Name: 細胞外フラックスアッセイを用いた一次ミクログリアにおける解糖系の研究 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T12:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 21 s
Description: 学ぶ 細胞外フラックスアッセイを用いた一次ミクログリアの解糖系測定法。新生マウス脳皮質由来細胞でグリコリシスストレステストを実施し、炎症刺激下での代謝変化をリアルタイムに評価する再現性の高いプロトコルです。

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<ol><li>Prinz, M., Jung, S., Priller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+biology%3A+One+century+of+evolving+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Microglia biology: One century of evolving concepts.</a> Cell. 179, 292-311 (2019).</li>
<li>Tay, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+microglia+recovery+population+revealed+by+single-cell+RNAseq+following+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol.+Commun%22%5BJournal%5D)">Unique microglia recovery population revealed by single-cell RNAseq following neurodegeneration.</a> Acta Neuropathol. Commun. 6, 87(2018).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolysis+and+oxidative+phosphorylation+play+critical+roles+in+natural+killer+cell+receptor-mediated+natural+killer+cell+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Glycolysis and oxidative phosphorylation play critical roles in natural killer cell receptor-mediated natural killer cell functions.</a> Front. Immunol. 11, 202(2020).</li>
<li>Soto-Heredero, G., Gómezde Las Heras, M. M., Gabandé-Rodríguez, E., Oller, J., Mittelbrunn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolysis-a+key+player+in+the+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Glycolysis-a key player in the inflammatory response.</a> FEBS J. 287, 3350-3369 (2020).</li>
<li>O'Neill, L. A., Kishton, R. J., Rathmell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+immunometabolism+for+immunologists%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A guide to immunometabolism for immunologists.</a> Nat. Rev. Immunol. 16, 553-565 (2016).</li>
<li>Bernier, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+metabolic+flexibility+supports+immune+surveillance+of+the+brain+parenchyma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Microglial metabolic flexibility supports immune surveillance of the brain parenchyma.</a> Nat. Commun. 11, 1559(2020).</li>
<li>Bernier, L. P., York, E. M., MacVicar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunometabolism+in+the+brain%3A+How+metabolism+shapes+microglial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Immunometabolism in the brain: How metabolism shapes microglial function.</a> Trends Neurosci. 43, 854-869 (2020).</li>
<li>Geric, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+reprogramming+during+microglia+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunometabolism%22%5BJournal%5D)">Metabolic reprogramming during microglia activation.</a> Immunometabolism. 1, e190002(2019).</li>
<li>Yoo, I., Ahn, I., Lee, J., Lee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+flux+assay+%28Seahorse+assay%29%3A+Diverse+applications+in+metabolic+research+across+biological+disciplines%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cells%22%5BJournal%5D)">Extracellular flux assay (Seahorse assay): Diverse applications in metabolic research across biological disciplines.</a> Mol. Cells. 47, 100095(2024).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamine+metabolism+modulates+microglial+NLRP3+inflammasome+activity+through+mitophagy+in+Alzheimer%E2%80%99s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Glutamine metabolism modulates microglial NLRP3 inflammasome activity through mitophagy in Alzheimer’s disease.</a> J. Neuroinflammation. 21, 261(2024).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transporter+1+critically+controls+microglial+activation+through+facilitating+glycolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Glucose transporter 1 critically controls microglial activation through facilitating glycolysis.</a> Mol. Neurodegener. 14, 2(2019).</li>
<li>Lu, J., Zhou, W., Dou, F., Wang, C., Yu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPV1+sustains+microglial+metabolic+reprogramming+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">TRPV1 sustains microglial metabolic reprogramming in Alzheimer's disease.</a> EMBO Rep. 22, e52013(2021).</li>
<li>Orihuela, R., McPherson, C. A., Harry, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+M1%2FM2+polarization+and+metabolic+states%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Microglial M1/M2 polarization and metabolic states.</a> Br. J. Pharmacol. 173, 649-665 (2016).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+glycolytic+reprogramming+controls+microglial+inflammatory+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Early glycolytic reprogramming controls microglial inflammatory activation.</a> J. Neuroinflammation. 18, 129(2021).</li>
<li>Kaushik, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+glycolytic+metabolism+supports+transmigration+of+brain-infiltrating+macrophages+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Enhanced glycolytic metabolism supports transmigration of brain-infiltrating macrophages in multiple sclerosis.</a> J. Clin. Invest. 129, 3277-3292 (2019).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR-mediated+metabolic+reprogramming+shapes+distinct+microglia+functions+in+response+to+lipopolysaccharide+and%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">mTOR-mediated metabolic reprogramming shapes distinct microglia functions in response to lipopolysaccharide and.</a> Glia. 68, 1031-1045 (2020).</li>
<li>Montilla, A., Zabala, A., Matute, C., Domercq, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+metabolic+characterization+of+microglia+culture+in+a+defined+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Cell.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Functional and metabolic characterization of microglia culture in a defined medium.</a> Front. Cell. Neurosci. 14, 22(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1M HEPESソリューション</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>H0887</td><td></td></tr><tr><td>1回のHBSS</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp;14175-079</td><td></td></tr><tr><td>2.5% トリプシン</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp;15090-046</td><td></td></tr><tr><td>2DG</td><td>ミリポールシグマ&nbsp;</td><td>D6134</td><td></td></tr><tr><td>抗生物質/抗菌薬など;</td><td>ギブコ</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>D & ndash;(+)グルコース、無水およびnbsp;</td><td>熱科学&nbsp;&nbsp;</td><td>A16828.36</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>ギブコ</td><td>&nbsp;11965-092</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>ミリポールシグマ&nbsp;</td><td>11284932001- ロッシュ</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>フィッシャーブランド</td><td>FB12999102</td><td></td></tr><tr><td>グルタマックス</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp;35050-061</td><td></td></tr><tr><td>L-乳酸キット</td><td>アブカム</td><td>AB65330</td><td></td></tr><tr><td>LPS&nbsp;</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>&nbsp;L4391</td><td></td></tr><tr><td>MEM NEAA&nbsp;</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp;11140-050</td><td></td></tr><tr><td>オリゴマイシンA</td><td>ミリポールシグマ&nbsp;</td><td>495455</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp;15240-062</td><td></td></tr><tr><td>pH指示ストリップ</td><td>フィッシャーブランド</td><td>13-640-516</td><td></td></tr><tr><td>シーホース XFe24</td><td>アジレント・テクノロジーズ</td><td>該当なし</td><td>一般名:細胞外フラックス分析装置</td></tr><tr><td>Seahorse 24 V7 PS細胞培養マイクロプレート</td><td>アジレント・シーホース</td><td>100777-004</td><td>一般名:細胞外フラックス細胞培養マイクロプレート</td></tr><tr><td>シーホース分析XFキャリブラントバッファー(pH 7.4)</td><td>アジレント・シーホース&nbsp;</td><td>&nbsp;100840-000</td><td>一般名:細胞外フラックスキャリブラントバッファー</td></tr><tr><td>タツノオトシゴアッセイ XF DMEM 媒体(pH 7.4)</td><td>アジレント・シーホース&nbsp;&nbsp;</td><td>&nbsp;103575-100</td><td>一般名:細胞外フラックスアッセイ培地</td></tr><tr><td>シーホース細胞外フラックス分析キット</td><td>アジレント・シーホース&nbsp;</td><td>102342-100</td><td>一般名:細胞外フラックスキャリブレーションプレート&nbsp;</td></tr><tr><td>ピルビン酸ナトリウム&nbsp;</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp;11360-070</td><td></td></tr></tbody></table>

細胞外フラックスアッセイを用いた一次ミクログリアにおける解糖系の研究

Investigating Glycolysis in Primary Microglia Using Extracellular Flux Assay

Microglia, the resident macrophage cells of the central nervous system, dynamically alter their metabolic programs in response to physiological and ...

investigating-glycolysis-primary-microglia-using-extracellular-flux

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

脳の細胞の不均質性からプライマリミクログリアを分離すると、生理学的および病理学的条件の両方で彼らの役割を調査することが不可欠である。このプロトコルは、機械的な分離と高収率かつ高純度を提供する混合細胞培養技術、実行可能な主なミクログリア細胞について説明します。...

新生仔ラットの脳組織の混合グリア細胞培養物から主要なミクログリアの分離

このプロトコルは、細胞外フラックスアッセイを使用して初代白血病細胞の細胞外酸性化率(ECAR)と酸素消費率(OCR)を測定するための生化学的アプローチを提供します。これらの細胞の代謝プロファイルの評価は、それらの要求を特徴付けるのに役立ち、個別化治療につながります。...

細胞外フラックスアッセイ:細胞の代謝プロファイルを測定する方法

代謝リプログラミングは、M1およびM2マクロファージの分極のための特性的かつ前提条件です。この原稿では、マウス骨髄由来マクロファージにおける解糖系とミトコンドリア機能の基本パラメータを測定するためのアッセイについて説明します。このツールは、特定の要因がマクロファージの代謝と表現型にどのように影響するかを調査するために適用できます。...

リアルタイム細胞外フラックス分析を用いた偏光M1、M2の骨髄由来マクロファージの代謝特性評価

解糖系は、複数の生物学的システムにおける代謝マーカーを特徴づけるものです。H+の細胞外フラックスを測定することで解糖系をモニタリングすることは一般的ですが、定量的かつ明確にするためには補正が必要です。ここでは、細胞外酸性化の呼吸器系と解糖系のソースを区別するために、細胞外フラックスデータを収集して補正する方法を示します。...

外酸生産の測定と解析は、解糖速度を決定するために

代謝の研究は、免疫学の研究にますます関連性を持つようになっています。ここでは、マウス脾細胞、Tリンパ球、Bリンパ球における解糖系とミトコンドリア呼吸を測定するための最適化された方法を紹介します。...

リンパ球における解糖およびミトコンドリア呼吸を分析するために最適化されたプロトコル

本論文では、末梢血から分離されたヒトナチュラルキラー(NK)細胞の解糖とミトコンドリア呼吸を、静止状態またはIL15誘発活性化後に測定する方法について述べた。記載されたプロトコルは、他のサイトカインまたは可溶性刺激によって活性化された初代ヒトNK細胞に容易に拡張することができる。...

ヒトナチュラルキラー細胞代謝の解析

ここでは、フローサイトメトリーを使用してvGLUT1陽性シナプスとpHRodo...

フローサイトメトリーを用いたシナプス材料のミクログリア包絡の定量化

アルコールの誤用は、ミトコンドリア呼吸の抑制と生体エネルギー学により、肺胞マクロファージ(AM)免疫を損ないます。私たちは最近、エタノール(EtOH)への曝露がAMのミトコンドリア呼吸に対するグルタミン依存性を増加させることを示しました。本明細書では、細胞外フラックスバイオアナライザーを用いて、EtOH処理AMにおけるミトコンドリア呼吸に対するグルタミンの使用を決定する方法が提供される。...

細胞外フラックスバイオアナライザーを用いた慢性エタノール曝露による肺胞マクロファージの燃料源としてのグルタミンの評価

ここでは、骨髄、脾臓、梗塞性心筋からマクロファージを抽出し、その後、生細胞の代謝フラックスを評価する方法を詳しく紹介します。...

脾臓および心臓マクロファージおよび骨髄単球における ex vivo 代謝フラックスの解析

ミクログリア細胞からの精製ミトコンドリアの調製、 N型糖鎖放出のためのミトコンドリアタンパク質の単離、および赤外マトリックス支援レーザー脱離エレクトロスプレーイオン化と高分解能精密質量分析装置質量分析法を組み合わせた細胞内ミトコンドリア糖鎖の迅速な検出のためのプロトコールが開発されました。...

糖鎖分析のためのミクログリアからのミトコンドリア調製

学ぶ 細胞外フラックスアッセイを用いた一次ミクログリアの解糖系測定法。新生マウス脳皮質由来細胞でグリコリシスストレステストを実施し、炎症刺激下での代謝変化をリアルタイムに評価する再現性の高いプロトコルです。

細胞外フラックスアッセイを用いた一次ミクログリアにおける解糖系の研究

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