Name: 単細胞および免疫蛍光解析のために雌マウス尿道上皮を単離する最適化方法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 2 s
Description: 学ぶ雌マウス尿道上皮の単離法と単細胞解析。酵素処理と機械的分離で高生存率の細胞懸濁液を調製し、フローサイトメトリー、免疫蛍光、オルガノイド培養、単細胞RNAシーケンスによる下部尿路の宿主防御メカニズム研究を支援します。

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<table><tbody><tr><td>#5 ファインフォースプヤスク</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% 中性緩衝ホルマリン</td><td>Sigma Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>10X HBSS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H4641</td><td></td></tr><tr><td>12ウェルプレート</td><td>Corning</td><td>3513</td><td></td></tr><tr><td>30ミクロンプレセパレーションフィルター</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SML0788</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SCR005</td><td></td></tr><tr><td>Adobe Illustrator</td><td>Adobe</td><td></td><td>図のパネルを作成するために</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop</td><td>Adobe</td><td></td><td>図のパネルを作成するために</td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>12634010</td><td></td></tr><tr><td>抗生物質/抗真菌薬</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5955</td><td></td></tr><tr><td>抗CD326（EpCAM）</td><td>Invitrogen</td><td>17-5791-82</td><td>フローサイトメトリー用、1:20希釈</td></tr><tr><td>抗CD45</td><td>Tonbo</td><td>35-0451-U100</td><td>フローサイトメトリー用、1:20希釈</td></tr><tr><td>抗CDH1（ウサギ）</td><td>Cell Signalling Technology</td><td>3195S</td><td>1:200希釈</td></tr><tr><td>抗F4/80</td><td>Tonbo</td><td>50-4801-U100</td><td>フローサイトメトリー用、1:20希釈</td></tr><tr><td>抗F4/80（ラット）</td><td>Invitrogen</td><td>14-4801-82</td><td>1:200希釈</td></tr><tr><td>抗ケラチン13（ウサギ）</td><td>Abcam</td><td>ab92551</td><td>1:200希釈</td></tr><tr><td>抗ケラチン4（マウス）</td><td>Abcam</td><td>ab9004</td><td>1:200希釈</td></tr><tr><td>抗ケラチン5（チキン）</td><td>Biolegend</td><td>905904</td><td>1:800希釈</td></tr><tr><td>抗ケラチン5（ウサギ）</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>71536</td><td>1:200希釈</td></tr><tr><td>抗p63（マウス）</td><td>Biocare medical</td><td>CM163A</td><td>1:200希釈</td></tr><tr><td>Axioobserver 7</td><td>Zeiss</td><td>431007-9904-000</td><td></td></tr><tr><td>B27サプリメント</td><td>Invitrogen</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン（BSA）、フラクションV</td><td>Genetix</td><td>PG-2330</td><td></td></tr><tr><td>CD-1マウス</td><td>Charles River, USA</td><td>Crl:CD1(ICR)</td><td></td></tr><tr><td>Cultrex BME</td><td>R&amp;D systems</td><td>3445-005-01</td><td></td></tr><tr><td>DAPI溶液</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5942</td><td></td></tr><tr><td>D-グルコース</td><td>Qualigens</td><td>Q15405</td><td></td></tr><tr><td>ジメチル硫酸（DMSO）</td><td>Himedia</td><td>MB058</td><td></td></tr><tr><td>二水素酸化ナトリウム（Na2HPO4）</td><td>Qualigens</td><td>Q15825</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma Aldrich</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>ドニキー抗チキンIgG（H+L）（AF488）</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>703-545-155</td><td>1:500希釈</td></tr><tr><td>ドニキー抗マウスIgG（H+L）（AF488）</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>715-545-151</td><td>1:500希釈</td></tr><tr><td>ドニキー抗マウスIgG（H+L）（AF594）</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>715-585-151</td><td>1:500希釈</td></tr><tr><td>ドニキー抗ウサギIgG（H+L）（AF594）</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>711-585-152</td><td>1:500希釈</td></tr><tr><td>ドニキー抗ウサギIgG（H+L）（AF647）</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>711-605-152</td><td>1:500希釈</td></tr><tr><td>ドニキー抗ラットIgG（H+L）（AF647）</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>712-605-153</td><td>1:500希釈</td></tr><tr><td>ドニキー抗ラットIgG（H+L）（AF594）</td><td>Jackson Immunoresearch&nbsp;</td><td>712-585-153</td><td>1:500希釈</td></tr><tr><td>EGF</td><td>PeproTech</td><td>AF-315-09</td><td></td></tr><tr><td>エオシン</td><td>Himedia</td><td>GRM938</td><td></td></tr><tr><td>エタノール</td><td>Supelco</td><td>1.00983</td><td></td></tr><tr><td>Eukittマウンティングメディア</td><td>Sigma Aldrich</td><td>3989</td><td></td></tr><tr><td>FGF10</td><td>PeproTech</td><td>450-61</td><td></td></tr><tr><td>フィルターキャップ仕分けチューブ</td><td>&nbsp;Falcon/Corning</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>Ghost Dye&trade; Violet 450</td><td>Tonbo biosciences</td><td>13-0863-T100</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Invitrogen</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>無水グリセロール</td><td>Merck</td><td>DA1P692899</td><td></td></tr><tr><td>ヘマトキシリン</td><td>Polysciences</td><td>24243</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>ホース血清</td><td>Gibco</td><td>26050088</td><td></td></tr><tr><td>Kaluza分析</td><td>Beckman Coulter</td><td>Kaluza Analysis 2.4</td><td>フローサイトメトリーデータの分析</td></tr><tr><td>塩化マグネシウム（MgCl2）</td><td>Qualigens</td><td>Q15535</td><td></td></tr><tr><td>マウスTruStain FcX（抗マウスCD16/32）</td><td>Biolegend</td><td>101320</td><td></td></tr><tr><td>N-アセチルシステイン</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>ニコチンアミド</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N0636</td><td></td></tr><tr><td>Noggin</td><td>PeproTech</td><td>AF-250-38</td><td></td></tr><tr><td>n-プロピルガレート</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3130</td><td></td></tr><tr><td>パラフィンワックス</td><td>Qualigens</td><td>Q19215</td><td></td></tr><tr><td>塩化カリウム（KCl）</td><td>Qualigens</td><td>Q13305</td><td></td></tr><tr><td>二水素酸カリウム（KH2PO4）</td><td>Qualigens</td><td>19465</td><td></td></tr><tr><td>プリモシン</td><td>Invivogen</td><td>ant-pm-05</td><td></td></tr><tr><td>RBC溶解バッファー（10X）</td><td>Tonbo biosciences</td><td>TNB-4300-L100</td><td></td></tr><tr><td>レチノイン酸</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R2625</td><td></td></tr><tr><td>Rocki（Y-27632）</td><td>Cell Signalling Technology</td><td>13624S</td><td></td></tr><tr><td>R-spondin 1</td><td>

単細胞および免疫蛍光解析のために雌マウス尿道上皮を単離する最適化方法

An Optimized Method To Isolate Female Mouse Urethral Epithelium For Single-Cell And Immunofluorescence Analysis

The urethra, lined by epithelial cells, serves as the conduit for urine outflow from the body. The epithelial lining of the urethra comprises distinct ...

an-optimized-method-to-isolate-female-mouse-urethral-epithelium-for

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このビデオでは、経尿道的にマウスの尿路感染症を誘発し、結果として感染症の程度を定量化する方法を紹介します。...

マウス尿路感染症の経尿道的誘導

ここで、我々は、効率的な高スループットを記述...

ハイスループットその場で</em胎児マウス下部尿生殖路のmRNAの発現パターンを特徴づける>ハイブリダイゼーション法

マウス生殖管からリンパ球を分離するための効率的な方法が記載されている。この方法では、効率的な分離を可能にするために酵素消化し、パーコール勾配分離を利用しています。この手法は、他の種で使用するためにもに適応可能である...

マウス生殖管粘膜からのリンパ球の単離

出典: Yang, E. ほか尿路感染症のマウスモデルから生成された単一細胞内細菌群集の単離で、単一細胞解析のための単一細胞解析。 J. Vis. Exp. (2019年)このビデオは、感染したマウス膀胱から細胞内細菌群集を含む単一上皮細胞を口腔マイクロピペッティングを用いて手動分離する方法を示し、尿路感染症モデルにおける生存可能な宿主関連 大腸菌...

細胞内細菌群集を含むマウス膀胱上皮細胞の単離

このビデオでは、雄マウスモデルから泌尿生殖器系またはUGSを解剖する手順を説明します。このUGSは、前立腺を分離し、前立腺癌の発症におけるその役割を研究するために、生体外でさらに解剖されます。...

マウス泌尿生殖器系からの前立腺の抽出:雄マウスの他の泌尿器系および生殖器系器官から前立腺を分離する技術

マウスの尿道カテーテル法の確立されたモデルなど尿路感染症、膀胱の病理の研究をできますが、女性でのみ実行することができます。今回紹介した男性の尿道注入の新しいモデルは、男女間の厳密な臨床的および疫学的違いでマークされたエリアの研究を有効になります。...

小動物モデルにおける尿路感染症: 雌雄マウスの尿道カテーテル

このプロトコルでは、単純な尿路感染症のマウスモデルからの単一、感染して膀胱の上皮細胞を分離する方法について説明します。...

下流の単一細胞分析のため尿路感染症のマウスモデルから生成された単一細胞内細菌群集の分離

本プロトコルは、半日本円上皮周期の特定段階を表す成体マウス半細管の断面微小切除法、およびその中の細胞タイプ、および後にスカッシュ製剤および無傷の管状セグメントの免疫染色を記述する。...

下流免疫染色解析のためのマウス半離層上皮周期の特定段階のトランスイルミネーション支援解離

RNA完全性を維持しながら個々のセグメントの収集を可能にするマウス卵管の微小解剖のための方法が提示される。加えて、非酵素的卵管細胞解離手順が記載されている。この方法は、機能的に異なる卵管セグメントおよび解離した卵管細胞のその後の遺伝子およびタンパク質分析に適している。...

マウス卵管の微小解剖と解離:個体セグメントの同定と単一細胞単離

このプロトコルは、遺伝子発現および組織学的分析のためのマウス子宮内膜上皮オルガノイドを確立するための方法論を説明しています。...

マウス子宮からの3D子宮内膜オルガノイドの確立

このプロトコルは、ヒト卵管上皮細胞を単離するための1日法を説明しています。単離された上皮細胞は、2次元(2D)培養でプレーティングするか、シングルセル懸濁液に解離して、フローサイトメトリーやシングルセルRNAシーケンシングなどのダウンストリーム実験に利用できます。...

ヒト卵管上皮をシングルセル解析で効率的に抽出する方法

学ぶ雌マウス尿道上皮の単離法と単細胞解析。酵素処理と機械的分離で高生存率の細胞懸濁液を調製し、フローサイトメトリー、免疫蛍光、オルガノイド培養、単細胞RNAシーケンスによる下部尿路の宿主防御メカニズム研究を支援します。

単細胞および免疫蛍光解析のために雌マウス尿道上皮を単離する最適化方法

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