Name: サンデル・コルトフ反応を用いたヒト肝微体内のデヨジンダーゼ1活性の比色評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T13:05:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: 学ぶ サンデル・コルトフ反応を用いたヒト肝微体内のデヨジナーゼ1活性の比色評価法。放射性同位体を使用せず、甲状腺ホルモン恒常性を乱す化学物質をスクリーニングするための、堅牢で再現性の高い非放射性アッセイです。

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<ol><li>Kabir, E. R., Rahman, M. S., Rahman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+endocrine+disruptors+and+their+possible+impacts+on+human+health%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">A review on endocrine disruptors and their possible impacts on human health.</a> Environ Toxicol Pharmacol. 40 (1), 241-258 (2015).</li>
<li>Yue, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+exposure+to+a+mixture+of+endocrine+disruptors+and+serum+levels+of+thyroid+hormones%3A+a+cross-sectional+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Environ+Sci%22%5BJournal%5D)">Human exposure to a mixture of endocrine disruptors and serum levels of thyroid hormones: a cross-sectional study.</a> J Environ Sci. 125, 641-649 (2023).</li>
<li>Köhrle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+deiodinase+family%3A+selenoenzymes+regulating+thyroid+hormone+availability+and+action%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">The deiodinase family: selenoenzymes regulating thyroid hormone availability and action.</a> Cell Mol Life Sci. 57 (13), 1853-1863 (2000).</li>
<li>Zhang, J., Lazar, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+action+of+thyroid+hormones%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">The mechanism of action of thyroid hormones.</a> Annu Rev Physiol. 62 (1), 439-466 (2000).</li>
<li>França, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+type+1+iodothyronine+deiodinase+%28DIO1%29+mutations+cause+abnormal+thyroid+hormone+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Human type 1 iodothyronine deiodinase (DIO1) mutations cause abnormal thyroid hormone metabolism.</a> Thyroid. 31 (2), 202-207 (2020).</li>
<li>Weber, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+predictivity+of+the+DIO1-SK+assay+to+investigate+DIO1+inhibition+in+human+liver+microsomes%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the predictivity of the DIO1-SK assay to investigate DIO1 inhibition in human liver microsomes.</a> Appl Vitro Toxicol. 9 (2), 44-59 (2023).</li>
<li>Weber, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+method+to+study+thyroid+hormone+disruption%3A+optimization+and+standardization+of+an+assay+to+assess+the+inhibition+of+DIO1+enzyme+in+human+liver+microsomes%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A new approach method to study thyroid hormone disruption: optimization and standardization of an assay to assess the inhibition of DIO1 enzyme in human liver microsomes.</a> Appl Vitro Toxicol. 8 (3), 67-82 (2022).</li>
<li>Renko, K., Hoefig, C. S., Hiller, F., Schomburg, L., Köhrle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+iopanoic+acid+as+substrate+of+type+1+deiodinase+by+a+novel+nonradioactive+iodide-release+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Identification of iopanoic acid as substrate of type 1 deiodinase by a novel nonradioactive iodide-release assay.</a> Endocrinology. 153 (5), 2506-2513 (2012).</li>
<li>Renko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+nonradioactive+screening+method+identifies+genistein+and+xanthohumol+as+potent+inhibitors+of+iodothyronine+deiodinases%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">An improved nonradioactive screening method identifies genistein and xanthohumol as potent inhibitors of iodothyronine deiodinases.</a> Thyroid. 25 (8), 962-968 (2015).</li>
<li>Olker, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+the+ToxCast+phase+1%2C+phase+2%2C+and+e1k+chemical+libraries+for+inhibitors+of+iodothyronine+deiodinases%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Screening the ToxCast phase 1, phase 2, and e1k chemical libraries for inhibitors of iodothyronine deiodinases.</a> Toxicol Sci. 168 (2), 430-442 (2019).</li>
<li>Sane, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+highly+potent+and+isoenzyme-selective+inhibitors+of+deiodinase+type+I+via+a+nonradioactive+high-throughput+screening+method%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of highly potent and isoenzyme-selective inhibitors of deiodinase type I via a nonradioactive high-throughput screening method.</a> Thyroid. 35 (5), 576-589 (2025).</li>
<li>Visser, T. J., Van Overmeeren, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Binding+of+radioiodinated+propylthiouracil+to+rat+liver+microsomal+fractions%3A+stimulation+by+substrates+for+iodothyronine+5%E2%80%B2-deiodinase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Binding of radioiodinated propylthiouracil to rat liver microsomal fractions: stimulation by substrates for iodothyronine 5′-deiodinase.</a> Biochem J. 183 (1), 167-169 (1979).</li>
<li>Hindrichs, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+fast+online+SPE-LC-MS%2FMS+method+to+quantify+thyroid+hormone+metabolites+in+rat+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Res+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A novel and fast online SPE-LC-MS/MS method to quantify thyroid hormone metabolites in rat plasma.</a> Chem Res Toxicol. 37 (1), 33-41 (2024).</li>
<li>Kolthoff, I. M., Sandell, E. B., Lingane, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+persulfate-arsenite+method+for+manganese%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">A modified persulfate-arsenite method for manganese.</a> Anal Chem. 8 (1), 73-73 (1936).</li>
<li>Stefanidis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+robustness+and+accuracy+of+the+deiodinase+1+Sandell%E2%80%93Kolthoff+assay%3A+a+comparative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the robustness and accuracy of the deiodinase 1 Sandell–Kolthoff assay: a comparative analysis.</a> Appl Vitro Toxicol. 10 (4), 80-90 (2024).</li>
<li>Satya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidance+document+on+standardised+test+guidelines+for+evaluating+chemicals+for+endocrine+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22OECD+Environ+Health+Saf+Publ%22%5BJournal%5D)">Guidance document on standardised test guidelines for evaluating chemicals for endocrine disruption.</a> OECD Environ Health Saf Publ. 150, (2012).</li>
<li>Joseph, O., Eberle, M., Lieberman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolites+in+urine+that+interfere+with+the+Sandell%E2%80%93Kolthoff+assay+for+urinary+iodine%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Trace+Elem+Res%22%5BJournal%5D)">Metabolites in urine that interfere with the Sandell–Kolthoff assay for urinary iodine.</a> Biol Trace Elem Res. 202 (2), 466-472 (2024).</li>
<li>May, W., Wu, D., Eastman, C., Bourdoux, P., Maberly, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+automated+urinary+iodine+methods%3A+problems+of+interfering+substances+identified%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">Evaluation of automated urinary iodine methods: problems of interfering substances identified.</a> Clin Chem. 36 (6), 865-869 (1990).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1-チオ&ベータ;-D-グルコースナトリウム塩</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>T6375-1G</td><td>CAS 10593-29-0</td></tr><tr><td>3,3',5'-トリイオドチロニン(rT3)&nbsp;</td><td>サンタクルーズ・バイオテクノロジー</td><td>SC-209692</td><td>CAS 5817-39-0</td></tr><tr><td>6-プロピル-2-チオウラシル(6PTU)</td><td>スペルコ</td><td>P3755-10G</td><td>CAS 51-52-5</td></tr><tr><td>酢酸</td><td>サーモ・フィッシャー</td><td>9526-33</td><td>CAS 64-19-7</td></tr><tr><td>分析的均衡</td><td>NA</td><td>NA</td><td>0.1mgの可読性で最大30gまで正確に重く機能します</td></tr><tr><td>ヒ素酸化ナトリウム(NaAsO2)</td><td>サーモ・フィッシャー</td><td>041533.AP</td><td>CAS 7784-46-5</td></tr><tr><td>アッセイプレート(96ウェルフォーマット)</td><td>メルク</td><td>Z707902-108EA</td><td>例:組織培養プレート、96ウェルプレート、フラットボトム、ポリスチレン、0.34 cm2、無菌、108/cs、TPP</td></tr><tr><td>オーロチオグルコース(ATG)</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>A0606-5MG</td><td>CAS 12192-57-3</td></tr><tr><td>遠心分離機チューブ15および50&nbsp;mL</td><td>メルク</td><td>Z707724-800EA、Z707716-320EA</td><td>例:TPP遠心分離機チューブ、容量15および50 mL、ポリプロピレン、およびnbsp;</td></tr><tr><td>マイクロタイタープレート用のスイングアウトローターを持つ遠心分離機</td><td>NA</td><td>NA</td><td>高さは96深ウェルプレートと、その上に96インチのフィルタープレート(少なくとも約6cmの高さ)を取り付けるのに十分な高さであるべきです。</td></tr><tr><td>セリウム(IV)硫酸アンモニウム(Ce(NH4)4(SO4)4)</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>22269-100G-F</td><td>CAS 10378-47-9</td></tr><tr><td>CO2インキュベーター</td><td>NA</td><td>NA</td><td>37度の温度を維持可能;C、5%のCO2およびその他;湿度90%</td></tr><tr><td>ディープウェルプレート(96ウェル形式)</td><td>スペルコ</td><td>575653-U</td><td>例:SPE 96-深み四角井戸集積板、井戸容量2 mL、ポリプロピレン</td></tr><tr><td>ジメチルスルホキシド(DMSO)</td><td>AppliChem</td><td>A3672,0250</td><td>CAS 67-68-5</td></tr><tr><td>ジチオスレイトール(DTT)</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>D9779-1G</td><td>CAS 3483-12-3</td></tr><tr><td>エチレンジアミネテトラアセティック酸(EDTA)およびnbsp;</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>APO456787707-500G</td><td>CAS 6381-92-6</td></tr><tr><td>フィルタープレート(96ウェルフォーマット)</td><td>メルク</td><td>WHA77002810</td><td>例:マイクロプレート、96ウェル、透明ポリスチレン、800およびマイクロ;L、DNA結合、ワットマン</td></tr><tr><td>ガス密閉プレートシーラー</td><td>サーモ・フィッシャー</td><td>232698</td><td>例:シーリングテープ、ポリエステル、滅菌テープ、ポリエステル、滅菌、Nunc</td></tr><tr><td>ヘペス</td><td>パン・バイオテック</td><td>P05-01100</td><td>CAS 7365-45-9</td></tr><tr><td>ヒト肝臓マイクロソーム</td><td>バイオビット</td><td>X008070</td><td>例:INVITROCYP 150-ドナープールされたヒト肝臓マイクロソーム</td></tr><tr><td>ヨウ化物(IC規格)</td><td>スペルコ</td><td>41271-100ML</td><td>例:IC用のヨウ化物標準、水に1000 mg/L、シグマ・オルドリッチ</td></tr><tr><td>Dowex 50WX2のようなイオン交換樹脂</td><td>ロス</td><td>334.4</td><td>CAS 12612-37-2;メッシュ100-200</td></tr><tr><td>マイクロ遠心分離機チューブ1.5&nbsp;mL</td><td>メルク</td><td>EP0030120086-1PAK</td><td>例:エッペンドルフ&レグ;セーフロックマイクロ遠心分離機チューブ、容量1.5mL、天然製</td></tr><tr><td>マルチチャンネルディスペンサーは50から300まで供給可能です。&micro;1歩あたりLです</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>10から100まで供給可能なマルチチャネルピペット;&micro;1歩あたりLです</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>pHメーターと電極および校正バッファー</td><td>NA</td><td>NA</td><td>+/- 0.1 pH単位を読み取ることができます</td></tr><tr><td>吸収測定用のフォトメーター</td><td>テカン・トレーディングAG</td><td>NA</td><td>例:サンライズ吸収リーダー、INSTSUN-3</td></tr><tr><td>1から10までを供給できるピペット;&micro;L</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>10から100までを供給可能なピペット;&micro;L</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>100から1000まで供給可能なピペット;&micro;L&nbsp;</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>大容量用のピペット</td><td>NA</td><td>NA</td><td>血清学的ピペット(例:10、25、50 mL)</td></tr><tr><td>プレートシェーカー</td><td>サーモ・フィッシャー</td><td>NA</td><td>例:サーモサイエンティフィックH+Pモノシェイク渦分板マイクロタイタープレート、直接制御</td></tr><tr><td>リピーターピペット</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>塩化ナトリウム(NaCl)</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>S9888-25G</td><td>CAS: 7647-14-5、例:塩化ナトリウム、ACS試薬など;99.0 %</td></tr><tr><td>統計ソフトウェア</td><td>NA</td><td>NA</td><td>アッセイ特性を反映した回帰解析を行い、阻害濃度の計算も可能(例:GraphPad Prims 8、GraphPad</td></tr><tr><td>硫酸(H2SO4)およびnbsp;</td><td>スペルコ</td><td>1007311000</td><td>CAS 7664-93-9</td></tr><tr><td>ボリューメトリックフラスコ</td><td>NA</td><td>NA</td><td>定体積認証</td></tr></tbody></table>

サンデル・コルトフ反応を用いたヒト肝微体内のデヨジンダーゼ1活性の比色評価

Colorimetric Assessment of Deiodinase 1 Activity in Human Liver Microsomes Using the Sandell-Kolthoff Reaction

This method enables the identification of test substances that inhibit DIO1 activity and may thus interfere with thyroid hormone homeostasis. The protocol ...

colorimetric-assessment-deiodinase-1-activity-human-liver-microsomes

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ジヒドロエチジウム(DHE)蛍光色素を用いた活性酸素種(ROS)生成のハイスループットスクリーニング評価

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サンデル・コルトフ反応を用いたヒト肝微体内のデヨジンダーゼ1活性の比色評価

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