マウスの腎虚血再灌流損傷におけるレーザースペックルコントラストイメージングによる微小血管灌流

本研究では、レーザースペックルコントラストイメージングシステムを用いて、虚血再灌流中のギニアにおける微小灌流を監視します。この技術は、固形臓器移植、薬剤効果、虚血研究など、血流変化に関連する研究にも応用可能です。まずは、各手術前に手術台を消毒し始めましょう。

滅菌済みの器具、綿棒、ガーゼ、希釈された麻酔薬、その他必要なものをテーブルにきちんと並べてください。痛みを和らげるために、手術の30分前に体重1kgあたり0.2ミリグラムを皮下注射で投与してください。消毒済みの生理食塩水を清潔な容器に注ぎます。

ハサミを使って、ガーゼの中央に適切な開口部を切ります。麻酔をかけたマウスを温熱パッドの上に置き、テープで固定します。除毛クリームを塗って腹部の毛を除去します。

温熱パッドを使用し、手術中は直腸温度を37度に保ちます。綿棒で手術部位をまず75%アルコールで消毒し、その後ヨードフォアで消毒し、この手順をさらに2回繰り返します。その後、鉗子でマウスの足の指をつまんで痛みの反応がないか確認します。

ハサミで腹部の正中線に垂直に切開します。皮膚を腹膜から優しく切り離し、腹膜を切開して腹腔内に入ります。視認性を高めるためにリトラクターを装着しましょう。

手術部位をガーゼで覆い、開口部を腹腔に合わせます。ガーゼを生理食塩水で湿らせます。綿棒で腸を優しく片側に動かし、右側の腎臓と周囲の組織を露出させます。

ガーゼを折りたたんで腸を覆い、乾燥を防ぐために生理食塩水で湿らせます。次に、角度のある鉗子を使って右の尿管を持ち上げます。6-0の縫合糸を2本通し、2か所で結紮します。

微細ハサミを使って、2つの固定管の間の尿管を横断します。次に、細かい鉗子で持った生理食塩水で湿らせた綿球を使って、肝臓を優しく押し上げます。綿球で肝臓を固定して腎臓や右側の血管を露出させます。

次に、角度のある鉗子を使って腎動脈と静脈を完全に露出させるまで、会陰脂肪のパッドを鈍く切り離します。慎重に。鉗子を腎動脈と静脈の下に滑り込ませてチャネルを作り、6-0シルク編み縫合糸を両血管に巻きつけて結紮します。腎臓近くの閉塞した腎動脈と静脈を切断しました。

接着組織とともに腎臓を摘出します。次に、肝臓を保持していた綿球を取り除きます。レーザースペックルコントラストイメージングシステムをオンにし、専用ソフトウェアを起動します。

元の画像をクリックし、プレビューすると生の手術視野画像が表示されます。マウスの位置を変えてください。元の画像を閲覧しながらカメラの拡大率を調整し、ターゲットの腎臓を鮮明に見ることができます。

その後、同時表示をクリックするとリアルタイムの血流画像が表示されます。倍率を2.5倍に設定し、自動血流調整を選択してください。次に血流パラメータを固定します。

録画を5,000ミリ秒ごとに1フレームキャプチャに設定してください。次に、正方形面積パラメータを112に設定し、腎臓画像上で5つの正方形領域を均一に配置します。リアルタイム画像登録をクリックして記録して血流記録を開始してください。

30分の基準値を記録した後、左腎臓の血管周辺の脂肪組織を鈍く分離します。止血鉗子を使い、左腎動脈と肺門近くの静脈にマイクロクランプを当てます。さらに30分間リアルタイム監視を続けてください。

マイクロクランプを外して再灌流を開始します。腎微小血管血流のリアルタイム回復を監視・記録します。再灌流を少なくとも60分間観察した後、記録を停止し腹部切開部を閉じます。

脱水を防ぐために腹腔内注射で生理食塩水1ミリリットルを投与してください。マウスを温熱パッドの上に置き、意識を取り戻して自力で元に戻るまでモニターしてください。最初の30分間で、腎の微小血管血流は徐々にベースラインで安定しました。

虚血前には関心領域間の灌流レベルの異質性が観察されました。腎動脈と静脈のクランプ後、血流が急激に減少し、腎微小循環は灌流なしの状態に入りました。クランプを外すと血流は瞬時にピークに達し、その後減少し、徐々に比較的安定したレベルに戻っていった。

再灌流60分間の微小血管灌流率は虚血前よりもはるかに低かった。レーザースペックルコントラストイメージングシステムを通じて腎マイクロ灌流の血流を取得できます。これにより、虚血の過程と再灌流の過程が確認されます。

良好な造影剤を持つクリアな腎臓を得るには、忍耐強く、腎臓を周囲の資源や組織から分離する時間をかける必要があります。将来的には、病態生理の追加の指標を取り入れ、この技術を用いて薬物が腎虚血に与える影響を監視することができるでしょう。