Name: CRISPR/Cas9を媒介したカエノラブディティス・エレガンスにおける生殖細胞特異遺伝子の内因性蛍光タグ付け (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-29T13:20:00.000+00:00
Duration: 10 min 37 s
Description: 学ぼう、CRISPR/Cas9を用いてCaenorhabditis elegansの生殖細胞タンパク質に内因性蛍光タグを導入する方法です。本プロトコルにより、天然の調節下で正確なタンパク質局在を報告する安定したノックインアレルを作製できます。

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	<li>Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transparent+window+into+biology:+a+primer+on+Caenorhabditis+elegans.">A transparent window into biology: a primer on Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).</li><li>Pazdernik, N., Schedl, T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+to+germ+cell+development+in+Caenorhabditis+elegans.">Introduction to germ cell development in Caenorhabditis elegans.</a> Adv Exp Med Biol. 757, 1-16 (2013).</li><li>Ebbing, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+transcriptomics+of+C.+elegans+males+and+hermaphrodites+identifies+sex-specific+differences+in+gene+expression+patterns.">Spatial transcriptomics of C. elegans males and hermaphrodites identifies sex-specific differences in gene expression patterns.</a> Dev Cell. 47 (6), 801-813.e6 (2018).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiotemporal+single-cell+architecture+of+gene+expression+in+Caenorhabditis+elegans+germ+cells.">Spatiotemporal single-cell architecture of gene expression in Caenorhabditis elegans germ cells.</a> Cell Discov. 11 (1), 26 (2025).</li><li>Mello, C. C., Kramer, J. M., Stinchcomb, D., Ambros, V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+in+C.+elegans:+extrachromosomal+maintenance+and+integration+of+transforming+sequences.">Efficient gene transfer in C. elegans: extrachromosomal maintenance and integration of transforming sequences.</a> EMBO J. 10 (12), 3959-3970 (1991).</li><li>Kelly, W. G., Fire, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatin+silencing+and+the+maintenance+of+a+functional+germline+in+Caenorhabditis+elegans.">Chromatin silencing and the maintenance of a functional germline in Caenorhabditis elegans.</a> Development. 125 (13), 2451-2456 (1998).</li><li>Robert, V. J., Sijen, T., van Wolfswinkel, J., Plasterk, R. H. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatin+and+RNAi+factors+protect+the+C.+elegans+germline+against+repetitive+sequences.">Chromatin and RNAi factors protect the C. elegans germline against repetitive sequences.</a> Genes Dev. 19 (7), 782-787 (2005).</li><li>Merritt, C., Seydoux, G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+solutions+for+the+germline.">Transgenic solutions for the germline.</a> WormBook. , 1-21 (2010).</li><li>Fr&#x00F8;kj&#x00E6;r-Jensen, C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-copy+insertion+of+transgenes+in+Caenorhabditis+elegans.">Single-copy insertion of transgenes in Caenorhabditis elegans.</a> Nat Genet. 40 (11), 1375-1383 (2008).</li><li>Vallin, E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-wide+collection+of+Mos1+transposon+insertion+mutants+for+the+C.+elegans+research+community.">A genome-wide collection of Mos1 transposon insertion mutants for the C. elegans research community.</a> PLoS One. 7 (2), e30482 (2012).</li><li>Dickinson, D. J., Ward, J. D., Reiner, D. J., Goldstein, B. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+the+Caenorhabditis+elegans+genome+using+Cas9-triggered+homologous+recombination.">Engineering the Caenorhabditis elegans genome using Cas9-triggered homologous recombination.</a> Nat Methods. 10 (10), 1028-1034 (2013).</li><li>Friedland, A. E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heritable+genome+editing+in+C.+elegans+via+a+CRISPR-Cas9+system.">Heritable genome editing in C. elegans via a CRISPR-Cas9 system.</a> Nat Methods. 10 (8), 741-743 (2013).</li><li>Nance, J., Fr&#x00F8;kj&#x00E6;r-Jensen, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Caenorhabditis+elegans+transgenic+toolbox.">The Caenorhabditis elegans transgenic toolbox.</a> Genetics. 212 (4), 959-990 (2019).</li><li>Wang, P., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+CRISPR-Cas9-mediated+genome+editing+to+study+spermatogenesis+in+Caenorhabditis+elegans.">Protocol for CRISPR-Cas9-mediated genome editing to study spermatogenesis in Caenorhabditis elegans.</a> STAR Protoc. 4 (4), 102720 (2023).</li><li>Khan, A. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+highly+efficient+ligation-independent+cloning+system+for+CRISPR/Cas9-based+genome+editing+in+plants.">A highly efficient ligation-independent cloning system for CRISPR/Cas9-based genome editing in plants.</a> Plant Methods. 13, 86 (2017).</li><li>Ghanta, K. S., Ishidate, T., Mello, C. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+for+precision+genome+editing+in+Caenorhabditis+elegans.">Microinjection for precision genome editing in Caenorhabditis elegans.</a> STAR Protoc. 2 (3), 100748 (2021).</li><li>Rieckher, M., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+microinjection.">Caenorhabditis elegans microinjection.</a> Bio Protoc. 7 (19), e2584 (2017).</li><li>Medley, J. C., Hebbar, S., Sydzyik, J. T., Zinovyeva, A. Y. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+nucleotide+substitutions+effectively+block+Cas9+and+allow+for+scarless+genome+editing+in+Caenorhabditis+elegans.">Single nucleotide substitutions effectively block Cas9 and allow for scarless genome editing in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 220 (1), iyab199 (2022).</li><li>Berkowitz, L. A., Knight, A. L., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+stable+transgenic+C.+elegans+using+microinjection.">Generation of stable transgenic C. elegans using microinjection.</a> J Vis Exp. (18), e833 (2008).</li><li>Shaner, N. C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bright+monomeric+green+fluorescent+protein+derived+from+Branchiostoma+lanceolatum.">A bright monomeric green fluorescent protein derived from Branchiostoma lanceolatum.</a> Nat Methods. 10 (5), 407-409 (2013).</li><li>Bajar, B. T., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+brightness+and+photostability+of+green+and+red+fluorescent+proteins+for+live+cell+imaging+and+FRET+reporting.">Improving brightness and photostability of green and red fluorescent proteins for live cell imaging and FRET reporting.</a> Sci Rep. 6, 20889 (2016).</li><li>Bindels, D. S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mScarlet:+a+bright+monomeric+red+fluorescent+protein+for+cellular+imaging.">mScarlet: a bright monomeric red fluorescent protein for cellular imaging.</a> Nat Methods. 14 (1), 53-56 (2017).</li><li>He, S., Cuentas-Condori, A., Miller, D. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NATF+(native+and+tissue-specific+fluorescence):+a+strategy+for+bright,+tissue-specific+GFP+labeling+of+native+proteins+in+Caenorhabditis+elegans.">NATF (native and tissue-specific fluorescence): a strategy for bright, tissue-specific GFP labeling of native proteins in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 212 (2), 387-395 (2019).</li><li>Paix, A., Folkmann, A., Seydoux, G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precision+genome+editing+using+CRISPR-Cas9+and+linear+repair+templates+in+C.+elegans.">Precision genome editing using CRISPR-Cas9 and linear repair templates in C. elegans.</a> Methods. 121-122, 86-93 (2017).</li></ol>

<table><tbody><tr><td>アガー</td><td>北京Lablead Biotech Co., Ltd.</td><td>QZ02</td><td>NGMアガープレートを調製するためのコンポーネント</td></tr><tr><td>アガロース</td><td>NOVON</td><td>ZZ14011</td><td>2%アガロースパッドを調製</td></tr><tr><td>線虫Caenorhabditis elegans 株N2</td><td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td><td></td><td>注射バックグラウンド株</td></tr><tr><td>遠心機</td><td>Eppendorf</td><td>5425</td><td>注射ミックスを澄清</td></tr><tr><td>コレステロール</td><td>北京化学試薬会社</td><td>57-88-5</td><td>NGMアガープレートを調製するためのコンポーネント</td></tr><tr><td>共注射マーカープラスミドrol-6 (su1006) (pRF4)</td><td>Guangshuo Ouラボ</td><td></td><td>候補を豊富にするローラーマーカー</td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>ZEISS</td><td>LSM880 + Airyscan</td><td>GFP発現/局在を検証</td></tr><tr><td>二リン酸カリウム（K2HPO4）</td><td>Sinapharm</td><td>CAS: 7758-11-4</td><td>NGMアガープレートを調製するためのコンポーネント</td></tr><tr><td>二リン酸ナトリウム（Na2HPO4）</td><td>Sinapharm</td><td>CAS: 7558-79-4</td><td>M9バッファーを調製するためのコンポーネント</td></tr><tr><td>DNAラダー</td><td>Mei5 Biotechnology, Co., Ltd.</td><td>MF288-01</td><td>アガロースゲルのサイズリファレンス</td></tr><tr><td>ドナープラスミドバックボーン（pPD95.75）</td><td>Addgene</td><td>1494</td><td>HDRドナー構築のバックボーン</td></tr><tr><td>電気泳動システム</td><td>北京Liuyi Biotechnology Co., Ltd.</td><td>112-0630</td><td>結合部スクリーニングおよび接合型の決定のためのアガロースゲル上PCR増幅物の分離</td></tr><tr><td>Escherichia coli OP50株</td><td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td><td></td><td>ワームの食物源</td></tr><tr><td>蛍光共注射マーカープラスミド（pPD122.11）</td><td>Fireラボ</td><td></td><td>候補を豊富にするGFPコマーカー</td></tr><tr><td>蛍光ステレオ顕微鏡</td><td>SOPTOP</td><td>SZX12-HT</td><td>蛍光共注射マーカーの生ワームスクリーニング</td></tr><tr><td>GelRed核酸ゲル染色</td><td>Mei5 Biotechnology, Co., Ltd.</td><td>MF079-plus-01</td><td>DNAバンドの可視化</td></tr><tr><td>ガラスキャピラリー</td><td>World Precision Instruments</td><td>1B100F-4</td><td>ニードルプーラーで注射針を作成するために使用</td></tr><tr><td>ハロカーボンオイル700</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H8898-50ML</td><td>注射中の乾燥を防ぐ</td></tr><tr><td>インキュベーター</td><td>武漢Ruihua器械設備有限公司</td><td>HP400S</td><td>標準温度でワームを維持</td></tr><tr><td>硫酸マグネシウム（MgSO4）</td><td>Sinapharm</td><td>CAS: 7487-88-9</td><td>NGMアガープレートとM9バッファーを調製するためのコンポーネント</td></tr><tr><td>マイクロキャピラリーピペット</td><td>KIMBLE</td><td>71900-50</td><td>加熱してスナップし、ローディングツールを作成</td></tr><tr><td>マイクロインジェクターユニット</td><td>Eppendorf</td><td>FemtoJet 4i</td><td>マイクロ注射針を介して遠位性腺に注射ミックスを制御圧力パルスで送り、フットペダルでトリガー</td></tr><tr><td>顕微鏡用カバーガラス</td><td>Fisherbrand</td><td>12545A 22×30-1</td><td>マイクロ注射用に2%アガロースパッドを準備し、マイクロ注射中にワームを固定およびマウントします; カバースリップのエッジに注射針先を開く</td></tr><tr><td>マイクロ注射用顕微鏡</td><td>ZEISS</td><td>Axio Observer.A1</td><td>注射用顕微鏡</td></tr><tr><td>ニードルプーラー</td><td>Sutter Instrument Company</td><td>Model P97</td><td>ガラスキャピラリーを注射針に引っ張る</td></tr><tr><td>PCRサーモサイクラー</td><td>Bio-Rad</td><td>C1000 Touch Thermal Cycler</td><td>PCR増幅</td></tr><tr><td>pDD162（Peft-3::Cas9 + 空のsgRNA）</td><td>Addgene</td><td>47549</td><td>Cas9 + sgRNA発現</td></tr><tr><td>ペプトン</td><td>Gibco</td><td>308723</td><td>NGMアガープレートを調製するためのコンポーネント</td></tr><tr><td>リン酸二カリウム（KH2PO4）</td><td>Sinapharm</td><td>CAS: 7778-77-0</td><td>NGMアガープレートとM9バッファーを調製するためのコンポーネント</td></tr><tr><td>塩化ナトリウム（NaCl）</td><td>Sinapharm</td><td>CAS: 7647-14-5</td><td>NGMアガープレートとM9バッファーを調製するためのコンポーネント</td></tr><tr><td>ステレオ顕微鏡</td><td>Motic</td><td>K400L</td><td>アガロースパッド上にワームをピックし、マウントし、注射後の回復ステップを実行</td></tr></tbody></table>

crispr/cas9を媒介したカエノラブディティス・エレガンスにおける生殖細胞特異遺伝子の内因性蛍光タグ付け

CRISPR/Cas9-mediated Endogenous Fluorescent Tagging of Germline-specific Genes in Caenorhabditis elegans

CRISPR/Cas9を媒介したカエノラブディティス・エレガンスにおける生殖細胞特異遺伝子の内因性蛍光タグ付け

Protein localization in the Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is central to interpreting gene function during gametogenesis, yet conventional ...

crisprcas9-mediated-endogenous-fluorescent-tagging-germline-specific

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生物学

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の生産 C.エレガンス</emとRecombineering経由>トランスジーン galK選択可能なマーカー

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ここでは、CRISPR Cas9 ribonucleoproteins と相同性依存修理テンプレートを使用して線虫のゲノム エンジニア...

迅速かつ安易なパイプラインを生成する突然変異点ゲノムにc. の elegansを用いた CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins

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緑色蛍光タンパク質タグと 4', 6-Diamidino-2-phenylindole線虫の染色によるタンパク質細胞内局在を検出

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人間でタグ内因性のタンパク質誘導多能性幹細胞 CRISPR/Cas9 を使用して

このプロトコルの目的は、組み立てられたリボヌクレオタンパク質複合体とスクリーニングのためのdpy-10コクリスピーマーカーを使用して、C.エレガンスゲノムのシームレスなCRISPR /...

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ここでは、成功した遺伝子組み換えをマーカーフリーで識別するためにPCRベースの技術を利用し、安定したノックインラインの開発を促進するショウジョウバエの簡略化された内因性遺伝子タグ付けプロトコルを紹介します。...

ショウジョウバエのメラノガスターにおける内在性遺伝子タグ付けのためのワンステップCRISPRベースの戦略

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線虫の世代間エピジェネティック遺伝の蛍光レポーターとクロマチン免疫沈降(ChIP)による解析

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AviTag特異的位置制限照明強化ビオチニル化(ALIBi)は、リボソームの細胞内集団を標識し親和性を精製し、下流のシーケンスおよびプロテオーム解析のために開発された新しいオプトジェネティック活性化法です。...

組換えペプチドタグ特異的位置制限照射強化ビオチニル化に基づく細胞内リボソームサブポピュレーションの単離

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