Name: 大 腸菌 からのヒドロフォビンSC16の組換え生産と精製、および蛍光アッセイを用いた自己組織化のモニタリング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 33 s
Description: 学ぼう、大腸菌でヒドロフォビンSC16を組換え生産し、蛍光アッセイで自己組織化をモニタリングする方法。高収率精製と機能解析のプロトコルを解説します。

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<table><tbody><tr><td>2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid (MES)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>145224-94-8</td><td>自己集合アッセイのバッファー成分</td></tr><tr><td>5 mL 丸底ポリスチレンチューブ</td><td>Falcon</td><td>352054</td><td>低スループットの自己集合アッセイに使用</td></tr><tr><td>96ウェル黒色ポリスチレンマイクロプレート</td><td>Grenier</td><td>655076</td><td>マイクロプレートリーダーでの蛍光測定に使用</td></tr><tr><td>アクリルアミド/ビス-アクリルアミド (29:1) 溶液 (40%)</td><td>BioShop</td><td>ACR004.500</td><td>SDS-PAGEゲルの準備に使用</td></tr><tr><td>アガー</td><td>BioShop</td><td>AGR002.1</td><td>アンピシリン耐性LBプレートの作成に使用</td></tr><tr><td>アンピシリン</td><td>IBI Scientific</td><td>IB02040</td><td>LB-アガープレートで使用する抗生物質</td></tr><tr><td>バッフル付き2.8 L Fernbachフラスコ</td><td>Fisher Scientific</td><td>955239</td><td>大容量細菌培養の成長に使用</td></tr><tr><td>β-メルカプトエタノール</td><td>TCI Chemicals</td><td>60-24-2</td><td>SDS-PAGEサンプル準備に使用する還元剤</td></tr><tr><td>カラム（1.5 cm径重力カラム）</td><td>Bio-Rad</td><td>7371522</td><td>ニッケルアフィニティ精製に使用</td></tr><tr><td>透析チューブ（3500 kDa MWCO）</td><td>BioDesign</td><td>D302</td><td>精製中のバッファー交換に使用</td></tr><tr><td>発光フィルター</td><td>Edmund Optics</td><td>84080</td><td>ThTアッセイに使用（494 nm、バンドパス 20 nm）</td></tr><tr><td>励起フィルター</td><td>Edmund Optics</td><td>67012</td><td>ThTアッセイに使用（438 nm、バンドパス 24 nm）</td></tr><tr><td>蛍光マイクロプレートリーダー</td><td>Tecan</td><td>Infinite F200 Pro</td><td>ThT蛍光強度の測定に使用</td></tr><tr><td>ホットプレート</td><td>Lab Fish</td><td>HS5C</td><td>温度監視付き水浴設定に使用</td></tr><tr><td>塩酸 (HCl)</td><td>Fisher Chemical</td><td>A144-212</td><td>バッファーのpH調整に使用</td></tr><tr><td>イミダゾール</td><td>TCI Chemicals</td><td>288-32-4</td><td>IMAC精製（洗浄および溶出バッファー）に使用</td></tr><tr><td>イソプロピルβ-D-1-チオガラクトピラノシド (IPTG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>367-93-1</td><td>E. coliにおけるタンパク質発現を誘導</td></tr><tr><td>LBブロス（Lennox）</td><td>BioShop</td><td>LBL405.5</td><td>細菌培養の成長培地</td></tr><tr><td>低速冷蔵遠心機</td><td>Beckman Coulter</td><td>360291</td><td>保存前に細胞をペレット化するのに使用</td></tr><tr><td>ニッケルNTAアガロースビーズ</td><td>GoldBio</td><td>H-350-50</td><td>Hisタグ付きタンパク質のアフィニティ精製に使用する樹脂</td></tr><tr><td>SC16プラスミド</td><td>BioBasic</td><td>N/A</td><td>H-GB1-SC16融合タンパク質をエンコードするカスタムDNA構築</td></tr><tr><td>SHuffle T7 Express コンピテントE. coli</td><td>New England Biolabs</td><td>C3029J</td><td>組換えタンパク質発現に使用するホスト株</td></tr><tr><td>塩化ナトリウム (NaCl)</td><td>BioShop</td><td>SOD001.5</td><td>バッファー成分およびイオン強度調整剤</td></tr><tr><td>水酸化ナトリウム (NaOH)</td><td>Fisher Chemical</td><td>SS255-1</td><td>バッファーのpH調整に使用</td></tr><tr><td>リン酸ナトリウム</td><td>BioShop</td><td>SPD579.1</td><td>pH維持用のバッファー成分</td></tr><tr><td>分光光度計</td><td>Pharmacia Biotech</td><td>5096</td><td>SC16の定量に使用</td></tr><tr><td>チオフラビンT（ThT）</td><td>Acros Organics</td><td>2390-54-7</td><td>タンパク質自己集合のモニタリングに使用する蛍光染料</td></tr><tr><td>トロンビンプロテアーゼ</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>04-04-9002</td><td>H-GB1-SC16融合タンパク質の切断に使用</td></tr><tr><td>トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン（トリス）</td><td>BioShop</td><td>TRS001.5</td><td>精製およびアッセイ溶液で使用するバッファー</td></tr><tr><td>高速冷蔵遠心機</td><td>Sorvall</td><td>46915</td><td>細胞溶解後の溶解液の澄清に使用</td></tr><tr><td>SDS-PAGEセットアップ</td><td>Bio-Rad</td><td>1658000EDU</td><td>SDS-PAGEゲルの準備および実行に使用</td></tr></tbody></table>

大 腸菌 からのヒドロフォビンsc16の組換え生産と精製、および蛍光アッセイを用いた自己組織化のモニタリング

Recombinant Production And Purification of Hydrophobin SC16 From Escherichia coli And Monitoring of Its Self-Assembly Using Fluorescence Assays

大 腸菌 からのヒドロフォビンSC16の組換え生産と精製、および蛍光アッセイを用いた自己組織化のモニタリング

Hydrophobins are small amphipathic proteins that self-assemble at hydrophobic&#8211;hydrophilic interfaces to form stable waterproof coatings over fungal ...

recombinant-production-purification-hydrophobin-sc16-from-escherichia

Research

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

ポストヒトゲノム時代において、ネイティブコンフォメーションにおける組換えタンパク質の可用性は、構造、機能および治療の研究開発に不可欠である。ここでは、テストと組換えタンパク質のさまざまなを生成するために使用することができるヒト胚性腎臓293T細胞における大規模タンパク質発現系を記述します。...

ヒト細胞から分泌タンパク質の生産のための便利で一般式プラットフォーム

定量的スクリーニング、ハイスループット発現および小規模大腸菌培養物からの融合タンパク質の精製、分析のためのプロトコルを説明し、ジスルフィドに富む動物毒タンパク質標的の発現に適用される。...

で産生された組換えジスルフィド豊富な毒タンパク質に印加される高スループット定量的発現スクリーニングおよび精製<em&gt; E.大腸菌の</em

エラスチン様ポリペプチドは、組換えタンパク質の精製からの薬物送達に至るまでのアプリケーションとの刺激応答性のバイオポリマーである。このプロトコルは、クロマトグラフィーへの単純な代替手段としての下限臨界溶液温度の相転移挙動を使用して大腸菌のエラスチン様ポリペプチドおよびそれらのペプチドやタンパク質融合物の精製および特性について説明します。...

からのペプチドおよびタンパク質との組換えエラスチン様ポリペプチドおよびその融合の非クロマトグラフィー精製<em&gt;エシェリヒア·コリ</em

哺乳類システムによる組換えタンパク質の発現は、構造生物学のためのタンパク質複合体を生成するための魅力的な方法になりつつあります。ここでは、浮遊増殖した哺乳類細胞を使用して構造研究のためのタンパク質複合体を精製する、シンプルでありながら高効率な発現システムを紹介します。...

HEK 293F懸濁細胞における構造生物学のための組換えタンパク質の発現：小説とアクセアプローチ

緑色蛍光タンパク質の融合に基づく大腸菌における組換え膜タンパク質の発現についてスクリーニングする効率的なアプローチが提示される。...

膜タンパク質の緑色蛍光タンパク質ベースの発現スクリーニングで<em&gt;エシェリヒア·コリ</em

私たちは、細胞内タンパク質の折り畳みに固有の品質管理メカニズムを持つ大腸菌ツイン-アルギニン転座経路を使用して、抗体フラグメントの結合親和性と細胞質溶解性について抗体フラグメントのライブラリーを同時にスクリーニングする方法を提供します。...

抗体フラグメントのライブラリーをスクリーニングするための細菌インナー膜を表示

このプロトコルの詳細手順、コスト、および大腸菌を生成に必要な装置・細胞抽出液をベースし、4 日間以内の in...

大腸菌の無細胞タンパク質合成のベース: 堅牢な柔軟性とアクセス可能なプラットフォーム技術のためのプロトコル

本稿では、S.セレビシエ細胞とHEK293T細胞の両方でタンパク質自己集合を定量するFRETベースのフローサイトメトリープロトコルについて説明する。...

フローサイトメトリーによる生体内におけるタンパク質自己集合体の検出と特性特性

ここでは、ワクチン開発に使用する自己組織化タンパク質ナノ粒子(SAPN)の精製、再折りたたみ、および特性評価について詳しく説明します。...

トリマーエピトーププレゼンテーションを必要とするワクチンに対する大腸菌の自己組織化タンパク質ナノ粒子の産生

有機溶媒および水性溶媒の界面では、カスタマイズされた両親媒性エラスチン様タンパク質は、環境パラメータによって引き起こされる小胞、繊維、コアセルベートなどの複雑な上分子構造に組み立てられます。記載された組立プロトコルは、調整可能な特性を有するタンパク質膜ベースのコンパートメント(PMBC)を生成し、様々な貨物のカプセル化を可能にする。...

エブラスチン様タンパク質の定義された上膜構造とカーゴカプセル化への組み立て

このプロトコルは、組換えヒトSLFN14リボヌクレアーゼの産生および質量光度測定による化学量論解析を記述しています。<br...

組換えヒトSLFN14リボヌクレアーゼの急速生成と質量光度による化学量論解析

学ぼう、大腸菌でヒドロフォビンSC16を組換え生産し、蛍光アッセイで自己組織化をモニタリングする方法。高収率精製と機能解析のプロトコルを解説します。

大腸菌からのヒドロフォビンSC16の組換え生産と精製、および蛍光アッセイを用いた自己組織化のモニタリング

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