Name: サイズ排除クロマトグラフィーによるマウス骨格筋および骨髄からの小さな細胞外小胞の単離 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-23T12:55:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: 学ぶ サイズ排除クロマトグラフィーによるマウス骨格筋および骨髄からの高純度小細胞外小胞の単離法。差遠心分離とSECを組み合わせ、最小限の組織量で約10⁸粒子の収率を達成し、TEM・NTA・Western blottingで検証可能です。

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<ol>
	<li>Whitham, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+provide+a+means+for+tissue+crosstalk+during+exercise.">Extracellular vesicles provide a means for tissue crosstalk during exercise.</a> Cell Metab. 27 (1), 237-251.e4 (2018).</li><li>Kumar, M. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+as+tools+and+targets+in+therapy+for+diseases.">Extracellular vesicles as tools and targets in therapy for diseases.</a> Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 27 (2024).</li><li>Fonseka, P., Mathivanan, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+biogenesis,+cargo+sorting+and+implications+in+disease+conditions.">Extracellular vesicles biogenesis, cargo sorting and implications in disease conditions.</a> Cells. 12 (2), (2023).</li><li>Taraboletti, G., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioavailability+of+VEGF+in+tumor-shed+vesicles+depends+on+vesicle+burst+induced+by+acidic+pH.">Bioavailability of VEGF in tumor-shed vesicles depends on vesicle burst induced by acidic pH.</a> Neoplasia. 8 (2), 96-103 (2006).</li><li>Dakup, P. P., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+opportunities+in+state-of-the-art+proteomics+analysis+for+biomarker+development+from+plasma+extracellular+vesicles.">Challenges and opportunities in state-of-the-art proteomics analysis for biomarker development from plasma extracellular vesicles.</a> Proteomics. , (2025).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EV-origin:+Enumerating+the+tissue-cellular+origin+of+circulating+extracellular+vesicles+using+exLR+profile.">EV-origin: Enumerating the tissue-cellular origin of circulating extracellular vesicles using exLR profile.</a> Comput Struct Biotechnol J. 18, 2851-2859 (2020).</li><li>Shero, J. A., Lindholm, M. E., Sandri, M., Stanford, K. I. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle+as+a+mediator+of+interorgan+crosstalk+during+exercise:+Implications+for+aging+and+obesity.">Skeletal muscle as a mediator of interorgan crosstalk during exercise: Implications for aging and obesity.</a> Circ Res. 136 (11), 1407-1432 (2025).</li><li>Vanhie, J. J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+exercise-+and+high-fat+diet-induced+bone+marrow+extracellular+vesicles+in+stress+hematopoiesis.">The role of exercise- and high-fat diet-induced bone marrow extracellular vesicles in stress hematopoiesis.</a> Front Physiol. 13, 1054463 (2022).</li><li>Pinto, A. C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploiting+the+therapeutic+potential+of+contracting+skeletal+muscle-released+extracellular+vesicles+in+cancer:+Current+insights+and+future+directions.">Exploiting the therapeutic potential of contracting skeletal muscle-released extracellular vesicles in cancer: Current insights and future directions.</a> J Mol Med (Berl). 102 (5), 617-628 (2024).</li><li>Welsh, J. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+information+for+studies+of+extracellular+vesicles+(MISEV2023):+From+basic+to+advanced+approaches.">Minimal information for studies of extracellular vesicles (MISEV2023): From basic to advanced approaches.</a> J Extracell Vesicles. 13 (2), e12404 (2024).</li><li>De Sousa, K. P., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+extracellular+vesicles+and+future+directions+in+diagnosis+and+therapy.">Isolation and characterization of extracellular vesicles and future directions in diagnosis and therapy.</a> Wiley Interdiscip Rev Nanomed Nanobiotechnol. 15 (1), e1835 (2023).</li><li>Guo, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+simplified+dichotomic+size-exclusion+chromatography+for+isolating+extracellular+vesicles+toward+clinical+applications.">Establishment of a simplified dichotomic size-exclusion chromatography for isolating extracellular vesicles toward clinical applications.</a> J Extracell Vesicles. 10 (11), e12145 (2021).</li><li>Ahmadian, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+storage+and+freezing+protocols+for+extracellular+vesicles:+A+systematic+review.">Different storage and freezing protocols for extracellular vesicles: A systematic review.</a> Stem Cell Res Ther. 15 (1), 453 (2024).</li><li>Watanabe, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+muscle+releases+extracellular+vesicles+with+distinct+protein+and+microRNA+signatures+that+function+in+the+muscle+microenvironment.">Skeletal muscle releases extracellular vesicles with distinct protein and microRNA signatures that function in the muscle microenvironment.</a> PNAS Nexus. 1 (4), pgac173 (2022).</li><li>Magalhaes-Gama, F., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+cell-derived+extracellular+vesicles+in+peripheral+blood+and+bone+marrow+of+B-cell+acute+lymphoblastic+leukemia+pediatric+patients:+Proof-of-concept+study.">Exploring cell-derived extracellular vesicles in peripheral blood and bone marrow of B-cell acute lymphoblastic leukemia pediatric patients: Proof-of-concept study.</a> Front Immunol. 15, 1421036 (2024).</li><li>Potter, D. R., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cell-derived+extracellular+vesicles+attenuate+pulmonary+vascular+permeability+and+lung+injury+induced+by+hemorrhagic+shock+and+trauma.">Mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles attenuate pulmonary vascular permeability and lung injury induced by hemorrhagic shock and trauma.</a> J Trauma Acute Care Surg. 84 (2), 245-256 (2018).</li><li>Osteikoetxea, X., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+detergent+sensitivity+of+extracellular+vesicle+subpopulations.">Differential detergent sensitivity of extracellular vesicle subpopulations.</a> Org Biomol Chem. 13 (38), 9775-9782 (2015).</li><li>Kim, T., Hong, J. W., Lee, L. P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+methods+of+isolation+and+purification+of+extracellular+vesicles.">Efficient methods of isolation and purification of extracellular vesicles.</a> Nano Converg. 12 (1), 45 (2025).</li><li>Bracht, J. W. P., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choice+of+size-exclusion+chromatography+column+affects+recovery,+purity,+and+miRNA+cargo+analysis+of+extracellular+vesicles+from+human+plasma.">Choice of size-exclusion chromatography column affects recovery, purity, and miRNA cargo analysis of extracellular vesicles from human plasma.</a> Extracell Vesicles Circ Nucl Acids. 5 (3), 497-508 (2024).</li><li>Mo, W., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicle-mediated+bidirectional+communication+between+the+liver+and+other+organs:+Mechanistic+exploration+and+prospects+for+clinical+applications.">Extracellular vesicle-mediated bidirectional communication between the liver and other organs: Mechanistic exploration and prospects for clinical applications.</a> J Nanobiotechnology. 23 (1), 190 (2025).</li></ol>

<table><tbody><tr><td>1.5 mL 遠心管</td><td>Sarstedt</td><td>72.690.300</td><td>プロトコル全体で使用される一般的なマイクロ遠心管</td></tr><tr><td>1.5 mL 低蛋白結合管</td><td>Sarstedt</td><td>72.706.600</td><td>EVの取り扱い、SEC分画の収集、および保存に使用</td></tr><tr><td>0.2 mL PCR管</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-222-262</td><td>ポケットチューブ骨髄抽出セットアップに使用</td></tr><tr><td>16 G 針</td><td>BD</td><td>305197</td><td>0.2 mL PCR管に穴を開けるのに使用</td></tr><tr><td>30 &micro;m 細胞ストレーナー</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-098-458</td><td>骨格筋サンプルのろ過に使用</td></tr><tr><td>70% エタノール</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.11727</td><td>ピンセットの滅菌に使用</td></tr><tr><td>バイオセーフティキャビネット</td><td>NA</td><td>NA</td><td>無菌組織の取り扱いに使用</td></tr><tr><td>骨切断器具</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-001-976</td><td>大腿骨と脛骨を分離し、骨髄を露出させるために使用</td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン (BSA)</td><td>BioShop</td><td>ALB001</td><td>ウェスタンブロットブロッキングと抗体希釈に使用</td></tr><tr><td>塩化カルシウム二水和物 (CaCl2&middot;2H2O)</td><td>BioShop</td><td>CCL302</td><td>HEPESバッファの調製に使用</td></tr><tr><td>炭素被覆銅グリッド、200メッシュ</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>930342</td><td>TEMサンプルの準備に使用</td></tr><tr><td>遠心フィルター、100 kDa MWCO</td><td>MilliporeSigma</td><td>UFC810096</td><td>EV濃縮に使用</td></tr><tr><td>コラゲナーゼ D</td><td>Roche</td><td>11088858001</td><td>骨格筋の酵素消化に使用</td></tr><tr><td>クライオバイアル</td><td>Sarstedt</td><td>72.690.300</td><td>組織と骨の保存に使用</td></tr><tr><td>脱イオン水（超純水）</td><td>NA</td><td>NA</td><td>バッファの調製とTEM洗浄ステップに使用</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Roche</td><td>11284932001</td><td>骨格筋の酵素消化に使用</td></tr><tr><td>ドライアイス</td><td>NA</td><td>NA</td><td>サンプルの冷却と輸送に使用</td></tr><tr><td>エンハンスド化学発光基質</td><td>Biorad</td><td>1705061</td><td>ウェスタンブロット検出に使用</td></tr><tr><td>フィルターユニット、0.22 &micro;m</td><td>Sarstedt</td><td>83.3941.501</td><td>適用可能な場合にPBSをろ過するために使用</td></tr><tr><td>鉗子 / ピンセット</td><td>MilliporeSigma</td><td>F3892</td><td>組織の取り扱いに使用</td></tr><tr><td>グルタールアルデヒド</td><td>NA</td><td>NA</td><td>TEM固定に使用</td></tr><tr><td>グリシン</td><td>NA</td><td>NA</td><td>TEMグリッド洗浄ステップで使用</td></tr><tr><td>Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)</td><td>Gibco</td><td>14175-095</td><td>DNase I ストック調製に使用</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>BioShop</td><td>HEP001.500</td><td>HEPES-NaOH バッファ調製に使用</td></tr><tr><td>ホルシュラジッシュペルオキシダーゼ結合ストレプタビジン</td><td>Thermo Fisher</td><td>S911</td><td>ウェスタンブロット検出に使用</td></tr><tr><td>化学発光イメージングシステム</td><td>Biorad</td><td>12003153</td><td>ウェスタンブロット膜のイメージングに使用</td></tr><tr><td>KCl</td><td>BioShop</td><td>POC308</td><td>HEPESバッファの調製に使用</td></tr><tr><td>塩化マグネシウム (MgCl2)</td><td>BioShop</td><td>MAG510.500</td><td>HEPESバッファの調製に使用</td></tr><tr><td>2-メチルブタン</td><td>Thermo Fisher</td><td>78-78-4</td><td>骨格筋のスナップフリージングに使用</td></tr><tr><td>ミリグラムバランス</td><td>MilliporeSigma</td><td>Z741359</td><td>組織と骨髄の重量測定に使用</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>BioShop</td><td>SOD004.1</td><td>HEPESバッファの調製に使用</td></tr><tr><td>ナノ粒子追跡分析装置</td><td>Malvern Panalytical</td><td>NanoSight NS300</td><td>ナノサイト NS300は粒子のサイズ測定とカウントに使用</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>BioShop</td><td>SHY500.500</td><td>pH調整に使用</td></tr><tr><td>ニトロセルロース膜</td><td>BioRad</td><td>1704271</td><td>ウェスタンブロット転写に使用</td></tr><tr><td>回転ミキサー</td><td>Labnet</td><td>&nbsp;S0500</td><td>酵素消化中に使用</td></tr><tr><td>P1000 ピペット</td><td>MilliporeSigma</td><td>FA10006M-1EA</td><td>組織移送に使用</td></tr><tr><td>ピペットチップ、1 mL</td><td>Sarstedt</td><td>70.3050.275</td><td>チップは組織フラグメントの移送のために開口部を広げるようトリミング</td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水 (PBS)</td><td>Wisent</td><td>INC 811.012-FL</td><td>プロトコル全体で使用、SEC平衡化と溶出にも使用</td></tr><tr><td>ホスファターゼ阻害剤</td><td>MilliporeSigma</td><td>4906845001</td><td>ウェスタンブロット溶解液調製に使用</td></tr><tr><td>ペトリ皿</td><td>MilliporeSigma</td><td>CLS351146</td><td>骨髄の調製に使用</td></tr><tr><td>ポリアクリルアミドゲル、4&ndash;20% 勾配ステインフリー</td><td>BioRad</td><td>4561094</td><td>ウェスタンブロット分離に使用</td></tr><tr><td>プロテアーゼ阻害剤</td><td>MilliporeSigma</td><td>11697498001</td><td>ウェスタンブロット溶解液調製に使用</td></tr><tr><td>RPMI-1640 培地</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R7388-500ML</td><td>非添加; FBSや抗生物質なし</td></tr><tr><td>RIPA バッファ、10&times;</td><td>Merck</td><td>20-188</td><td>ウェスタンブロッティング用タンパク質抽出に使用</td></tr><tr><td>滅菌使い捨てスカルペル</td><td>Ultident Paragon</td><td>02-90000-10</td><td>骨格筋組織を細かく切るために使用</td></tr><tr><td>SEC カラム、オリジナル 70 nm</td><td>IZON</td><td>ICO70P</td><td>骨格筋 SEC に使用</td></tr><tr><td>SEC カラム、シングル 70 nm</td><td>IZON</td><td>ICS70P</td><td>骨髄 SEC に使用</td></tr><tr><td>アジ化ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2002</td><td>洗浄用 PBS に添加</td></tr><tr><td>ナトリウムカコジル酸バッファ</td><td>NA</td><td>NA</td><td>TEM固定バッファに使用</td></tr><tr><td>ルアースリップ使い切り注射器（針なし）</td><td>Medline</td><td>SYR101020</td><td>適用可能な場合、NTA取得中に使用</td></tr><tr><td>透過型電子顕微鏡</td><td>FEI</td><td>NA</td><td>Tecnai G2 Spirit Twin 120 kV Cryo-TEMは TEM イメージングに使用</td></tr><tr><td>Tween-20

サイズ排除クロマトグラフィーによるマウス骨格筋および骨髄からの小さな細胞外小胞の単離

Isolation of Small Extracellular Vesicles from Murine Skeletal Muscle and Bone Marrow by Size-Exclusion Chromatography

Small extracellular vesicles (sEVs) are nanosized, lipid-bound particles that mediate intercellular communication through the transfer of proteins, ...

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

出典: ワトソン、DC 他。大腸菌と他の細菌からの細胞外小胞のスケーラブルな単離と精製 J. Vis. 経験。...

サイズ排除クロマトグラフィーを用いた細菌の細胞外小胞の単離 

このビデオでは、外膜小胞または細菌由来のOMVの不均一な集団を分離する技術(サイズ排除クロマトグラフィー)を実演します。これらの小胞はナノサイズの球状構造であり、サイズ排除クロマトグラフィーによってそのサイズに基づいて大小の亜集団に分離されます。...

サイズ排除クロマトグラフィーに基づく細菌細胞外小胞の分離:グラム陰性細菌外膜小胞の不均一集団をそのサイズに基づいて分離する技術

このビデオでは、結核菌(Mtb)の培養濾液から細菌の細胞外小胞(EV)を精製するためのサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)技術を示しています。この手法では、多孔質樹脂充填カラムを使用して、EVの精製画分を取得します。多孔質粒子は、より小さなタンパク質が細孔に侵入するのを選択的に許可し、溶出を遅らせます。同時に、EVはサイズが大きいため、毛穴に入るのが排除され、最初に溶出されます。...

マイコバクテリア細胞外小胞を精製するためのサイズ排除クロマトグラフィー技術

このプロトコルは1)大人マウス腓腹筋からの第一次線維芽細胞の隔離そして文化、また2)西部のしみの分析に先行しているスクロース密度勾配と結合される差動ultrarifjugeation方法を使用してexosomesの浄化そして性格描写を示す。...

骨格筋線維芽細胞からのエクソソームの単離と特性評価

細菌性小胞は病因において重要な役割を果たし、有望なバイオテクノロジーの応用を有する。小胞の不均一性は分析と使用を複雑にします。したがって、小胞の様々なサイズを分離する簡単で再現可能な方法が必要です。ここでは、...

細菌外膜小胞ヘテロジネミティーを分析するサイズ排除クロマトグラフィー

ここでのプロトコルは、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、細胞外小胞を馴化細胞培養培地から適切に分離できることを示しています。...

馴化細胞培養培地から細胞外小胞を分離するためのサイズ排除クロマトグラフィー(英語)

このプロトコルは、ヒト臍帯由来間葉系幹細胞の小さな細胞外小胞(hUC-MSC-sEV)を、シンプルなラボスケールのベンチトップ設定で分離する方法を示しています。単離されたhUC-MSC-sEVのサイズ分布、タンパク質濃度、sEVマーカー、および形態は、それぞれナノ粒子追跡分析、BCAタンパク質アッセイ、ウェスタンブロット、および透過型電子顕微鏡によって特徴付けられます。...

ヒト間葉系幹細胞から小さな細胞外小胞を単離するための簡単なベンチトップろ過法

このプロトコルは、エアスプレーノズルのサイズ、シース液の圧力、サンプルフロー圧力、電圧、ゲイン、およびトリガーしきい値パラメータを最適化することにより、小さな細胞外小胞の迅速かつサイズ固有の分離方法を提供します。...

低分子細胞外小胞のハイスループット単離および精製のためのフローサイトメトリーソーティングパラメータの最適化(英語)

細胞外小胞は生物医学的応用に大きな期待を寄せていますが、現在の単離法は時間がかかり、臨床使用には実用的ではありません。本研究では、大量の生体液から細胞外小胞を最小限のステップで連続的に直接単離できるマイクロ流体デバイスを紹介します。...

二股A4Fマイクロ流体デバイスを用いた大量サンプルからの細胞外小胞のシングルステップ分離(英語)

このプロトコルは、機械的剥離、酵素解離、ろ過、および示差超遠心分離を通じて、げっ歯類の筋肉組織から骨格筋間質細胞外小胞(SkM-EV)を分離および精製することを目的としています。一貫性と信頼性を示しています。単離されたSkM-EVは、筋肉の恒常性と疾患に関する洞察を提供し、診断バイオマーカーや治療手段としての応用が期待できます。...

骨格筋間質細胞外小胞の酵素的単離

学ぶ サイズ排除クロマトグラフィーによるマウス骨格筋および骨髄からの高純度小細胞外小胞の単離法。差遠心分離とSECを組み合わせ、最小限の組織量で約10⁸粒子の収率を達成し、TEM・NTA・Western blottingで検証可能です。

サイズ排除クロマトグラフィーによるマウス骨格筋および骨髄からの小さな細胞外小胞の単離

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