Name: 組換えヒトSLFN14リボヌクレアーゼの急速生成と質量光度による化学量論解析 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-20T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 20 s
Description: 学ぶ、哺乳類細胞を用いて組換えヒトSLFN14リボヌクレアーゼを急速生成する方法と、質量光度による化学量論解析の手法。このプロトコルは遺伝子制御研究におけるタンパク質機能解明に有用である。

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<ol><li>Pisareva, V. P., Muslimov, I. A., Tcherepanov, A., Pisarev, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+novel+ribosome-associated+endoribonuclease+slfn14+from+rabbit+reticulocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of novel ribosome-associated endoribonuclease slfn14 from rabbit reticulocytes.</a> Biochemistry. 54 (21), 3286-3301 (2015).</li>
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<li>Murai, J., Thomas, A., Miettinen, M., Pommier, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen+11+%28slfn11%29%2C+a+restriction+factor+for+replicative+stress+induced+by+DNA-targeting+anti-cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Schlafen 11 (slfn11), a restriction factor for replicative stress induced by DNA-targeting anti-cancer therapies.</a> Pharmacol Ther. 201, 94-102 (2019).</li>
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<li>Ojha, R., Timin, E., Szirovicza, L., Xu, W., Hepojoki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+comparison+of+in-house+prepared+transfection+reagents+in+the+delivery+of+mrna+or+DNA+to+a+wide+range+of+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">A systematic comparison of in-house prepared transfection reagents in the delivery of mrna or DNA to a wide range of cultured cells.</a> J Biol Chem. 301 (12), 110742(2025).</li>
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<table><tbody><tr><td>2-メルカプトエタノール(B-Me)</td><td>シグマ</td><td>M3148-500ML</td><td>14.3 M 解 tock</td></tr><tr><td>MP 2024 R2を取得</td><td>レフェイン</td><td>/</td><td>データ取得ソフトウェア</td></tr><tr><td>アデノシン-5'-三リン酸二ナトリウム塩三水和物(ATP)</td><td>ケム・インペックス・インターナショナル</td><td>00015-100G</td><td>溶液をpH7.0に調整する</td></tr><tr><td>アンチフラッグM2親和性ゲル</td><td>ミリポール</td><td>A2220</td><td>アンチフラッグアフィニティ樹脂</td></tr><tr><td>塩酸ベンザミジン水和物</td><td>シグマ</td><td>B6506-25G</td><td>プロテアーゼ阻害剤</td></tr><tr><td>広範囲タンパク質標準(10-250 kDa)</td><td>バイオ・ラッド</td><td>P7719S</td><td>プレスティンドタンパク質標準</td></tr><tr><td>伯爵夫人3</td><td>インビトロジェン</td><td>A49862</td><td>自動セルカウンター</td></tr><tr><td>ディスカバーMPv2024 R2</td><td>レフェイン</td><td>/</td><td>データ分析ソフトウェア</td></tr><tr><td>ダルベッコのリン酸塩緩衝塩水</td><td>コーニング</td><td>21-031-CV</td><td>1x溶液ストック</td></tr><tr><td>DYKDDDDKペプチド</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>A36805</td><td>3xフラッグペプチド</td></tr><tr><td>FreeStyle 293-Fセル</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>R79007</td><td>哺乳類懸浮細胞</td></tr><tr><td>ジーニアストMヌクレアーゼDMF提出</td><td>サンタクルーズ</td><td>sc-391121B</td><td>ユニバーサルヌクレアーゼ</td></tr><tr><td>ハイクローンCDM4HEK293メディア</td><td>シチバ</td><td>SH3085802</td><td>血清フリー培養培地</td></tr><tr><td>HyClone SFM4Transfx-293 メディア</td><td>シチバ</td><td>SH3086002</td><td>一時型トランスフェクション媒体</td></tr><tr><td>イマーソル518F</td><td>ツァイス</td><td>4Y00-R0DY-1007-3BF3</td><td>浸漬油</td></tr><tr><td>イソプロピルアルコール</td><td>マクロン・ファイン・ケミカルズ</td><td>3032-02</td><td></td></tr><tr><td>Laemmli サンプルバッファ</td><td>バイオ・ラッド</td><td>1610737</td><td>2倍の溶液ストック</td></tr><tr><td>ロイププチン</td><td>VWR</td><td>J580-25MG</td><td>プロテアーゼ阻害剤</td></tr><tr><td>塩化マグネシウム六水和物(MgCl2)</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>M33-500</td><td></td></tr><tr><td>MassFerence P1&nbsp;</td><td>レフェイン</td><td>MP-CON-41033</td><td>500倍口径ストック</td></tr><tr><td>MassGlass UCサンプル準備キット</td><td>レフェイン</td><td>MP-CON-21022</td><td>スライドとガスケット</td></tr><tr><td>マイクロバイオスピンカラム</td><td>バイオ・ラッド</td><td>7326204</td><td>空のポリプロピレンスピンカラム</td></tr><tr><td>ミリQ IQ 7000システム</td><td>ミリポール</td><td>ZIQ7000T0C</td><td>タイプI超純水</td></tr><tr><td>ミニプロテアンTGXのシミフリージェル</td><td>バイオ・ラッド</td><td>4568086</td><td>SDS-PAGE 4-15%</td></tr><tr><td>湿度、冷却、CO2を備えたミニトロン</td><td>インフォラーズ</td><td>72175</td><td>インキュベーターシェーカー</td></tr><tr><td>MPアライメントキット</td><td>レフェイン</td><td>MP-CON-21019</td><td>アライメントツール、ソフトチップピンザー、磁石</td></tr><tr><td>ナノフォトメーター</td><td>インプレン</td><td>NP80</td><td>UV-vis分光光度計</td></tr><tr><td>ニューテーター</td><td>クレイ・アダムズ・ブランド</td><td>421105</td><td></td></tr><tr><td>ペプスタチンA</td><td>サンタクルーズ</td><td>sc-45036B</td><td>プロテアーゼ阻害剤</td></tr><tr><td>フェニルメチルスルホニルフッ化物(PMSF)</td><td>リサーチプロダクツ・インターナショナル</td><td>P20270-25.0</td><td>プロテアーゼ阻害剤</td></tr><tr><td>ポリカーボネートシェイクフラスコ&nbsp;</td><td>デュラン・ウィートン・キンブル</td><td>WPFBC1000S</td><td>ベントされたバッフルベースフラスコ</td></tr><tr><td>ポリエチレンニミン(PEI)MW 40,000</td><td>ポリサイエンス</td><td>24765</td><td>トランスフェクション試薬</td></tr><tr><td>量子ビット4フルオロメーター</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>Q33226</td><td></td></tr><tr><td>量子ビットRNA高感度アッセイキット</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>Q32852</td><td>RNA特異的染料を用いた定量化</td></tr><tr><td>シンプリブルー セーフステイン</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>LC6065</td><td>クーマッシー G-250</td></tr><tr><td>SLFN14発現プラスミドDNA</td><td>オリゲネ</td><td>RC226257</td><td>人間タグ付きORFクローン</td></tr><tr><td>塩化ナトリウム(NaCl)</td><td>ミリポール</td><td>1.37017</td><td></td></tr><tr><td>トリス、pH 7.4</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>J60202。K2</td><td>1 Mの緩衝溶液ストック</td></tr><tr><td>トリス(2-カルボキシエチル)塩酸ホスフィン(TCEP)</td><td>ゴールド・バイオテクノロジー</td><td>TCEP10</td><td>TCEP</td></tr><tr><td>トライトン X-100</td><td>VWR</td><td>M143-1L</td><td>洗剤</td></tr><tr><td>トリパンブルー染色</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>T10282</td><td>0.4%溶液在庫</td></tr><tr><td>トゥイーン20</td><td>VWR</td><td>0777-1L</td><td>洗剤</td></tr><tr><td>トゥーMP</td><td>レフェイン</td><td>MP-PRO-00001</td><td>質量フォトメーター</td></tr><tr><td>ゼバ40Kデサルチン柱</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>A57759</td><td>サイズ排除クロマトグラフィー</td></tr></tbody></table>

組換えヒトslfn14リボヌクレアーゼの急速生成と質量光度による化学量論解析

Rapid Production of Recombinant Human SLFN14 Ribonuclease and Stoichiometric Analysis by Mass Photometry

組換えヒトSLFN14リボヌクレアーゼの急速生成と質量光度による化学量論解析

Ribonucleases are a specialized class of RNA binding proteins that catalyze RNA cleavage and contribute to diverse biological processes including gene ...

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Research

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

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SENP1プロテアーゼキネティクス決定のための定量的なFRET（フェルスター共鳴エネルギー移動）の分析

全細胞RNAは、短期的RNA合成と崩壊の変化と同様に、RNAプロセシングの動態を研究するための貧乏人のテンプレートが用意されています。ここでは、これらの制限を克服することができ、新たに転写されたRNAのチオール特有のビオチン化および精製し、4  -...

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エキソヌクレアーゼは、ゲノムの安定性を確保する上で重要な役割を果たします。WRNエキソヌクレアーゼ機能の喪失は、早期老化をもたらします。ヌクレアーゼの基質やその他の要件をin vitroで研究することは、in...

ヒト早老症WRNエキソヌクレアーゼのオルソログであるDmWRNexoを特徴付けるための蛍光ベースのエキソヌクレアーゼアッセイ、および他のヌクレアーゼへの応用

このプロトコルは、選択された反応モニタリングを使用して、複雑な生物学的サンプル内の標的タンパク質の絶対定量アッセイを実行する方法を説明しています。これは、マウスマクロファージ走化性シグナル伝達経路のタンパク質を正確に定量するために使用されました。標的ペプチドの選択、アッセイ開発、定性的および定量的アッセイについて詳しく説明します。...

絶対タンパク質定量のための質量分析法を選択反応モニタリング

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生成する方法について述べる、RSVs の呼吸器合胞体ウイルス (RSVs) と最適化されたプラクの試金を変更遺伝子を増幅します。RSV レプリケーションの定量化しライブ RSV 封入体と顆粒の封入体のダイナミクスの分析、それぞれ 2...

世代、増幅、および組換え呼吸器合胞体ウイルスの滴定

ここでは、cDNA中間体を使用せずに短いRNA(ランあたり&lt;35...

2D-HELS MS Seq:異なるヌクレオチド修飾を持つRNA混合物の直接およびde novoシーケンシングのための一般的なLC-MSベースの方法

単一分子蛍光エネルギー移動は、リボソームタンパク質合成中のtRNAダイナミクスを追跡する方法である。個々のリボソームを追跡することにより、不均一な集団が同定され、メカニズムに光が当たります。この方法は、生物学的立体構造の変化を一般的に追跡し、他の多くの複雑なバイオシステムにおける動的機能関係を明らかにするために使用することができる。単一分子法は、平均効果のために従来のアンサンブル法ではアクセスできない非レート制限ステップおよび低人口のキー中間体を観察することができる。...

リボソームタンパク質合成の単一分子蛍光エネルギー転移研究

2ジェットCIJおよび4ジェットマルチインレットボルテックスミキサー(μMIVM)を含む閉じ込め衝突ジェット(CIJ)ミキサー技術を使用して脂質ナノ粒子(LNP)を合成するための詳細なプロトコルが実証されています。CIJミキサーは、再現性のある乱流マイクロミキシング環境を生成し、単分散LNPを生成します。...

閉じ込めインピンギングジェットミキサーにおける乱流による脂質ナノ粒子の合成

我々は、バッチ間のばらつきを最小限に抑えるために細胞増殖を制御することに焦点を当て、OnePot「組換え要素を使用したタンパク質合成」(PURE)システムおよび無細胞タンパク質合成用の粗リボソームを生産するための最新のプロトコルを提示します。...

再現性のある無細胞タンパク質合成のためのOnePot PUREおよび粗リボソーム生産の精製

大 腸菌 からのヒドロフォビンSC16の組換え生産と精製、および蛍光アッセイを用いた自己組織化のモニタリング

学ぶ、哺乳類細胞を用いて組換えヒトSLFN14リボヌクレアーゼを急速生成する方法と、質量光度による化学量論解析の手法。このプロトコルは遺伝子制御研究におけるタンパク質機能解明に有用である。

組換えヒトSLFN14リボヌクレアーゼの急速生成と質量光度による化学量論解析

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