Name: In vitro 筋形成研究のための骨格筋サテライト細胞の単離 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-24T14:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: 学ぼう、マウス骨格筋から骨格筋サテライト細胞を単離・培養する標準化プロトコル。酵素処理、機械的解離、MACSによる精製、選択的培養で高純度（97%以上PAX7陽性）の筋原性前駆細胞を得、筋形成研究や再生医療に応用できます。

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<ol><li>Yeh, C. -J., Sattler, K. M., Lepper, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+satellite+cells+via+intercellular+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of satellite cells via intercellular signaling.</a> Gene. 858, 147172(2023).</li>
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<li>Yoshioka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+preplating+method+for+high-yield+and+high-purity+muscle+stem+cell+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">A modified preplating method for high-yield and high-purity muscle stem cell isolation.</a> Front Cell Dev Biol. 8, 793(2020).</li>
<li>Uezumi, A., Fukada, S., Yamamoto, N., Takeda, S., Tsuchida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+progenitors+distinct+from+satellite+cells+contribute+to+ectopic+fat+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal progenitors distinct from satellite cells contribute to ectopic fat formation.</a> Nat Cell Biol. 12 (2), 143-152 (2010).</li>
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<li>Pawlikowski, B., Vogler, T. O., Gadek, K., Olwin, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+skeletal+muscle+stem+cells+by+fibroblast+growth+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Regulation of skeletal muscle stem cells by fibroblast growth factors.</a> Dev Dyn. 246 (5), 359-367 (2017).</li>
<li>Shahini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+and+high-yield+isolation+of+myoblasts+from+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Efficient and high-yield isolation of myoblasts from skeletal muscle.</a> Stem Cell Res. 30, 122-129 (2018).</li>
<li>Lee, D. H., Kwak, K. B., Park, Y. C., Chung, C. H., Ha, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+and+characterization+of+myoblast+fusion+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cells%22%5BJournal%5D)">Purification and characterization of myoblast fusion inhibitor.</a> Mol Cells. 1, 177-182 (1991).</li>
<li>Moulin, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+and+adult+human+skin+fibroblasts+display+intrinsic+differences+in+contractile+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Fetal and adult human skin fibroblasts display intrinsic differences in contractile capacity.</a> J Cell Physiol. 188 (2), 211-222 (2001).</li>
<li>Wilson, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+expression+of+collagen+receptors+in+rat+cardiac+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Microanal%22%5BJournal%5D)">Age-dependent expression of collagen receptors in rat cardiac fibroblasts.</a> Microsc Microanal. 17 (4), 555-562 (2011).</li>
<li>Kohen, N. T., Little, L. E., Healy, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Matrigel+interfaces+during+defined+hESC+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Biointerphases%22%5BJournal%5D)">Characterization of Matrigel interfaces during defined hESC culture.</a> Biointerphases. 4 (4), 69-79 (2009).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+culture+system+supporting+robust+expansion+of+myogenic+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22BioRes+Open+Access%22%5BJournal%5D)">In vitro culture system supporting robust expansion of myogenic progenitors.</a> BioRes Open Access. 3 (3), 79-87 (2014).</li>
<li>Péault, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+and+progenitor+cells+in+skeletal+muscle+development+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Stem and progenitor cells in skeletal muscle development and therapy.</a> Mol Ther. 15 (5), 867-877 (2007).</li>
<li>Le Grand, F., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+satellite+cells+and+adult+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle satellite cells and adult myogenesis.</a> Curr Opin Cell Biol. 19 (6), 628-633 (2007).</li>
<li>Rando, T. A., Blau, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+mouse+myoblast+purification+and+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Primary mouse myoblast purification and transplantation.</a> J Cell Biol. 125 (6), 1275-1287 (1994).</li>
<li>Hindi, L., McMillan, J., Afroze, D., Hindi, S., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culturing%2C+and+differentiation+of+primary+myoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation, culturing, and differentiation of primary myoblasts.</a> Bio Protoc. 7 (9), (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.25%トリプシン-EDTA&nbsp;</td><td>ギブコ</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>100 & マイクロ;M細胞ストレーナー&nbsp;</td><td>VWR</td><td>732-2759</td><td></td></tr><tr><td>30 & micro;M ストレーナー&nbsp;</td><td>ミルテニ・バイオテック</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>40 & micro;M細胞ストレーナー&nbsp;</td><td>VWR</td><td>732-2757</td><td></td></tr><tr><td>70 & マイクロ;M細胞ストレーナー&nbsp;</td><td>VWR</td><td>130-095-823</td><td></td></tr><tr><td>酢酸&nbsp;</td><td>ポッチ</td><td>568760114</td><td>dH2Oに溶解し、最終濃度20 mMで0.2 & microで滅菌;Mフィルター</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488、ロバの反ウサギ</td><td>インビトロジェン&nbsp;</td><td>A21206</td><td>ブロッキング溶液(セクション8.7参照)で1:250の希釈で溶解</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488、ヤギの対ネズミ&nbsp;</td><td>アブカム</td><td>AB150113</td><td>ブロッキング溶液(セクション8.7参照)で1:250の希釈で溶解</td></tr><tr><td>塩化アンモニウム(NH4Cl)およびnbsp;</td><td>バイオショップ</td><td>AMC303.500</td><td>最終濃度50 mMで水に溶けます</td></tr><tr><td>アンチフェードマウンティングメディア</td><td>ベクタシールド</td><td>H-2000-10</td><td></td></tr><tr><td>抗PAX7抗体</td><td>アブカム</td><td>AB187339</td><td>ブロッキング溶液(セクション8.7参照)で1:100の希釈で溶解</td></tr><tr><td>基本的な線維芽細胞成長因子&nbsp;</td><td>コーニング</td><td>354060</td><td>滅菌dH2Oに溶解し、10 & Microの濃度にします。g/mL&nbsp;</td></tr><tr><td>ベタジン、100 mg/mL</td><td>EGISファーマシューティカルズ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>細胞培養プレート、6ウェル、Cell+</td><td>サーステット</td><td>83.3902.300</td><td></td></tr><tr><td>鶏の胚抽出物&nbsp;</td><td>MPバイオメディカル</td><td>2850145</td><td></td></tr><tr><td>コラーゲンI、ラットテール</td><td>ギブコ</td><td>A10483-01</td><td>20 mM酢酸に溶解し、nbsp;</td></tr><tr><td>コラーゲナーゼ、タイプI</td><td>シグマ</td><td>C0130-500MG</td><td>DMEMに溶解し、0.2 & microで滅菌;Mフィルター</td></tr><tr><td>解離チューブ(gentleMACS Cチューブ)</td><td>ミルテニ・バイオテック</td><td>130-093-237</td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコのモディファイドイーグル中型、高グルコース</td><td>ギブコ</td><td>31966-021</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>インビトロジェン</td><td>AM9260G</td><td></td></tr><tr><td>ファルコン円錐遠心分離機管、15 mL</td><td>コーニング</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>ファルコン円錐遠心分離機チューブ、50 mL</td><td>コーニング</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>胎児用牛血清</td><td>ギブコ</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>馬用血清&nbsp;</td><td>ギブコ</td><td>26050088</td><td></td></tr><tr><td>磁気標識試薬(サテライトセルアイソレーションキット)</td><td>ミルテニ・バイオテック</td><td>130-104-268</td><td></td></tr><tr><td>磁気セパレータ(MidiMACSセパレーター)</td><td>ミルテニ・バイオテック</td><td>130-042-302</td><td></td></tr><tr><td>マトリゲル&nbsp;</td><td>コーニング</td><td>CLS356234</td><td>DMEMに溶解して10%の濃度にし、nbsp;</td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド、PBS中の4%</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>J61899。AK</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン・ストレプトマイシン&nbsp;</td><td>ギブコ</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝塩水&nbsp;</td><td>VWR</td><td>392-0334</td><td></td></tr><tr><td>分離柱(LS柱)</td><td>ミルテニ・バイオテック</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>骨格筋ミオシン抗体(MHC)</td><td>サンタクルーズ</td><td>SC-32732</td><td>ブロッキング溶液に溶けて1:50の希釈で溶解(セクション8.7参照)</td></tr><tr><td>TCディッシュ、100 x 20 mm</td><td>サーステット</td><td>83.3902</td><td></td></tr><tr><td>組織解離器(GentleMACS 解離器)</td><td>ミルテニ・バイオテック</td><td>130-093-235</td><td></td></tr><tr><td>トリトン X-100&nbsp;</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>X100-1L</td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro 筋形成研究のための骨格筋サテライト細胞の単離

Isolation of Skeletal Muscle Satellite Cells for In Vitro Myogenesis Studies

In vitro 筋形成研究のための骨格筋サテライト細胞の単離

Skeletal muscle regeneration and growth depend on satellite cells, the muscle tissue&#39;s resident stem cells. Currently, these cells serve as ...

isolation-skeletal-muscle-satellite-cells-for-vitro-myogenesis

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

ミクロ解剖植技術は、骨格筋幹細胞のソースとして、若年成人や胚の筋肉から増殖性骨格筋細胞を単離するための堅牢で信頼性の高い方法です。一意に、これらの細胞は、クローン的に生体移植のために使用される骨格筋幹細胞株を生成するために導出されている。...

大人と胚骨格筋のMicroexplantの文化と骨格筋幹細胞の単離

このビデオは、組織解剖、酵素消化、その後の機械的精製および遠心精製を通じて、ラット頭部分枝量筋組織からの衛星細胞の単離を示しています。次に、細胞は細胞外マトリックスでコーティングされたウェルに播種され、筋芽細胞に分化し、最終的には筋管と成熟筋繊維に分化します。...

ラット頭部筋組織からサテライト細胞を単離する技術

筋線維の単離および培養は、ゴールドスタンダードである...

成人骨格筋からの個々の筋線維とその衛星細胞の単離および培養

静止衛星細胞の純粋な集団の単離および培養、筋肉幹細胞集団は、筋肉幹細胞生物学および再生、ならびに筋ジストロフィーおよび他の変性疾患における治療のための幹細胞移植の理解に不可欠である。...

筋衛星細胞の単離、培養、および移植

体外培養系では 、脊椎動物の筋形成の理解に不可欠であることが分かっている。しかし、多くの、特に基底の分類群において、非哺乳動物の骨格筋の発達と成長について学んだことを残る。この組織を、筋原性前駆細胞（MPCは）の成体幹細胞を単離すること、及び初代培養の設定におけるそれらの自己再生、増殖、および分化を維持するための効率的かつ堅牢なプロトコルは、全体にわたって保存された発散の調節機構の同定を可能脊椎動物の系統。...

基礎脊椎動物の系統からの一次筋原前駆細胞/筋芽細胞培養液の調製

ヒトの筋肉に由来する主な接着細胞タイプは、筋原性細胞と線維芽細胞です。ここでは、CD56抗原に基づく磁気活性化細胞ソーティングを用いて細胞集団を濃縮します。その後、特異的抗体による免疫標識と画像解析技術の使用により、個々の細胞の細胞質および核特性を定量化できます。...

ヒト骨格筋からの一次筋原細胞および線維芽細胞の単離および定量的免疫組織化学的特性評価

このプロトコルは、9週齢のラットのbranchiomeric頭筋からの衛星細胞の単離を記載しています。筋肉は異なる鰓弓に由来します。次いで、衛星細胞は、それらの分化を研究するためのミリメートルサイズのスポットコーティング上で培養されます。このアプローチは、衛星細胞の増殖および継代を避けることができます。...

ラットヘッドBranchiomeric筋肉から衛星細胞の単離とキャラクタリゼーション

衛星細胞の正確な同定は様々...

Pax7 とラミニン抗体抗体法による骨格筋衛星細胞の同定

このプロトコルは1)大人マウス腓腹筋からの第一次線維芽細胞の隔離そして文化、また2)西部のしみの分析に先行しているスクロース密度勾配と結合される差動ultrarifjugeation方法を使用してexosomesの浄化そして性格描写を示す。...

骨格筋線維芽細胞からのエクソソームの単離と特性評価

ここでは、出生後初期の発達段階で単一の筋線維を効率的に得る方法を、エメリー・ドレイフス型筋ジストロフィー(EDMD)の非常に重篤なモデルであるホモジューザイゴウス変異体ラミンΔ8-11マウスモデルから提案する。...

出生後初期の発達におけるエメリー・ドレイフス型筋ジストロフィーのマウスモデルからの単一の筋繊維の分離と培養

骨格筋は、常在幹細胞を含む複数の細胞タイプで構成されており、それぞれが筋肉の恒常性と再生に特別な貢献をしています。ここでは、生理学的、in vivo、および環境的特性の多くを保持するex...

マウス骨格筋の未分画バルク培養によるニッチおよび幹細胞の静止を再現

学ぼう、マウス骨格筋から骨格筋サテライト細胞を単離・培養する標準化プロトコル。酵素処理、機械的解離、MACSによる精製、選択的培養で高純度（97%以上PAX7陽性）の筋原性前駆細胞を得、筋形成研究や再生医療に応用できます。

In vitro 筋形成研究のための骨格筋サテライト細胞の単離

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