Name: ヒト線維芽細胞における細胞老化の定量的評価のためのLysoTrackerを用いたリソソームプロファイリング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-07-17T12:55:00.000+00:00
Duration: 5 min 40 s
Description: 学ぶLysoTracker Deep Redを用いたリソソームプロファイリングで、ヒト線維芽細胞IMR-90の細胞老化を定量的に評価する方法。ライブセルイメージングにより、酸性オルガネラの変化を可視化し、老化負荷を測定できます。

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<table><tbody><tr><td>24ウェル組織培養プレート（底面フラット、TC処理済み）</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229124</td><td>生細胞蛍光イメージングと互換性のある透明底多重培養プレート（例：6、12、または24ウェルTC処理済みポリスチレンプレート；高解像度イメージングにはガラス底イメージングプレートが好ましい）。</td></tr><tr><td>ベータガラクトシダーゼ染色キット（老化アッセイ）</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>9860</td><td>SA-β-ガラクトシダーゼ検出用商用キットで、pH 6.0の染色バッファーが検証されている。参考までに、固定液はPBS中の2%ホルムアルデヒドと0.2%グルタルアルデヒドを含み、染色液はDMF中の1 mg/mL X-gal、40 mMクエン酸/リン酸 pH 6.0、5 mMカリウムフェロシアニド、5 mMカリウムフェリシアニド、150 mM NaCl、2 mM MgCl2を含む。</td></tr><tr><td>BioRender（科学的イラストソフトウェア）</td><td>BioRender</td><td>N/A &mdash; ウェブアプリケーション</td><td>図表（図1&ndash;3）の作成に使用。https://www.biorender.com</td></tr><tr><td>炭酸ガス（CO2）、圧縮シリンダー</td><td>Airgas（または類似のサプライヤー）</td><td>N/A</td><td>細胞培養インキュベーターおよびステージ上イメージングチャンバーで5%の雰囲気を維持するために使用される医療グレードのCO2。</td></tr><tr><td>胎児ウシ血清（FBS）、熱不活性化</td><td>Thermo Fisher Scientific（Gibco）</td><td>10082147</td><td>完全培養培地に10% v/vで使用する、56 &deg;Cで熱不活性化された、任意の細胞培養グレードFBS。</td></tr><tr><td>生細胞対応蛍光顕微鏡</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AMF7000</td><td>生細胞温度およびCO2制御、遠赤（励起波長~647 nm / 発光波長~670 nm）およびDAPI/ホイスト（励起波長~405 nm / 発光波長~460 nm）チャンネル用のフィルターセット、およびリソソーム構造を分解するのに十分なNAを持つ20&times;-40&times;のレンズを持つ、任意の広視野または共焦点蛍光顕微鏡。本研究ではEVOS M7000イメージングシステムが使用された。</td></tr><tr><td>ホイスト33342核染色</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>H3570</td><td>生細胞核染色（青色蛍光、励起波長~405 nm）用の細胞透過性DNA染料。生理的条件下では細胞透過性がないDAPIとは交換不可。</td></tr><tr><td>イメージ解析ソフトウェア</td><td>Python Software Foundation</td><td>N/A</td><td>核分割、核から細胞領域への拡張、強度しきい値設定、基本的なイメージ統計（例：Pythonとscikit-image、MATLAB、ImageJ/Fiji、CellProfiler）をサポートする科学計算環境。SenTrackパイプライン（補足ファイルS1を参照）が本研究用に開発された。</td></tr><tr><td>IMR-90ヒト肺線維芽細胞（細胞株）</td><td>ATCC</td><td>CCL-186</td><td>複製性老化をモデル化するのに使用される正常ヒト胎児肺二倍体線維芽細胞株。同様に特性化されたヒト線維芽細胞株を代用可能。</td></tr><tr><td>LysoTracker Deep Red</td><td>Thermo Fisher Scientific（Invitrogen）</td><td>L12492</td><td>酸性細胞小器官の生細胞染色用酸性トロピック蛍光染料。DMSO中の1 mMストックとして供給。使用濃度は、調製された細胞培養培地中の75 nM。&nbsp; 遠赤発光（ex 647 nm / em 668 nm）はリポフスチン自己蛍光との重複を最小限に抑えるが、完全には排除しない。</td></tr><tr><td>Minimum Essential Medium（MEM）</td><td>Thermo Fisher Scientific（Gibco）</td><td>11-095-080</td><td>IMR-90線維芽細胞の基本培養培地。FBS 10%およびペニシリン-ストレプトマイシン1%で補完。任意のイーグルのMinimum Essential Medium（Earle's塩およびL-グルタミン入り）の標準的配合で代用可能。</td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン溶液（100&times;）</td><td>Thermo Fisher Scientific（Gibco）</td><td>15140122</td><td>完全培養培地用抗生物質サプリメント。1% v/v（最終濃度100 U/mLペニシリン、100 &mu;g/mLストレプトマイシン）で使用。任意の標準的ペニシリン-ストレプトマイシン溶液を代用可能。</td></tr><tr><td>フェノールレッドフリーイメージング培地</td><td>Thermo Fisher Scientific（Gibco）</td><td>A1896701</td><td>生細胞イメージングのバックグラウンド蛍光を低減するために使用される、フェノールレッドフリーDMEMまたはHBSS。FluoroBrite DMEMはよく使用されるオプションの一つ。10% FBSで補完された任意のフェノールレッドフリーイメージングバッファーを代用可能。</td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水（PBS）、pH 7.4（1&times;）</td><td>Thermo Fisher Scientific（Gibco）</td><td>10010023</td><td>細胞洗浄および試薬希釈用の等張緩衝液。pH 7.4の任意の滅菌1&times; PBSを代用可能。</td></tr><tr><td>SenTrackLite v0.5.0（ソフトウェア）</td><td>オープンソース（Estrada / Melendez Lab）</td><td>v0.5.0</td><td>リソソーム老化イメージ解析用オープンソースの単一ファイルPython / Tkinterアプリケーション。補足ファイルS1として配布。Zenodoでアーカイブ済み、doi:10.5281/zenodo.19701255。MITライセンス。ソース：https://github.com/goldbader-hub/Sentrack</td></tr><tr><td>ステージトップ環境チャンバー</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AMC2000</td><td>温度（37 &deg;C）およびCO2（5%）制御を備えたマイクロスコープ上の生細胞イメージング用環境チャンバー。本研究ではEVOS Onstage Incubatorが使用された。同等のステージトップインキュベーターを代用可能。</td></tr></tbody></table>

ヒト線維芽細胞における細胞老化の定量的評価のためのlysotrackerを用いたリソソームプロファイリング

Lysosomal Profiling With LysoTracker For Quantitative Assessment of Cellular Senescence In Human Fibroblasts

ヒト線維芽細胞における細胞老化の定量的評価のためのLysoTrackerを用いたリソソームプロファイリング

Cellular senescence is a stable cell-cycle arrest state associated with characteristic phenotypes, including enlarged cell morphology, altered secretory ...

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

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ヒト線維芽細胞における細胞老化の定量的評価のためのLysoTrackerを用いたリソソームプロファイリング

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