LC-mateを用いた自動HPLC分離:マイクロスケール精製のための統合反復オートサンプラーおよびフラクションコレクター

私たちの研究は、HPLCセットアップに直接接続できる機器の設計に焦点を当てており、これらの繰り返しの手作業を自動化することにあります。手動のサンプル注入や分数採取は非常に面倒です。LC-MateはHPLC試料精製のためのクロスプラットフォーム自動ソリューションを提供します。

まず、HPLCシステム、LC-Mate、クロマトグラフィーカラム間の溶剤配管接続を確認し、適切な流れ経路を確保してください。UV検出器とLC-Mate間の信号伝送線路の接続を確認するには、黒線を赤端子に、白線を黒端子に接続してアナログ信号出力の極性に合わせます。LC-Mateディスプレイを観察して、アナログ信号の波形が現れるか確認してください。

波形が見えない場合は、黒い線を黒い端子に、白線を赤い端子に接続して接続を逆にします。紫外線検出器とLC-Mateのトリガー接続を確認するには、データケーブルの単端を紫外線検出器の出力ポートに接続します。ケーブルの反対側の黒線と白線を、それぞれLC-Mateの黒と青のトリガー端子に接続してください。端子を締めてしっかりとトリガー接続を確保してください。

次に、HPLCシステムとLC-Mateの適切な起動を確実にしてください。インターフェースのLC Mateアイコンをクリックすると、自動的にシステム自己テストプログラムを実行し、主要なハードウェアモジュールを初期化できます。短いプロンプト音と自己テストメッセージの消失を待って、初期化が完了したことを確認します。

HPLC分離条件を設定し、カラムの平衡化のために洗脱を開始します。テストインターフェースで注入量、洗脱時間、繰り返し時間を入力し、スタートアイコンを押すとオートサンプラー、フラクションコレクター、HPLC操作が開始されます。解像度、稼働時間、保持時間、注入量、紫外線波長などの実現可能な分離条件を特定します。

インターフェースの左側にあるThreshold関数モジュールを選択すると、パラメータ設定画面が開かれます。注入量、繰り返し時間、しきい値、洗脱時間を入力し、開始ボタンを押すと自動操作が開始されます。ステータスインジケーターを監視してください。

サンプル導入を確認するために注入中を観察してください。分離進行中インジケーターを確認し、クロマトグラフィー分離が進行しているか確認してください。残留液体を排出しているかどうかを示すために、シリンジの空液インジケーターに注目してください。

時間に基づく分数収集を行うには、インターフェース左側からタイミング収集モジュールを選択してパラメータメニューを開きます。入力注入量、繰り返し時間、洗脱時間、必要な収集時間。スタートボタンを押すと自動シーケンスが繰り返されます。

次に、インターフェースの左側にある「全集」機能モジュールを選択します。すべてのクロマトピークを別々に収集する収集閾値を設定します。パイプライン洗浄のために、オートサンプラーの注入パイプラインを清潔な溶媒が入った小さな瓶に挿入します。

インターフェースの左側からクレンジングモジュールを選択してパラメータメニューを開きます。次に、注入量を0から1000の間に設定し、インジェクターパイプライン洗浄の繰り返し時間を設定します。インジェクターパイプラインの洗浄を開始するには、下の「洗浄完了」をクリックしてください。

サイクルカウントを監視して、完了した洗車サイクルを追跡しましょう。収集パイプラインの清掃時間を設定します。「現在のパイプライン」下の「クレンジング」をクリックして、回収パイプラインクレンジングを開始します。

現在のパイプライン表示を監視し、パイプライン0からパイプライン10までの連続清掃を確認します。自動保存を有効にして、各洗脱サイクル後にクロマトグラムを保存できるようにします。あるいは、エリューション後に「保存」ボタンをクリックして手動でデータを保存する方法もあります。

ダイアログボックスにメタデータを入力した後、ローカルストレージ、SDカード、または外部ユニバーサルシリアルバスドライブからストレージ場所を選択します。LC-Mateを用いた半準備的HPLC分離により、2インチO-ガロイル-ハイパーロサイドの精製時に連続的かつ安定したサンプル注入および分画収集が達成されました。LC-Mateシステムを用いて、精製された2インチO-ガロイリル-ハイパーロシドを効果的に除去しました。

フロリジンおよびトリロバチンの精製においても、連続的かつ安定したサンプル注入および分画採取が成功しました。LC-Mateシステムが手動介入を大幅に減らし、運用効率を大幅に向上させることを示しています。リング注入のピーク面積の相対標準偏差は0.813%であり、LC-Mate注入の優れた安定性と再現性を示していました。

このシステムは、効率的なマクロスケールHPLCワークフローのために、自動的な精製と正確な分数収集を促進します。正しい信号バリアント、適切なモード選択、パラメータ設定はLC-Mate機器の成功に不可欠な装置です。チャネル容量の強化と新しい検出器の統合を計画しており、クロスプラットフォーム互換性の向上を目指しています。