Name: 髄膜リンパ質評価のための統合プロトコル:大胸椎注射、リンパ節画像診断、髄膜郭清、全マウント染色 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-29T14:05:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: 学ぶ マウス髄膜リンパ管の機能と形態評価法。蛍光トレーサー大胸椎注射、リンパ節生体イメージング、髄膜郭清、全マウント染色を統合し、約3時間で完了。中枢神経系恒常性と神経疾患メカニズム研究に応用可能。

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	<li>Louveau, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+features+of+central+nervous+system+lymphatic+vessels.">Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels.</a> Nature. 523, 337-341 (2015).</li><li>Aspelund, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dural+lymphatic+vascular+system+that+drains+brain+interstitial+fluid+and+macromolecules.">A dural lymphatic vascular system that drains brain interstitial fluid and macromolecules.</a> J Exp Med. 212, 991-999 (2015).</li><li>Sandrone, S., Moreno-Zambrano, D., Kipnis, J., Van Gijn, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+(delayed)+history+of+the+brain+lymphatic+system.">A (delayed) history of the brain lymphatic system.</a> Nat Med. 25, 538-540 (2019).</li><li>Da Mesquita, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+aspects+of+meningeal+lymphatics+in+ageing+and+alzheimer's+disease.">Functional aspects of meningeal lymphatics in ageing and alzheimer's disease.</a> Nature. 560, 185-191 (2018).</li><li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+lymphatic+vessels+regulate+brain+tumor+drainage+and+immunity.">Meningeal lymphatic vessels regulate brain tumor drainage and immunity.</a> Cell Res. 30, 229-243 (2020).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+lymphatic+vessels+mediate+neurotropic+viral+drainage+from+the+central+nervous+system.">Meningeal lymphatic vessels mediate neurotropic viral drainage from the central nervous system.</a> Nat Neurosci. 25, 577-587 (2022).</li><li>Rustenhoven, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+alterations+in+meningeal+immunity+drive+impaired+cns+lymphatic+drainage.">Age-related alterations in meningeal immunity drive impaired cns lymphatic drainage.</a> J Exp Med. 220, (2023).</li><li>Kodama, T., Hatakeyama, Y., Kato, S., Mori, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+fluid+drainage+pathways+in+lymphatic+vessels+and+lymph+nodes+using+a+mouse+model+to+test+a+lymphatic+drug+delivery+system.">Visualization of fluid drainage pathways in lymphatic vessels and lymph nodes using a mouse model to test a lymphatic drug delivery system.</a> Biomed Opt Express. 6, 124-134 (2015).</li><li>Banerjee, R., Knauer, L. A., Yang, Y. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+in+vivo+and+in+vitro+study+of+lymphatic+valve+formation+driven+by+shear+stress+signaling+pathway.">Protocol for in vivo and in vitro study of lymphatic valve formation driven by shear stress signaling pathway.</a> STAR Protoc. 4, 102141 (2023).</li><li>Akwii, R. G., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+dermal+lymphatic+endothelial+cell+isolation.">Murine dermal lymphatic endothelial cell isolation.</a> J Vis Exp. (197), e65393 (2023).</li><li>Xavier, A. L. R., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannula+implantation+into+the+cisterna+magna+of+rodents.">Cannula implantation into the cisterna magna of rodents.</a> J Vis Exp. (135), e57378 (2018).</li><li>Hsieh, Y. T., Chen, S. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+and+analysis+of+neuromuscular+junctions+using+immunofluorescence.">Visualization and analysis of neuromuscular junctions using immunofluorescence.</a> Bio Protoc. 14, e5076 (2024).</li><li>Banerji, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyve-1,+a+new+homologue+of+the+cd44+glycoprotein,+is+a+lymph-specific+receptor+for+hyaluronan.">Lyve-1, a new homologue of the cd44 glycoprotein, is a lymph-specific receptor for hyaluronan.</a> J Cell Biol. 144, 789-801 (1999).</li><li>Da Mesquita, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meningeal+lymphatics+affect+microglia+responses+and+anti-abeta+immunotherapy.">Meningeal lymphatics affect microglia responses and anti-abeta immunotherapy.</a> Nature. 593, 255-260 (2021).</li><li>Betsholtz, C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+and+controversies+in+meningeal+biology.">Advances and controversies in meningeal biology.</a> Nat Neurosci. 27, 2056-2072 (2024).</li><li>Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+lymphatic+efflux+limits+cerebrospinal+fluid+flow+to+the+brain.">Rapid lymphatic efflux limits cerebrospinal fluid flow to the brain.</a> Acta Neuropathol. 137, 151-165 (2019).</li><li>Hablitz, L. M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+glymphatic+influx+is+correlated+with+high+eeg+delta+power+and+low+heart+rate+in+mice+under+anesthesia.">Increased glymphatic influx is correlated with high eeg delta power and low heart rate in mice under anesthesia.</a> Sci Adv. 5, eaav5447 (2019).</li><li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+body+posture+on+brain+glymphatic+transport.">The effect of body posture on brain glymphatic transport.</a> J Neurosci. 35, 11034-11044 (2015).</li></ol>

<table><tbody><tr><td>ACSF (Artificial Cerebrospinal Fluid)</td><td>Tocris&nbsp;&nbsp;</td><td>Cat# 3525</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 donkey anti-rat IgG (1:1000 dilution)</td><td>Invitrogen</td><td>Cat# A-21208</td><td></td></tr><tr><td>Antifade Mounting Medium</td><td>Beyotime</td><td>Cat# P0126</td><td></td></tr><tr><td>Blunt-tipped forceps</td><td>RWD Life Science</td><td>Cat# F12011-10</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Beyotime</td><td>Cat# ST023</td><td></td></tr><tr><td>Coverslips</td><td>CITOTEST</td><td>Cat# 80312-3161</td><td></td></tr><tr><td>Curved sharp forceps</td><td>RWD Life Science</td><td>Cat# F11003-11</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat# D9542</td><td></td></tr><tr><td>Depilatory cream</td><td>Veet</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Dish-10 cm</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Cat# 150464</td><td></td></tr><tr><td>Disposable intravenous (IV) infusion needle</td><td>Zhejiang Kindly Medical Devices&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol-75%</td><td>Sinopharm Chemical Reagent&nbsp;</td><td>Cat# 80176961</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Excell</td><td>Cat# FSD500</td><td></td></tr><tr><td>Filter-0.22 &micro;m</td><td>Merck Millipore&nbsp;</td><td>Cat# SLGPR33RB</td><td></td></tr><tr><td>Glass slides</td><td>CITOTEST</td><td>Cat# 80340-3610</td><td></td></tr><tr><td>Isoamyl alcohol</td><td>Sinopharm Chemical Reagent&nbsp;</td><td>Cat# 10003218</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Spectrum</td><td>PerkinElmer</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Micro forceps</td><td>Shinva Medical Instrument&nbsp;</td><td>Cat# ZD372RB&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Micro scissors</td><td>Shinva Medical Instrument&nbsp;</td><td>Cat# ZO13056R</td><td></td></tr><tr><td>Microinjection needle (25 &micro;L)</td><td>Shanghai Gaoge Industry &amp; Trade&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Microinjection pump</td><td>Voyage Power</td><td>Cat# QHZS-001A</td><td></td></tr><tr><td>Mouse: C57BL/6 wild-type, 8 weeks old, male&nbsp;</td><td>Cavens</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Needle-30G</td><td>Zhejiang Kindly Medical Devices&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Normal Saline</td><td>Beyotime</td><td>Cat# ST341</td><td></td></tr><tr><td>Ovalbumin, Alexa Fluor&trade; 647 Conjugate</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Cat# O34784</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde Fix Solution-4%</td><td>Beyotime</td><td>Cat# P0099</td><td></td></tr><tr><td>PE-10 tubing</td><td>Shanghai Qiujing Biochemical Reagent and Instrument</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline (1x PBS)</td><td>Beyotime</td><td>Cat# ST447</td><td></td></tr><tr><td>Rat anti-LYVE-1 (1:200 dilution)</td><td>Santa Cruz</td><td>Cat# sc-65647</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscope</td><td>Jonec</td><td>Cat# JSZ6</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaxic frame</td><td>RWD Life Science</td><td>Cat# 68030</td><td></td></tr><tr><td>Straight scissors</td><td>RWD Life Science</td><td>Cat# S12007-10</td><td></td></tr><tr><td>Syringe-1-mL&nbsp;</td><td>Zhejiang Kindly Medical Devices&nbsp;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Tissue Adhesive I</td><td>3M Vetbond</td><td>Cat# 1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Tribromoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat# T48402</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>Cat# T8787</td><td></td></tr><tr><td>VS120 High-throughput fluorescence imaging system</td><td>Olympus</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

髄膜リンパ質評価のための統合プロトコル:大胸椎注射、リンパ節画像診断、髄膜郭清、全マウント染色

Integrated Protocol for Assessing Meningeal Lymphatics: Cisterna Magna Injection, Lymph Node Imaging, Meningeal Dissection, and Whole-Mount Staining

Meningeal lymphatic vessels (MLVs) have emerged as critical regulators of central nervous system (CNS) homeostasis, and MLVs dysfunction has been ...

integrated-protocol-for-assessing-meningeal-lymphatics-cisterna-magna

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

ここチステルナ マグナ カニュレーション (CMc)、脳脊髄液 (CSF) にトレーサー、基板、シグナル分子を提供する低侵襲の方法を実行するプロトコルについて述べる。別の画像診断装置と組み合わせると、CMc が glymphatic システム、CSF のダイナミクス評価、様々...

齧歯動物の槽注入カニューレ

我々は、頭蓋骨に安定させることができる先端に曲がった針を採用するインタセラセナーナル注射を記述し、したがって、基礎となるパレンチマへの損傷のリスクを排除する。このアプローチは、レプトメニンゲ細胞の遺伝的運命マッピングおよび操作や脳脊髄液の動きを追跡するために使用することができます。...

インタビセナーリナーリ注射によるレプトメニンゲ細胞改変の誘導

組織クリアリングと光シート蛍光顕微鏡(LSFM)を組み合わせて、脳脊髄液(CSF)および脊髄硬膜外液を収集するリンパ管およびリンパ節(LN)の3次元および細胞分解能画像を得るプロトコルが提示される。...

iDISCO+およびライトシート蛍光顕微鏡による椎体リンパ管系および排水の3次元画像化

この論文では、脳、脊髄、髄膜など、中枢神経系内の常在免疫細胞および末梢由来の免疫細胞を調べるための2つの最適化されたプロトコルを紹介します。これらの各プロトコルは、定常状態および炎症状態下でこれらのコンパートメントを占める細胞の機能と組成を確認するのに役立ちます。...

免疫細胞の下流分析のための中枢神経系組織および関連する髄膜の単離

実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)は、多発性硬化症の動物モデルとして機能します。この記事では、EAEにおける脊髄の炎症、脱髄、および軸索損傷をスコアリングするためのアプローチについて説明します。さらに、マウス血清中の可溶性ニューロフィラメント光レベルを定量化する方法が提示され、生きたマウスの軸索損傷の評価が容易になります。...

実験的自己免疫性脳脊髄炎における中枢神経系の炎症、脱髄、および軸索損傷のスコアリング

In vivoでの脳血流調節を研究するためのCisterna Magnaナノインジェクションとレーザースペックルコントラストイメージングアッセイの組み合わせ

このプロトコルは、マウスの軟髄膜転移を強力に誘導し、外傷および頭蓋外腫瘍の負担を軽減する経皮的穿刺経路を通じて腫瘍細胞を大槽に注入する方法を説明しています。...

マウスにおける軟髄膜転移研究のための低侵襲槽マグナ注射モデル

ここでは、ラットの深部頸部リンパ節またはその求心性リンパ管を顔面後静脈と吻合する手順を明確に定義し、他の変数の影響を最小限に抑え、手術ベースの研究の実施を標準化するためのプロトコルを提示します。...

ラットモデルにおける頸部深部リンパ静脈吻合のための外科的プロトコル:リンパ節およびリンパ管吻合

この実験プロトコルは、頭部からのリンパ管排出を直接的かつ定量的に評価できる深部頸管リンパ管カニューレッドモデルを示しています。このモデルは、中枢神経系(CNS)由来の溶質、免疫細胞集団、そしてCNS標的治療薬の分布とクリアランスの詳細な解析を促進します。...

頭部および脳からのリンパ輸送を評価する頸部リンパ管カニューレドラットモデル

このプロトコルは、インドシアニングリーン(ICG)近赤外線画像と超音波を組み合わせて、マウスの足底ICGクリアランスおよび膝窩リンパ節の腫大を定量化することで、骨折後のリンパ排液を評価します。...

骨折後のICG近赤外線イメージングおよび超音波を用いたリンパ管排膿の評価

学ぶ マウス髄膜リンパ管の機能と形態評価法。蛍光トレーサー大胸椎注射、リンパ節生体イメージング、髄膜郭清、全マウント染色を統合し、約3時間で完了。中枢神経系恒常性と神経疾患メカニズム研究に応用可能。

髄膜リンパ質評価のための統合プロトコル:大胸椎注射、リンパ節画像診断、髄膜郭清、全マウント染色

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