Name: ショウジョウバエ胚上皮におけるコアプリーツセプテート接合タンパク質の定義を目的とした免疫染色および染料浸透実験 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: 学ぶ ショウジョウバエ胚上皮におけるコアプリーツセプテート接合タンパク質の免疫染色と染料浸透実験による定義方法。組織構造とバリア機能を評価し、新規遺伝子スクリーニングに応用可能です。

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<ol><li>Farquhar, M. G., Palade, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Junctional+complexes+in+various+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Junctional complexes in various epithelia.</a> J. Cell Biol. 17, 375-412 (1963).</li>
<li>Lord, B. A., DiBona, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+septate+junction+in+the+regulation+of+paracellular+transepithelial+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Role of the septate junction in the regulation of paracellular transepithelial flow.</a> J. Cell Biol. 71 (3), 967-972 (1976).</li>
<li>Noirot-Timothée, C., Smith, D. S., Cayer, M. L., Noirot, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junctions+in+insects%3A+comparison+between+intercellular+and+intramembranous+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Cell%22%5BJournal%5D)">Septate junctions in insects: comparison between intercellular and intramembranous structures.</a> Tissue Cell. 10 (1), 125-136 (1978).</li>
<li>Rouka, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+septate+junction+beyond+barrier+function%3A+review+of+the+literature%2C+prediction+of+human+orthologs+of+SJ-related+proteins+and+identification+of+protein+domain+families%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Drosophila septate junction beyond barrier function: review of the literature, prediction of human orthologs of SJ-related proteins and identification of protein domain families.</a> Acta Physiol. 231 (1), e13527(2021).</li>
<li>Poodry, C., Schneiderman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+of+the+developing+leg+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Roux+Arch.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure of the developing leg of Drosophila melanogaster.</a> Roux Arch. Dev. Biol. 166, 1-44 (1970).</li>
<li>Tepass, U., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+cellular+junctions+in+the+Drosophila+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The development of cellular junctions in the Drosophila embryo.</a> Dev. Biol. 161 (2), 563-596 (1994).</li>
<li>Rice, C., De, O., Alhadyian, H., Hall, S., Ward, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+the+junction%3A+new+insights+into+non-occluding+roles+for+septate+junction+proteins+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Expanding the junction: new insights into non-occluding roles for septate junction proteins during development.</a> J. Dev. Biol. 9 (1), 11(2021).</li>
<li>Baumgartner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+neurexin+is+required+for+septate+junction+and+blood-nerve+barrier+formation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A Drosophila neurexin is required for septate junction and blood-nerve barrier formation and function.</a> Cell. 87 (6), 1059-1068 (1996).</li>
<li>Fehon, R. G., Dawson, I. A., Artavanis-Tsakonas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+homologue+of+membrane-skeleton+protein+4.1+is+associated+with+septate+junctions+and+is+encoded+by+the+coracle+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A Drosophila homologue of membrane-skeleton protein 4.1 is associated with septate junctions and is encoded by the coracle gene.</a> Development. 120 (3), 545-557 (1994).</li>
<li>Hall, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macroglobulin+complement-related+%28Mcr%29+encodes+a+protein+required+for+septate+junction+organization+and+paracellular+barrier+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Macroglobulin complement-related (Mcr) encodes a protein required for septate junction organization and paracellular barrier function in Drosophila.</a> Development. 141, 889-898 (2014).</li>
<li>Nelson, K. S., Furuse, M., Beitel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+claudin+Kune-kune+is+required+for+septate+junction+organization+and+tracheal+tube+size+control%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The Drosophila claudin Kune-kune is required for septate junction organization and tracheal tube size control.</a> Genetics. 185 (3), 831-839 (2010).</li>
<li>Paul, S. M., Ternet, M., Salvaterra, P. M., Beitel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+is+required+for+septate+junction+function+and+epithelial+tube-size+control+in+the+Drosophila+tracheal+system%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The Na⁺/K⁺-ATPase is required for septate junction function and epithelial tube-size control in the Drosophila tracheal system.</a> Development. 130 (20), 4963-4974 (2003).</li>
<li>Nilton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((coiled+and+crimpled+are+three+Ly6-like+proteins+required+for+proper+localization+of+septate+junction+components%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">coiled and crimpled are three Ly6-like proteins required for proper localization of septate junction components.</a> Development. 137 (14), 2427-2437 (2010).</li>
<li>Tiklova, K., Senti, K. A., Wang, S., Gräslund, A., Samakovlis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+septate+junction+assembly+relies+on+melanotransferrin+iron+binding+and+endocytosis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial septate junction assembly relies on melanotransferrin iron binding and endocytosis in Drosophila.</a> Nat. Cell Biol. 12 (11), 1071-1077 (2010).</li>
<li>Bilder, D., Schober, M., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+activity+of+PDZ+protein+complexes+regulates+epithelial+polarity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Integrated activity of PDZ protein complexes regulates epithelial polarity.</a> Nat. Cell Biol. 5 (1), 53-58 (2003).</li>
<li>Woods, D. F., Bryant, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discs-large+tumor+suppressor+gene+of+Drosophila+encodes+a+guanylate+kinase+homolog+localized+at+septate+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The discs-large tumor suppressor gene of Drosophila encodes a guanylate kinase homolog localized at septate junctions.</a> Cell. 66 (3), 451-464 (1991).</li>
<li>Hall, S., Ward, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junction+proteins+play+essential+roles+in+morphogenesis+throughout+embryonic+development+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22G3+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Septate junction proteins play essential roles in morphogenesis throughout embryonic development in Drosophila.</a> G3 (Bethesda). 6 (8), 2375-2384 (2016).</li>
<li>Genova, J. L., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroglian%2C+Gliotactin%2C+and+the+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+are+essential+for+septate+junction+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Neuroglian, Gliotactin, and the Na⁺/K⁺-ATPase are essential for septate junction function in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 161 (5), 979-989 (2003).</li>
<li>Ward, R. E., Lamb, R. S., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+conserved+functional+domain+of+Drosophila+coracle+is+required+for+localization+at+the+septate+junction+and+has+membrane-organizing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A conserved functional domain of Drosophila coracle is required for localization at the septate junction and has membrane-organizing activity.</a> J. Cell Biol. 140 (6), 1463-1473 (1998).</li>
<li>De, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junction+proteins+are+required+for+cell+shape+changes%2C+actomyosin+reorganization+and+cell+adhesion+during+dorsal+closure+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Septate junction proteins are required for cell shape changes, actomyosin reorganization and cell adhesion during dorsal closure in Drosophila.</a> Front. Cell Dev. Biol. 10, 947444(2022).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+FERM+protein+Yurt+is+a+negative+regulatory+component+of+the+Crumbs+complex+that+controls+epithelial+polarity+and+apical+membrane+size%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The FERM protein Yurt is a negative regulatory component of the Crumbs complex that controls epithelial polarity and apical membrane size.</a> Dev. Cell. 11 (3), 363-374 (2006).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurexin+IV+and+the+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+form+a+novel+group+of+epithelial+polarity+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neurexin IV and the Na⁺/K⁺-ATPase form a novel group of epithelial polarity proteins.</a> Nature. 459 (7250), 1141-1145 (2009).</li>
<li>Oshima, K., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+protein+dynamics+within+the+septate+junction+reveals+a+highly+stable+core+protein+complex+that+does+not+include+the+basolateral+polarity+protein+Discs+large%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Analysis of protein dynamics within the septate junction reveals a highly stable core protein complex that does not include the basolateral polarity protein Discs large.</a> J. Cell Sci. 124 (Pt 16), 2861-2871 (2011).</li>
<li>Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHartenstein%2C+V+%22Atlas+of+Drosophila+Development%22">Atlas of Drosophila Development</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (1993).</li>
<li>Lamb, R. S., Ward, R. E., Schweizer, L., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+coracle%2C+a+member+of+the+protein+4.1+superfamily%2C+has+essential+structural+functions+in+septate+junctions+and+developmental+roles+in+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Drosophila coracle, a member of the protein 4.1 superfamily, has essential structural functions in septate junctions and developmental roles in epithelial cells.</a> Mol. Biol. Cell. 9 (12), 3505-3519 (1998).</li>
<li>Davis, M. J., Talbot, D., Jemc, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assay+for+blood-brain+barrier+integrity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Assay for blood-brain barrier integrity in Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (151), e60233(2019).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+polarity+proteins+regulate+Drosophila+tracheal+tube+size+in+parallel+to+the+luminal+matrix+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial polarity proteins regulate Drosophila tracheal tube size in parallel to the luminal matrix pathway.</a> Curr. Biol. 20 (1), 55-61 (2010).</li>
<li>Batz, T., Förster, D., Luschnig, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transmembrane+protein+macroglobulin+complement-related+is+essential+for+septate+junction+formation+and+epithelial+barrier+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The transmembrane protein macroglobulin complement-related is essential for septate junction formation and epithelial barrier function in Drosophila.</a> Development. 141 (4), 899-908 (2014).</li>
<li>Behr, M., Riedel, D., Schuh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+claudin-like+Megatrachea+is+essential+in+septate+junctions+for+epithelial+barrier+function+in%C3%82%C2%A0Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The claudin-like Megatrachea is essential in septate junctions for epithelial barrier function inÂ Drosophila.</a> Dev. Cell. 5 (4), 611-620 (2003).</li>
<li>Wu, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sinuous+is+a+Drosophila+claudin+required+for+septate+junction+organization+and+epithelial+tube+size+control%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Sinuous is a Drosophila claudin required for septate junction organization and epithelial tube size control.</a> J. Cell Biol. 164 (2), 313-323 (2004).</li>
<li>Wu, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+Varicose%2C+a+member+of+a+new+subgroup+of+basolateral+MAGUKs%2C+is+required+for+septate+junctions+and+tracheal+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Drosophila Varicose, a member of a new subgroup of basolateral MAGUKs, is required for septate junctions and tracheal morphogenesis.</a> Development. 134 (5), 999-1009 (2007).</li>
<li>Jaspers, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+claudin+Megatrachea+protein+complex%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">The claudin Megatrachea protein complex.</a> J. Biol. Chem. 287 (44), 36756-36765 (2012).</li>
<li>Dietzl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li>
<li>Zirin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+transgenic+Drosophila+resource+collections+for+loss-+and+gain-of-function+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Large-scale transgenic Drosophila resource collections for loss- and gain-of-function studies.</a> Genetics. 214 (4), 755-767 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>針用の毛細管(Boro 1 X 0.5/線維)</td><td>FHC</td><td>30-30-1</td><td></td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>Stellaris5&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>注射用ガラスのカバーガラス 22 x 22 厚さ</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>12-540-B</td><td></td></tr><tr><td>イメージング用カバーガラス 22 x 30 厚さ1.5</td><td>コーニング</td><td>2980-233</td><td></td></tr><tr><td>免疫染色用の培養チューブ(6×50mm)&nbsp;</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>14-958-A</td><td></td></tr><tr><td>胚採取ケージ</td><td>ジェネシー・サイエンティフィック</td><td>59-100</td><td></td></tr><tr><td>蛍光立体顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>MZ10 F</td><td></td></tr><tr><td>ハロカーボン油(700)</td><td>ジェネシー・サイエンティフィック</td><td>59-131</td><td></td></tr><tr><td>ヘプタン</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>H350-4</td><td></td></tr><tr><td>逆転蛍光顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>DMi8</td><td></td></tr><tr><td>脱毛膜胚用のメッシュバスケット</td><td>ジェネシー・サイエンティフィック</td><td>46-101</td><td></td></tr><tr><td>メタノール</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>A412-4</td><td></td></tr><tr><td>マイクロマニピュレーター</td><td>成重</td><td>MN151</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡スライド</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>12-544-2</td><td></td></tr><tr><td>ニードルプラー</td><td>デイヴィッド・コップ楽器</td><td>モデル720</td><td></td></tr><tr><td>ノーマル・ドンキー血清</td><td>ジャクソン免疫研究</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>ナイロンメッシュ(120 um)</td><td>ジェネシー・サイエンティフィック</td><td>57-102</td><td></td></tr><tr><td>対物レンズ HC PL FLUOTR 10X/0.32 PH 1</td><td>ライカ</td><td>11506537</td><td></td></tr><tr><td>対物レンズ HC PL APO 10倍/0.40 CS2</td><td>ライカ</td><td>15506407</td><td></td></tr><tr><td>対物レンズ HC PL APO 40倍/1.30 CS2</td><td>ライカ</td><td>15506358</td><td></td></tr><tr><td>ペトリプレート 60 x 15 mm</td><td>コーニング</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>プラットフォームロッカー</td><td>グローブ・サイエンティフィック</td><td>GTR-FS</td><td></td></tr><tr><td>一次抗体(コラクル抗体)</td><td>DSHB</td><td>C566.9</td><td></td></tr><tr><td>一次抗体(コラクル抗体)</td><td>DSHB</td><td>C615.16</td><td></td></tr><tr><td>一次抗体(Eカデリン)</td><td>DSHB</td><td>DCAD2</td><td></td></tr><tr><td>一次抗体(Mcr)</td><td>ウォード実験室、CWRU</td><td>モルモット多クローン</td><td></td></tr><tr><td>ロダミンは10 kDaのデキストランとラベル付けされています</td><td>分子プローブ</td><td>D1824</td><td></td></tr><tr><td>二次抗体(ロバの抗モルモットCy3)</td><td>ジャクソン免疫研究</td><td>706-165-148</td><td></td></tr><tr><td>二次抗体(ロバ抗マウスCy2)</td><td>ジャクソン免疫研究</td><td>715-225-151</td><td></td></tr><tr><td>二次抗体(ロバ抗ラットCy5)</td><td>ジャクソン免疫研究</td><td>712-175-150</td><td></td></tr><tr><td>卓上シェーカー</td><td>ニューブランズウィック・サイエンティフィック</td><td>C2プラットフォームシェーカー</td><td></td></tr><tr><td>テゴセプト(メチル4-ヒドロキシベンゾエート)</td><td>TCI</td><td>H0216</td><td></td></tr><tr><td>トライトン X-100</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>BP151500</td><td></td></tr><tr><td>固定用のバイアル(20mlのウィートン液体シンチレーションバイアル)</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>03-341-73C</td><td></td></tr><tr><td>ワットマン 3MM&nbsp;クロマトグラフィー用紙</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>05-716-6H</td><td></td></tr><tr><td><ストロング>フライストック</ストロング></td><td><ストロング>フルジェノタイプ</ストロング></td><td><ストロング>ストックナンバー<ストロング></td><td>Source</td></tr><tr><td>cor4</td><td>w*;P{neoFRT}43D cora4/CyO</td><td>52232</td><td>BDSC</td></tr><tr><td>W1118</td><td>w[1118]</td><td>5905</td><td>BDSC</td></tr><tr><td>Solution</td><td><ストロング>レシピ<ストロング></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10倍PBS</td><td>NaCl 90g、Na2HPO4 20g、NaH2PO4 8.3gを混ぜて1Lにかけます。フィルターで滅菌します。免疫染色の洗浄工程のためにdH2Oで1倍に希釈してください。</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10%トライトンX-100溶液</td><td>トライトンX-1001mlとdH2Oを9mlのプラットフォームロッカーで溶かすまで混ぜます。常温で保存してください。</td><td></td><td></td></tr><tr><td>漂白剤50%</td><td>脱毛胚の前に市販漂白剤10ml(次亜塩素酸塩酸ナトリウム7.5%)と10mlの水を混ぜます。</td><td></td><td></td></tr><tr><td>アップルジュースプレート</td><td>15gのショウジョウバエ寒天を725mlのdH2Oに煮沸します。砂糖25gとリンゴジュース250mlを加え、混ざるまで混まらせます。溶液を55°Cまで冷まし、その後1.3gのテゴセプトを加えて優しく混ぜます。60×15インチのペトリプレートに注ぎ、冷まします。4°Cで保存してください。</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ブロッキング解法</td><td>15円錐形のチューブに100μulの10%トライトンX-100と100μulのNormal Donkey Serumを混ぜます。</td><td></td><td></td></tr><tr><td>胚洗浄液</td><td>70gのNaClと2mlのトリトンX-100を1LのdH2Oに混ぜて、10X胚洗浄液を作ります。dH2Oで1倍に薄めて効果を発揮します。</td><td></td><td></td></tr><tr><td>修正</td><td>10mlの1XPBSを電子レンジで予熱します。0.4 g&nbsp を加えます。パラホルマルデヒドとピペットを混ぜる。溶けを加速させるために14N NaOHを10ul加えます。90°Cのヒートブロックの上に置き、溶かすまで置きます。固体のパラホルムアルデヒドが残らなくなったら、14N HCLを10 μl加えてpHを中性に調整します。パラホルマルデヒドを使用する際は、必ず白衣、手袋、ゴーグルを着用してください。</td><td></td><td></td></tr><tr><td>マウンティングメディア</td><td>グリセロール9mlと1Mのトリス塩基pH8.0を1ml混ぜます。n-プロピル-ガレートを0.05g加え、nbsp;混ぜて加熱して溶かします。エッペンドルフ管に0.5mlを挿入します。</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ロダミンデキストラ溶液</td><td>新鮮な染料溶液として、ローダミン標識の10 kDaデクトロンを0.5Mリン酸ナトリウム、pH 7.5および5 mM塩化カリウムに溶かして1 mg/mlに溶かします。</td><td></td><td></td></tr><tr><td>酵母ペースト</td><td>市販の酵母(レッドスター)50gにショ糖をひとつまみ、濃厚なペースト状にする水を混ぜます。4°Cで保存してください。</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ショウジョウバエ胚上皮におけるコアプリーツセプテート接合タンパク質の定義を目的とした免疫染色および染料浸透実験

Immunostaining and Dye Penetration Experiments to Define Core Pleated Septate Junction Proteins in Drosophila Embryonic Epithelia

The purpose of these protocols is to evaluate the organization and barrier function of pleated Septate Junctions (pSJs) in the ectodermally-derived ...

immunostaining-dye-penetration-experiments-to-define-core-pleated

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

発生生物学

このプロトコルは、解剖さショウジョウバエの幼虫の免疫組織化学を実行する方法を示しています。...

ショウジョウバエ幼虫NMJ免疫組織化学

で、アクティブなゾーンの解剖とイメージングショウジョウバエ神経筋接合部

免疫染色は、組織内の特定の細胞タイプやタンパク質を可視化するための効果的な技術です。超音波処理を利用することにより、ここに記載されているプロトコルは、免疫染色の前に後期胚および幼虫からショウジョウバエ・メラノガスター組織を解剖する必要性を軽減する。私たちは、ホルムアルデヒド固定全マウント幼虫の免疫染色のための効率的な方法を提供します。...

後期胚および幼虫の超音波処理により促進免疫蛍光染色<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;組織<em&gt;その場で</em

ショウジョウバエの成体構造は、虚数円盤と呼ばれる袋のような構造に由来します。これらのディスクの解析により、組織決定、コンパートメント境界の確立、細胞増殖、細胞運命の仕様、平面細胞の極性など、多くの発生過程に関する洞察が得られます。このプロトコールは、光/蛍光顕微鏡用の架空ディスクを調製するために使用されます。...

解剖や成虫の免疫染色からキイロショウジョウバエ

このプロトコルは、近接ライゲーションアッセイは、ショウジョウバエの幼虫神経筋接合部で、その場のタンパク質-タンパク質相互作用に検出するために使用することができる方法を示しています。この技術では、大規模で胡-LIの太極拳シャオディスクは、シナプス後の領域に、以前に共免疫沈降を介して同定関連を複合体を形成することが示されている。...

の検出その場でタンパク質 - タンパク質複合体ショウジョウバエ幼虫神経筋接合部

アブラムシの胚に対する全量免疫染色のプロトコルが提示され、バックグラウンド染色の減少と組織透過性の増加のための重要な条件が対処されます。これらの条件は、アブラムシの胚組織におけるタンパク質発現を効果的に検出するために特別に開発されました。...

エンドウアブラムシ胚における免疫染色のための重要な条件の同定：組織透過性を増大し、バックグラウンド染色を減少

我々は、同焦点顕微鏡に適し、また再現可能で信頼性の高い標識を可能にする 、ショウジョウバエ...

大精子細胞の3D共焦点解析のための全山 ショウジョウバエ 精巣の免疫染色

ここでは、 ショウジョウバエ 胚タンパク質およびRNAの収集から事前包埋および包埋、免疫染色、およびmRNAin situ...

初期ショウジョウバエ胚における免疫組織化学およびRNAのその場分布のためのプロトコル

本プロトコールは、 ショウジョウバエ の蛹の結節の固定組織の調製および視覚化を詳述する。それは無傷または創傷組織のいずれかに使用することができ、組織の元のアーキテクチャが保存される。解剖、固定、および染色の手順はすべてこの記事で説明されています。...

ショウジョウバエの蛹の解剖学的、固定、視覚化

ここでは、神経筋接合部と筋細胞の微小管ネットワークを可視化するための詳細なプロトコルを紹介します。ショウ...

ショウジョウバエ幼虫の神経筋接合部と筋細胞を用いた微小管ネットワークの可視化

このプロトコルでは、従来のGFP/mCherryタグアプローチでは検出が困難な少量のタンパク質や翻訳後修飾のライブイメージングを可能にするために、カスタマイズされた抗体ベースの蛍光標識とショウ ジョウバエ...

蛍光抗体注入によるショウジョウバエの生きた胚における低存在量タンパク質と翻訳後修飾の可視化

学ぶ ショウジョウバエ胚上皮におけるコアプリーツセプテート接合タンパク質の免疫染色と染料浸透実験による定義方法。組織構造とバリア機能を評価し、新規遺伝子スクリーニングに応用可能です。

ショウジョウバエ胚上皮におけるコアプリーツセプテート接合タンパク質の定義を目的とした免疫染色および染料浸透実験

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