Name: マウス脳の微小血管内皮細胞の単離と培養 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-07-17T12:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 11 s
Description: 学ぶ マウス脳微小血管内皮細胞の単離・培養法。CD31免疫選択とBSA密度勾配により高純度のBMECを得られ、血脳関門モデルとして神経血管相互作用や薬物輸送研究に応用できる。

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<ol><li>Kadry, H., Noorani, B., Cucullo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+blood-brain+barrier+overview+on+structure%2C+function%2C+impairment%2C+and+biomarkers+of+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+Barriers+CNS%22%5BJournal%5D)">A blood-brain barrier overview on structure, function, impairment, and biomarkers of integrity.</a> Fluids Barriers CNS. , (2020).</li>
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<li>Sweeney, M. D., Zhao, Z., Montagne, A., Nelson, A. R., Zlokovic, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier%3A+from+physiology+to+disease+and+back%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier: from physiology to disease and back.</a> Physiol Rev. , (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>60 mmの培養プレート</td><td>Corning</td><td>430166</td><td></td></tr><tr><td>96ウェルの培養プレート</td><td>Corning</td><td>41122107</td><td></td></tr><tr><td>酢酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>抗生物質・抗真菌薬（オプション）</td><td>Gibco</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD31</td><td>Santa Cruz&nbsp;</td><td>sc-46694</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Anti-GFAP</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-0300</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-GLUT1</td><td>Abcam</td><td>ab115730</td><td>1:200</td></tr><tr><td>Anti-Iba1</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-32725</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-mouse IgG Alexa Fluor (594染色)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11005</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-rabbit IgG Alexa Fluor&nbsp; (488染色)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11008</td><td>1:500</td></tr><tr><td>自動および血清学的ピペット</td><td>&nbsp;Oxford LP&nbsp;</td><td>&nbsp;OXL.OXL.OSP-5C</td><td></td></tr><tr><td>基底培地（コラーゲン溶液用）</td><td>Gibco (DMEM)</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン（BSA）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>コラーゲナーゼII型</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6885</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>62248</td><td>1 &micro;g/mL</td></tr><tr><td>DMEM（高グルコース）</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>EndoGRO-MV完全培地</td><td>Merck Millipore</td><td>SCME004</td><td>内皮細胞成長培地</td></tr><tr><td>Falconチューブ（15 &amp; 50 mL）</td><td>Corning&reg;</td><td>352096 / 352070</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清（FBS）</td><td>Gibco (Thermo Fisher)</td><td>16000044</td><td></td></tr><tr><td>蛍光顕微鏡</td><td>Motic</td><td>BA410</td><td></td></tr><tr><td>手袋、マスク、実験消耗品</td><td>様々なサプライヤー</td><td>&mdash;</td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン（100 U/mL）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3393</td><td></td></tr><tr><td>倒立顕微鏡</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>CKX41</td><td></td></tr><tr><td>磁気分離マグネット</td><td>EasySep&nbsp;</td><td>&nbsp;NC9284020</td><td></td></tr><tr><td>振とう器（37 &deg;C）</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>SK-0180-S</td><td></td></tr><tr><td>パラフィルム</td><td>Bemis</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>PBS（1&times;）</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>冷蔵遠心機</td><td>HITACHI</td><td>CT5RE</td><td></td></tr><tr><td>メスカルペル</td><td>Fine Science Tools</td><td>様々な</td><td></td></tr><tr><td>はさみと細かいピンセット</td><td>Fine Science Tools</td><td>様々な</td><td></td></tr><tr><td>滅菌硝化セルロース膜</td><td>BIO-RAD</td><td>1620094</td><td></td></tr><tr><td>I型コラーゲン</td><td>Corning&nbsp;</td><td>30394</td><td></td></tr></tbody></table>

マウス脳の微小血管内皮細胞の単離と培養

Isolation and Culture of Mouse Brain Microvascular Endothelial Cells

Brain microvascular endothelial cells (BMECs) are the main cellular component of the blood-brain barrier (BBB) and play a key role in regulating molecular ...

本研究では、健康状態および疾患状態における神経血管機能を調査するために、脳内皮細胞をどのように単離および培養できるかを検討します。このプロトコールは、神経発達障害および妊娠関連疾患における胎児脳内皮の研究に利用可能です。まず、生後5日目のマウス幼若個体を5匹用意します。幼若個体を安楽死させた後、ラミナーフロー生物学的安全キャビネット内で脳を回収し、滅菌済みで冷やしたPBSを含む50 mLコニカルチューブに入れます。各脳を滅菌済みニトロセルロース膜の上で慎重に転がし、髄膜を除去します。脳を冷PBSが入った100 mmプレートに移します。滅菌メスを用いて、脳幹、小脳、視床、および嗅球を除去します。髄膜を除去した大脳皮質を回収後、直ちに氷上の5 mLのPBSを含む50 mLコニカルチューブに移します。滅菌鋏を用いて、組織を機械的に解離させます。1 mLピペットを用いて、目に見える断片がなくなるまで組織をピペッティングし、均一な懸濁液を得ます。サンプルを、2 mLのコラゲナーゼ type 2溶液を含む滅菌済み15 mLコニカルチューブに移します。チューブをオービタルシェーカーに設置し、37 °C、180 rpmで2時間振盪します。懸濁液に、10% FBSを添加したDulbecco's modified Eagle medium（DMEM）を5 mL加えます。3000 gで10分間遠心分離します。上清を捨てた後、ペレットを4 mLの20% BSA含有PBSで再懸濁します。細胞を3000 gで20分間遠心分離します。パスツールピペットを用いて、ミエリンを含む上層の乳白色層を除去し、残りの上清を捨てます。ペレットを10% FBS含有DMEM 2 mLで再懸濁し、再度10分間遠心分離します。上清を捨てた後、最終的なペレットを10% FBS添加DMEM 1 mLで穏やかに再懸濁します。次に、準備した培養プレートからコーティング溶液を除去し、各ウェルを滅菌PBSで2回洗浄します。再懸濁した細胞をコーティング済みプレートに播種し、細胞が90%から100%のコンフルエンスに達するまで培養します。培養細胞をPBSで3回洗浄した後、0.5% トリプシンを1 mLプレートに加えます。37 °Cで3〜5分間インキュベートして細胞を剥離させます。トリプシンを中和させるため、10% FBSを含む調製済みの血管内皮細胞培養液を1 mL加えます。懸濁液約2 mLをマイクロ遠心チューブに移し、4 °C、220 gで10分間遠心分離し、上清を捨てます。次に、8 µLのCD31磁気ビーズを含む15 mLチューブに、1% ハンクス溶液を1 mL加えます。チューブを回旋させてビーズを再懸濁させた後、磁石の上に2分間置きます。上清を取り除き、この洗浄操作を3回繰り返します。その後、FBSを含む1% ハンクス溶

isolation-and-culture-of-mouse-brain-microvascular-endothelial-cells

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

ここで、我々は、マウス肺内皮細胞の単離と培養のためのプロトコルについて説明します。このメソッドは、メカニックと酵素肺組織の解離と同様に抗PECAM - 1とほとんどが微小血管起源の純粋な内皮細胞集団を生成する磁気ビーズへの結合抗ICAM -...

新生児マウスからの肺血管内皮細胞の単離と培養

この方法では、マウスの脳から微小血管内皮細胞を分離し不死化する方法について説明します。我々は、脳組織、消化手順、播種し、細胞の不死化の均質化から始まるステップ·バイ·ステップのプロトコルを記述します。通常、それは均質、不死化血管内皮細胞株を得るために約5週間かかります。...

として不死化マウス脳微小血管内皮細胞株の生成<em&gt; in vitroで</em&gt;血液脳関門モデル

このビデオでは、密度勾配遠心分離と酵素消化メホッドの組み合わせを使用して、ラットの脳から微小血管を分離する様子を紹介しています。単離された微小血管は、コラーゲンとフィブロネクチンマトリックスでプレコートされた培養フラスコで培養し、内皮細胞コロニーを得ることができます。...

ラット脳微小血管からの内皮細胞培養:ラット脳の微小血管から内皮細胞を単離および培養する手順

このビデオは、マウスの脳から脳周皮細胞を分離する方法を示しています。単離した細胞は、ペリサイト特異的培地で培養され、ペリサイト増殖を促進します。...

マウス脳周皮細胞の単離と培養

このビデオでは、マウスの脳実質から内皮管を分離する方法を実演しています。酵素による消化と機械的解離の組み合わせにより、このプロセスにより、内皮細胞が無傷のチューブが得られます。...

マウス実質細動脈からの脳内皮チューブの準備

脳微小血管内皮細胞(BMEC)は、血液と中枢神経系(CNS)を分離する高度に制御された障壁を形成する特定の接合タンパク質によって相互接続されています。このプロトコルで述べられているように、初代マウス脳微小血管内皮細胞の単離により、BBBの詳細なin...

初代マウス脳微小血管内皮細胞の単離

血管内皮細胞は、多くの重要な心血管疾患において重要な役割を果たしています。この記事では、特別な機器を使用せずにマウス大動脈から内皮細胞を分離および増殖する簡単な方法について説明します。私たちのプロトコルは、内皮細胞の生理病理学におけるメカニズムを特定する効果的な手段を提供します。...

マウス大動脈内皮細胞の単離および初代培養

マウスの脳の血管コンパートメントの浄化を可能にするプロトコルを記述します。単離された脳血管には、タイトジャンクションによってリンクされ、連続した基底層、周皮細胞、血管平滑筋細胞、および血管周囲星膠膜に囲まれた内皮細胞が含まれます。...

マウス脳血管の精製

血液脳関門のカバレッジを維持することは、中枢神経系の恒常性にとって重要である。このプロトコルは、血液脳関門のカバレッジを調節する基本的および病理学的プロセスを描写するためのインビトロ技術を記載する 。...

血液脳関門メッシュ様血管形成および崩壊を評価するためのインビトロアッセイ

骨格筋 (MMEC) の微小血管内皮細胞筋毛細血管の内壁の形状し、両方を規制する流体/分子と筋肉組織と血液の間 (免疫) 細胞の移行の交換。前述のように、プライマリ マウス MMEC の分離により「myovascular...

プライマリ マウス骨格筋の微小血管内皮細胞の分離

脳実質細動脈からの無傷のマウス脳内皮「チューブ」の集中的な調製は、脳血流調節を研究するために例示される。さらに、我々は、細胞内[Ca2+]および膜電位の変化を含む重要な細胞シグナル伝達経路の蛍光イメージングおよび電気生理学的測定のためのこの内皮研究モデルの実験的強みを実証する。...

マウス脳実質の動脈内皮の単離と機能解析

学ぶ マウス脳微小血管内皮細胞の単離・培養法。CD31免疫選択とBSA密度勾配により高純度のBMECを得られ、血脳関門モデルとして神経血管相互作用や薬物輸送研究に応用できる。

マウス脳の微小血管内皮細胞の単離と培養

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