+variants%3A+Unmasking+structure%2C+function%2C+infection%2C+and+immune+escape+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">SARS-CoV-2 and emerging variants: Unmasking structure, function, infection, and immune escape mechanisms.</a> Front Cell Infect Microbiol. 12, 869832(2022).</li>
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<li>Ferrara, F., Temperton, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudotype+neutralization+assays%3AFrom+laboratory+bench+to+data+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Protoc%22%5BJournal%5D)">Pseudotype neutralization assays:From laboratory bench to data analysis.</a> Methods Protoc. 1 (1), 8(2018).</li>
<li>Soneoka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transient+three-plasmid+expression+system+for+the+production+of+high+titer+retroviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">A transient three-plasmid expression system for the production of high titer retroviral vectors.</a> Nucleic Acids Res. 23 (4), 628-633 (1995).</li>
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<li>Zhang, J. H., Chung, T. D., Oldenburg, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+statistical+parameter+for+use+in+evaluation+and+validation+of+high+throughput+screening+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">A simple statistical parameter for use in evaluation and validation of high throughput screening assays.</a> J Biomol Screen. 4 (2), 67-73 (1999).</li>
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<li>Bruett, L., Clements, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+murine+leukemia+virus+vectors+pseudotyped+with+the+visna+virus+envelope+show+expanded+visna+virus+cell+tropism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Functional murine leukemia virus vectors pseudotyped with the visna virus envelope show expanded visna virus cell tropism.</a> J Virol. 75 (23), 11464-11473 (2001).</li>
<li>Radoshitzky, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transferrin+receptor+1+is+a+cellular+receptor+for+New+World+haemorrhagic+fever+arenaviruses%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transferrin receptor 1 is a cellular receptor for New World haemorrhagic fever arenaviruses.</a> Nature. 446 (7131), 92-96 (2007).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+retroviral+pseudotypes+with+influenza+hemagglutinins+from+H1%2C+H3%2C+and+H5+subtypes+for+sensitive+and+specific+detection+of+neutralizing+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Establishment of retroviral pseudotypes with influenza hemagglutinins from H1, H3, and H5 subtypes for sensitive and specific detection of neutralizing antibodies.</a> J Virol Methods. 153 (2), 111-119 (2008).</li>
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<li>Sholukh, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+cell-based+and+surrogate+SARS-CoV-2+neutralization+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of cell-based and surrogate SARS-CoV-2 neutralization assays.</a> J Clin Microbiol. 59 (10), e0052721(2021).</li>
<li>Xiang, Q., Li, L., Wu, J., Tian, M., Fu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+pseudovirus+system+in+the+development+of+vaccine%2C+antiviral-drugs%2C+and+neutralizing+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Res%22%5BJournal%5D)">Application of pseudovirus system in the development of vaccine, antiviral-drugs, and neutralizing antibodies.</a> Microbiol Res. 258, 126993(2022).</li>
<li>Johnson, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+pseudotyping+conditions+for+the+SARS-CoV-2+spike+glycoprotein%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Optimized pseudotyping conditions for the SARS-CoV-2 spike glycoprotein.</a> J Virol. 94 (21), e01062-e01120 (2020).</li>
<li>Xiaojie, S., Yu, L., Lei, Y., Guang, Y., Min, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralizing+antibodies+targeting+SARS-CoV-2+spike+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Neutralizing antibodies targeting SARS-CoV-2 spike protein.</a> Stem Cell Res. 50, 102125(2021).</li>
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<li>Monteil, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+SARS-CoV-2+infections+in+engineered+human+tissues+using+clinical-grade+soluble+human+ACE2%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Inhibition of SARS-CoV-2 infections in engineered human tissues using clinical-grade soluble human ACE2.</a> Cell. 181 (4), 905-913.e7 (2020).</li>
<li>Ahmad, I., Pawara, R., Surana, S., Patel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+repurposed+ACE2+inhibitors%3ASARS-CoV-2+entry+blockers+of+COVID-19%5BTitle%5D)+AND+%22Top+Curr+Chem%22%5BJournal%5D)">The repurposed ACE2 inhibitors:SARS-CoV-2 entry blockers of COVID-19.</a> Top Curr Chem. 379 (6), 40(2021).</li>
<li>Alqaaf, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovering+natural+products+as+potential+inhibitors+of+SARS-CoV-2+spike+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Discovering natural products as potential inhibitors of SARS-CoV-2 spike proteins.</a> Sci Rep. 15 (1), 200(2025).</li>
<li>Chan, C. C. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+novel+small-molecule+inhibitors+of+SARS-CoV-2+by+chemical+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharm+Sin+B%22%5BJournal%5D)">Identification of novel small-molecule inhibitors of SARS-CoV-2 by chemical genetics.</a> Acta Pharm Sin B. 14 (9), 4028-4044 (2024).</li>
<li>Lei, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralization+of+SARS-CoV-2+spike+pseudotyped+virus+by+recombinant+ACE2-Ig%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Neutralization of SARS-CoV-2 spike pseudotyped virus by recombinant ACE2-Ig.</a> Nat Commun. 11 (1), 2070(2020).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-influenza+virus+drug%2C+arbidol+is+an+efficient+inhibitor+of+SARS-CoV-2+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discov%22%5BJournal%5D)">The anti-influenza virus drug, arbidol is an efficient inhibitor of SARS-CoV-2 in vitro.</a> Cell Discov. 6 (1), 28(2020).</li>
<li>Kang, Y., Shi, Y., Xu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arbidol%3AThe+current+demand%2C+strategies%2C+and+antiviral+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Immun+Inflamm+Dis%22%5BJournal%5D)">Arbidol:The current demand, strategies, and antiviral mechanisms.</a> Immun Inflamm Dis. 11 (8), e984(2023).</li>
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<table><tbody><tr><td>0.2 & micro;m 低タンパク質結合シリンジフィルター&nbsp;</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>720-1320</td><td>シリンジフィルター(0.2 & μ;男性、13mm、PES、不妊)</td></tr><tr><td>0.25%トリプシン-EDTA 1X溶液</td><td>ギブコ</td><td>25200-056</td><td>トリプシン-EDTA(0.25%)、フェノールレッド</td></tr><tr><td>0.45 & micro;m PVDFボトルトップフィルターユニット&nbsp;</td><td>アヴァントール</td><td>514-1045</td><td>ボトルトップ真空ろ過システム(PVDF、250ml、50mm、0、45およびマイクロ;m)</td></tr><tr><td>1.5 mL 無菌マイクロ遠心分離機チューブ</td><td>エッペンドルフ</td><td>30123611</td><td>セーフロック&nbsp;真空管</td></tr><tr><td>100 X ペニシリン ストレプトマイシン溶液</td><td>コーニング</td><td>30-002-CI</td><td>ペニシリン・ストレプトマイシン溶液、100倍</td></tr><tr><td>5 X ルシフェラーゼアッセイ溶解バッファー&nbsp;</td><td>プロメガ</td><td>E2650</td><td>プロメガ・ブライトグロー・ルシフェラーズアッセイシステムの一部</td></tr><tr><td>50 mL 滅菌円錐管</td><td>コーニング&nbsp;</td><td>352070</td><td>50 mL 高透明度PP遠心分離機チューブ、円錐形底、無菌</td></tr><tr><td>6ウェル組織培養プレート</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>140675</td><td>細胞培養処理マルチディッシュ</td></tr><tr><td>96ウェル組織培養プレート</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>168055</td><td>ナンク&トレード;MicroWell&trade;96ウェル、ナンクロンデルタ処理済み、平底マイクロプレート</td></tr><tr><td>アルビドール塩酸塩</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>SML0860</td><td></td></tr><tr><td>分岐ポリエチレンニミン、25 kDa</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>408727</td><td></td></tr><tr><td>共焦点レーザー顕微鏡および(FV 3000)</td><td>オリンパス社</td><td>SKU:FV3000</td><td></td></tr><tr><td>ジメチルスルホキシド(DMSO)</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>DMEM(ダルベッコ改良イーグルミディウム)含有:高グルコース、L-グルタミン、フェノールレッド、ピルビン酸ナトリウム</td><td>ギブコ</td><td>11995-065</td><td></td></tr><tr><td>胎児用牛血清(FBS)</td><td>ギブコ</td><td>26140-079</td><td>熱不活化(56&deg;C、30分)</td></tr><tr><td>HEK293T由来細胞(Lenti-X 293T細胞株)</td><td>タカラバイオ</td><td>632180</td><td>HEK293細胞株の高度に形質移行可能なサブクローンの存在であり、ウイルスタンパク質発現の高レベルを支えます</td></tr><tr><td>HEPESバッファ</td><td>ギブコ</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>感染に対して非常に感受性の高い細胞(293T-ACE2。TMPRSS2(mCherry)細胞系)</td><td>BEIリソース</td><td>NR-55293</td><td>ACE2およびTMPRSS2を安定的に発現するように修飾されたHEK293T細胞株</td></tr><tr><td>塩酸およびnbsp;</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>H1758-500ML</td><td></td></tr><tr><td>逆位相差顕微鏡&nbsp;</td><td>オリンパス社およびnbsp;</td><td>SKU:2404040005</td><td></td></tr><tr><td>イソプロパノール</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>I9516-500ML</td><td></td></tr><tr><td>ルシフェラーゼ基質</td><td>プロメガ</td><td>E2650</td><td>ブライトグロールシフェラーゼアッセイシステムの一部</td></tr><tr><td>発光検出を備えたマイクロプレートリーダー</td><td>アジレント・バイオテック</td><td>BTH1MG</td><td></td></tr><tr><td>MTT [3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウム臭化物]</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>M2128</td><td></td></tr><tr><td>不透明な白色96ウェルプレート</td><td>コーニング</td><td>3917</td><td>96ウェルのソリッドホワイトフラットボトムポリスチレンTC処理マイクロプレート</td></tr><tr><td>パラフィルム</td><td>ベミス</td><td>PM999</td><td></td></tr><tr><td>pcDNA3-EGFPプラスミド</td><td>アッドジーネ</td><td>13031</td><td>pcDNA3-EGFPはダグ・ゴーレンボック(Addgeneプラスミド#13031;http://n2t.net/addgene:13031;RRID:Addgene_13031)</td></tr><tr><td>pCMV-MLVガグポルプラスミド</td><td>-</td><td>-</td><td>ゲイリー・ウィッタカー博士よりご厚意で寄贈されました。</td></tr><tr><td>Ca2+およびMg2+を含まないリン酸緩衝生理食塩水(PBS)</td><td>コーニング</td><td>21-040-CV</td><td>リン酸緩衝生理食塩水、カルシウムとマグネシウムなしの1倍</td></tr><tr><td>Promega PureYield プラスミド Maxiprep システム</td><td>プロメガ</td><td>A2393</td><td></td></tr><tr><td>pTG-Lucプラスミド</td><td>-</td><td>-</td><td>ゲイリー・ウィッタカー博士よりご厚意で寄贈されました。</td></tr><tr><td>pUNO1-SARS-CoV-2 スパイク(武漢)プラスミド</td><td>インビボジェン</td><td>P1スパイク</td><td></td></tr><tr><td>pVSV-Gプラスミド</td><td>アッドジーネ</td><td>138479</td><td>pVSV-Gはアキツ・ホタ(Addgeneプラスミド#138479;http://n2t.net/addgene:138479;RRID:Addgene_138479)</td></tr><tr><td>組換えヒトACE2-Fc融合タンパク質</td><td>インビボジェン</td><td>fc-hace2</td><td></td></tr><tr><td>還元血清培地(Opti-MEM)</td><td>ギブコ</td><td>31985-070</td><td>Opti-MEM還元血清培地</td></tr></tbody></table>

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疑似ウイルス感染のハイスループット蛍光イメージングを用いたSARS-CoV-2中和抗体の検出

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感染性ウイルスと非感染性ウイルスを区別するためのアプタマーのin vitro選択

偽型ウイルス(PV)は、複製欠損のあるウイルス粒子であり、本物のウイルスを扱うよりも安全な条件下で宿主とウイルスの相互作用を研究するために使用されます。ここでは、SARS-CoV-2...

中和アッセイを介してSARS-CoV-2に対する体液性免疫応答を監視するための分子ツールとしての偽型ウイルス

このプロトコルでは、SARS-CoV-2変異体の感染力と中和抗体に対する感受性を迅速に定量化するためのプラットフォームとして、新しいハイブリッドアルファウイルス-SARS-CoV-2偽ウイルス(Ha-CoV-2)のアプリケーションについて説明します。...

SARS-CoV-2変異株の迅速定量と中和抗体へのHa-CoV-2偽ウイルスの応用

私たちは、本物のウイルスを密接に模倣したSARS-CoV-2ウイルス様粒子を生成するための最適化された in vitro プロトコルを提示します。このアプローチにより、バイオセーフティレベル3の実験室を必要とすることなく、ウイルスの感染、組み立て、および出口メカニズムの調査が可能になります。...

SARS-CoV-2ウイルス様粒子系の作製によるウイルスライフサイクルの in vitro

学ぶMLVベースの偽ウイルスを用いたSARS-CoV-2侵入阻害薬の同定方法。BSL-2条件下で安全に抗ウイルス化合物をスクリーニングし、ルシフェラーゼアッセイで侵入を定量化する効率的なプロトコルです。

MLVベースの偽ウイルスを用いたSARS-CoV-2侵入阻害薬の潜在的な抗ウイルス薬同定の手順

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