Name: 最適化されたアポプラスティック洗浄収集法を用いたシロイナズナの葉から植物細胞外小胞の分離および精製 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-24T12:50:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: 学ぶ シロイナズナの葉から植物細胞外小胞を分離精製する標準化プロトコル。アポプラスティック洗浄収集法と密度勾配遠心により高純度のEVを取得し、植物微生物相互作用研究に応用できます。

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<ol><li>Raposo, G., Stoorvogel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles%3A+Exosomes%2C+microvesicles%2C+and+friends%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles: Exosomes, microvesicles, and friends.</a> J Cell Biol. 200 (4), 373-383 (2013).</li>
<li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+extracellular+vesicles%3A+The+origins%2C+current+status%2C+future+prospects%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Small extracellular vesicles: The origins, current status, future prospects, and applications.</a> Stem Cell Res Ther. 16 (1), 184(2025).</li>
<li>Colombo, M., Raposo, G., Théry, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biogenesis%2C+secretion%2C+and+intercellular+interactions+of+exosomes+and+other+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Biogenesis, secretion, and intercellular interactions of exosomes and other extracellular vesicles.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 30, 255-289 (2014).</li>
<li>Akers, J. C., Gonda, D., Kim, R., Carter, B. S., Chen, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biogenesis+of+extracellular+vesicles+%28EV%29%3A+Exosomes%2C+microvesicles%2C+retrovirus-like+vesicles%2C+and+apoptotic+bodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Biogenesis of extracellular vesicles (EV): Exosomes, microvesicles, retrovirus-like vesicles, and apoptotic bodies.</a> J Neurooncol. 113 (1), 1-11 (2013).</li>
<li>Ratajczak, M. Z., Ratajczak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+microvesicles%2Fexosomes%3A+Discovery%2C+disbelief%2C+acceptance%2C+and+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Extracellular microvesicles/exosomes: Discovery, disbelief, acceptance, and the future.</a> Leukemia. 34 (12), 3126-3135 (2020).</li>
<li>Hristov, M., Erl, W., Linder, S., Weber, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptotic+bodies+from+endothelial+cells+enhance+the+number+and+initiate+the+differentiation+of+human+endothelial+progenitor+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Apoptotic bodies from endothelial cells enhance the number and initiate the differentiation of human endothelial progenitor cells in vitro.</a> Blood. 104 (9), 2761-2766 (2004).</li>
<li>Marar, C., Starich, B., Wirtz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+in+immunomodulation+and+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles in immunomodulation and tumor progression.</a> Nat Immunol. 22 (5), 560-570 (2021).</li>
<li>Ruan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+as+an+advanced+delivery+biomaterial+for+precision+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles as an advanced delivery biomaterial for precision cancer immunotherapy.</a> Adv Healthc Mater. 11 (5), e2100650(2022).</li>
<li>Cai, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Message+in+a+bubble%3A+Shuttling+small+RNAs+and+proteins+between+cells+and+interacting+organisms+using+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Plant+Biol%22%5BJournal%5D)">Message in a bubble: Shuttling small RNAs and proteins between cells and interacting organisms using extracellular vesicles.</a> Annu Rev Plant Biol. 72, 497-524 (2021).</li>
<li>Cai, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plants+send+small+RNAs+in+extracellular+vesicles+to+fungal+pathogen+to+silence+virulence+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Plants send small RNAs in extracellular vesicles to fungal pathogen to silence virulence genes.</a> Science. 360 (6393), 1126-1129 (2018).</li>
<li>Rutter, B. D., Innes, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+isolated+from+the+leaf+apoplast+carry+stress-response+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles isolated from the leaf apoplast carry stress-response proteins.</a> Plant Physiol. 173 (1), 728-741 (2017).</li>
<li>Ding, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exo70e2+is+essential+for+exocyst+subunit+recruitment+and+expo+formation+in+both+plants+and+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Exo70e2 is essential for exocyst subunit recruitment and expo formation in both plants and animals.</a> Mol Biol Cell. 25 (3), 412-426 (2014).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expo%2C+an+exocyst-positive+organelle+distinct+from+multivesicular+endosomes+and+autophagosomes%2C+mediates+cytosol+to+cell+wall+exocytosis+in+Arabidopsis+and+tobacco+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Expo, an exocyst-positive organelle distinct from multivesicular endosomes and autophagosomes, mediates cytosol to cell wall exocytosis in Arabidopsis and tobacco cells.</a> Plant Cell. 22 (12), 4009-4030 (2010).</li>
<li>Jeon, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen-induced+autophagy+regulates+monolignol+transport+and+lignin+formation+in+plant+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Pathogen-induced autophagy regulates monolignol transport and lignin formation in plant immunity.</a> Autophagy. 19 (2), 597-615 (2023).</li>
<li>Prado, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanovesicles+are+secreted+during+pollen+germination+and+pollen+tube+growth%3A+A+possible+role+in+fertilization%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant%22%5BJournal%5D)">Nanovesicles are secreted during pollen germination and pollen tube growth: A possible role in fertilization.</a> Mol Plant. 7 (3), 573-577 (2014).</li>
<li>Samuel, M., Bleackley, M., Anderson, M., Mathivanan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+including+exosomes+in+cross+kingdom+regulation%3A+A+viewpoint+from+plant-fungal+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Plant+Sci%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles including exosomes in cross kingdom regulation: A viewpoint from plant-fungal interactions.</a> Front Plant Sci. 6, 766(2015).</li>
<li>Pinedo, M., De La Canal, L., De Marcos Lousa, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+call+for+rigor+and+standardization+in+plant+extracellular+vesicle+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">A call for rigor and standardization in plant extracellular vesicle research.</a> J Extracell Vesicles. 10 (6), e12048(2021).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rice+extracellular+vesicles+send+defense+proteins+into+fungus+rhizoctonia+solani+to+reduce+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Rice extracellular vesicles send defense proteins into fungus rhizoctonia solani to reduce disease.</a> Dev Cell. 60 (8), 1168-1181.e6 (2025).</li>
<li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+mrnas+move+into+a+fungal+pathogen+via+extracellular+vesicles+to+reduce+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Plant mrnas move into a fungal pathogen via extracellular vesicles to reduce infection.</a> Cell Host Microbe. 32 (1), 93-105.e6 (2024).</li>
<li>He, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Publisher+correction%3A+Rna-binding+proteins+contribute+to+small+rna+loading+in+plant+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Plants%22%5BJournal%5D)">Publisher correction: Rna-binding proteins contribute to small rna loading in plant extracellular vesicles.</a> Nat Plants. 7 (4), 539(2021).</li>
<li>Rutter, B. D., Innes, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+as+key+mediators+of+plant-microbe+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Plant+Biol%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles as key mediators of plant-microbe interactions.</a> Curr Opin Plant Biol. 44, 16-22 (2018).</li>
<li>Théry, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+information+for+studies+of+extracellular+vesicles+2018+%28misev2018%29%3A+A+position+statement+of+the+International+Society+for+Extracellular+Vesicles+and+update+of+the+MISEV2014+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (misev2018): A position statement of the International Society for Extracellular Vesicles and update of the MISEV2014 guidelines.</a> J Extracell Vesicles. 7 (1), 1535750(2018).</li>
<li>Regente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+extracellular+vesicles+are+incorporated+by+a+fungal+pathogen+and+inhibit+its+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Bot%22%5BJournal%5D)">Plant extracellular vesicles are incorporated by a fungal pathogen and inhibit its growth.</a> J Exp Bot. 68 (20), 5485-5495 (2017).</li>
<li>Mu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interspecies+communication+between+plant+and+mouse+gut+host+cells+through+edible+plant+derived+exosome-like+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Nutr+Food+Res%22%5BJournal%5D)">Interspecies communication between plant and mouse gut host cells through edible plant derived exosome-like nanoparticles.</a> Mol Nutr Food Res. 58 (7), 1561-1573 (2014).</li>
<li>Baldrich, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+extracellular+vesicles+contain+diverse+small+RNA+species+and+are+enriched+in+10-+to+17-nucleotide+%26%2334%3Btiny%26%2334%3B+RNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Plant extracellular vesicles contain diverse small RNA species and are enriched in 10- to 17-nucleotide &#34;tiny&#34; RNAs.</a> Plant Cell. 31 (2), 315-324 (2019).</li>
<li>Regente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vesicular+fractions+of+sunflower+apoplastic+fluids+are+associated+with+potential+exosome+marker+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Vesicular fractions of sunflower apoplastic fluids are associated with potential exosome marker proteins.</a> FEBS Lett. 583 (20), 3363-3366 (2009).</li>
<li>Rutter, B. D., Innes, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growing+pains%3A+Addressing+the+pitfalls+of+plant+extracellular+vesicle+research%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytol%22%5BJournal%5D)">Growing pains: Addressing the pitfalls of plant extracellular vesicle research.</a> New Phytol. 228 (5), 1505-1510 (2020).</li>
<li>Thieron, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+advice+for+extracellular+vesicle+isolation+in+plant-microbe+interactions%3A+Concerns%2C+considerations%2C+and+conclusions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Practical advice for extracellular vesicle isolation in plant-microbe interactions: Concerns, considerations, and conclusions.</a> J Extracell Vesicles. 13 (12), e70022(2024).</li>
<li>Borniego, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+plant+Rnas+coat+Arabidopsis+leaves+and+are+distinct+from+apoplastic+RNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Diverse plant Rnas coat Arabidopsis leaves and are distinct from apoplastic RNAs.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 122 (1), e2409090121(2025).</li>
<li>Chen, A., He, B., Jin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+extracellular+vesicles+from+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of extracellular vesicles from Arabidopsis.</a> Curr Protoc. 2 (1), e352(2022).</li>
<li>Koch, B. L., Rutter, B. D., Innes, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arabidopsis+produces+distinct+subpopulations+of+extracellular+vesicles+that+respond+differentially+to+biotic+stress%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Arabidopsis produces distinct subpopulations of extracellular vesicles that respond differentially to biotic stress.</a> bioRxiv. , (2024).</li>
<li>Hamby, R., Cai, Q., Jin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+communication+between+organisms+inspires+innovative+eco-friendly+strategies+for+disease+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">RNA communication between organisms inspires innovative eco-friendly strategies for disease control.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 26 (2), 81-82 (2025).</li>
<li>Hou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phytophthora+effector+suppresses+trans-kingdom+RNAi+to+promote+disease+susceptibility%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">A phytophthora effector suppresses trans-kingdom RNAi to promote disease susceptibility.</a> Cell Host Microbe. 25 (1), 153-165.e5 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.45 & micro;Mナイロンフィルター</td><td>VWR</td><td>76479-032</td><td></td></tr><tr><td>1mlの不要注射器</td><td>BDバイオサイエンス</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>100 kDa 超遠心フィルター</td><td>アミコン</td><td>UFC 910008</td><td></td></tr><tr><td>100mlの不要注射器</td><td>BDバイオサイエンス</td><td>551721050</td><td></td></tr><tr><td>15ml円錐管</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td></td></tr><tr><td>50ml円錐管</td><td>VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>Arabidopsis thaliana (Col-0)</td><td>研究所管理のライン</td><td>該当しません</td><td></td></tr><tr><td>カーボン・フォームバー300メッシュグリッド</td><td>テッド・ペラ</td><td>01753-F</td><td></td></tr><tr><td>クリアテープ</td><td>スコッチ・マジックテープ</td><td>S-9783</td><td></td></tr><tr><td>パラフィルム</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>13-374-12</td><td></td></tr><tr><td>PBSバッファ</td><td>自社製</td><td>該当しません</td><td></td></tr><tr><td>qEV オリジナルカラム Gen2 35 nm</td><td>アイゾンサイエンス</td><td>ICO-35</td><td></td></tr><tr><td>冷蔵遠心分離機</td><td>エッペンドルフ</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>冷蔵遠心機固定角度ローター</td><td>エッペンドルフ</td><td>F-34-6-38</td><td></td></tr><tr><td>冷蔵遠心分離機スイングバケットローター</td><td>エッペンドルフ</td><td>A-4-62</td><td></td></tr><tr><td>ショ糖</td><td>VWR</td><td>470302-810</td><td></td></tr><tr><td>超遠心分離機</td><td>ベックマン・カウルター</td><td>XPN-100</td><td></td></tr><tr><td>超遠心分離管</td><td>ベックマン・カウルター</td><td>337986</td><td></td></tr><tr><td>UranyLessステイン</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>250218-01</td><td></td></tr></tbody></table>

最適化されたアポプラスティック洗浄収集法を用いたシロイナズナの葉から植物細胞外小胞の分離および精製

Isolation and Purification of Plant Extracellular Vesicles from Arabidopsis Leaves Using an Optimized Apoplastic Wash Collection Method

Extracellular vesicles (EVs) are membrane-bound nanoparticles secreted by diverse organisms and cell types and are increasingly recognized as important ...

isolation-purification-plant-extracellular-vesicles-from-arabidopsis

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このビデオでは、シロイヌナズナの14日齢の実生の組織から無傷のプロトプラストを単離するための手順を示しています。分離されたプロトプラストは、少なくとも96時間のためにそのまま残るし、代わりに一ヶ月の成熟植物の苗から分離されていることを考えると、この手順は、無傷プロトプラストを必要とするアッセイを迅速に処理されます。...

の14日齢の苗の組織からのプロトプラストの単離シロイヌナズナ</em

出典: Rufián, J. S. ら、植物組織内の 緑膿菌シリンガ 遺伝子の発現の単細胞解析。 J. Vis. Exp.

注射器を用いた圧力法による細胞外細菌の抽出

師部樹液の成分だけでなく、そのロードと長距離輸送のメカニズムの知識は、植物の開発とストレス/病原体応答と輸送を同化の長距離シグナルの理解に不可欠である。本稿では、EDTA-促進法を用いて師部滲出液のコレクションを記述します。...

の収集と分析<em&gt;シロイヌナズナ</em&gt;師部はEDTA-促進法を用いた滲出

このプロトコルは、フランスの豆植物(Phaseolus...

植物の葉からのアポプラスト液の抽出のための浸透·遠心分離技術の使用インゲンマメ例として

ここでは、 シロイヌナズナの葉の葉の葉のプロトプラストに適用されるインタラクトームキャプチャプロトコールを紹介する 。この方法は生体内での UV架橋に批判的に依存し、生理学的環境からの植物mRNA結合タンパク質の単離および同定を可能にする。...

植物のプロトプラストからのmRNAインターアクチベント捕獲

ここでは、シロイヌナズナの葉と 3 つメイン サブ コンパートメント (エンベロープ、質、およびチラコイド) から葉緑体を浄化する手法について述べる差動遠心、連続 Percoll の勾配の組み合わせを使用して、蔗糖不連続密度勾配。メソッドは subplastidial...

免疫ブロットやプロテオミクスによるタンパク質局在の解析シロイヌナズナから葉緑体小班の準備

このプロトコルは、EVの降水量、密度勾配超遠心分離、粒子捕捉を組み込むことにより、高効率で歩留まりのあるビリオンから離れた細胞外小胞(EV)を分離し、合理化されたワークフローと開始の削減を可能にします。すべてのEV研究で使用するための再現可能な準備をもたらす容積の条件。...

ウイルスから離れた高収率細胞外小胞製剤の精製

様々な光合成生物に関連するプラストグロビュール脂肪滴を単離するための迅速かつ効率的なプロトコルが提示されています。単離されたプラストグロビュールの調製を成功させることは、プロテオミクス解析やリピドミック解析などの詳細な分子調査に先立つ重要な第一歩です。...

プラストグロビュール 植物葉組織およびシアノバクテリアからの脂肪滴分離

植物系からの組換えタンパク質の精製は、通常、植物性タンパク質によって課題となります。この研究は、Nicotiana...

アポプラスト抽出法による植物産生組換えタンパク質の純度向上  

シロイヌナズナ植物の葉の表面とアポプラストから細胞外RNAを単離するためのシンプルでありながら再現性の高い方法について説明します。...

シロイヌナズナロゼットを用いた葉表面とアポプラスドRNAの単離と解析の段階的ガイド

学ぶ シロイナズナの葉から植物細胞外小胞を分離精製する標準化プロトコル。アポプラスティック洗浄収集法と密度勾配遠心により高純度のEVを取得し、植物微生物相互作用研究に応用できます。

最適化されたアポプラスティック洗浄収集法を用いたシロイナズナの葉から植物細胞外小胞の分離および精製

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