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	<li>Gao H, Gao S, Kan G, Valentovich LN, An Y. Research progress of base editing and prime editing tools based on the CRISPR/Cas system. Mol Ther Nucleic Acids. 2025;36.</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>1M Tris-HCl, pH 8.0</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15568025</td><td></td></tr><tr><td>Agarose&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>R0491&nbsp;</td><td>Agarose UltraPure 16500500 ThermoFisher 500g</td></tr><tr><td>AMPure XP SPRI Beads&nbsp;</td><td>Beckman Coulter&nbsp;</td><td>B23317&nbsp;</td><td>A63880, AMPure XP Beads for DNA Cleanup, 5 mL, Beckman Coulter</td></tr><tr><td>ATP (100 mM)&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>N0450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CEPT Cocktail&nbsp;</td><td>Bio-Techne / Tocris&nbsp;</td><td>7200&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CleanCap AG Reagent&nbsp;</td><td>TriLink Biotechnologies&nbsp;</td><td>N-7113&nbsp;</td><td>CleanCap AG 3&prime; OMe CleanScript IVT Kit, 125 x 20 &micro;L rxns,&nbsp;</td></tr><tr><td>CTP (100 mM)&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>N0450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Custom DNA Primers&nbsp;</td><td>Integrated DNA Technologies&nbsp;</td><td>Custom&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DNA Loading Dye&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>B7024&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (Dulbecco&rsquo;s Phosphate Buffered Saline)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>14190-144&nbsp;</td><td>D8537-100ML</td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s Modified Eagle Medium (DMEM)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>11965-092&nbsp;</td><td>DMEM High Glucose [4,500 mg/L] with [4.0 mM] L-Glutamine and [110 mg/L] Sodium Pyruvate, 500 mL</td></tr><tr><td>Gel Extraction Kit&nbsp;</td><td>Qiagen&nbsp;</td><td>28704&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>GTP (100 mM)&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>N0450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Illumina Indexing Primers&nbsp;</td><td>Illumina&nbsp;</td><td>FC-131-2001&nbsp;</td><td>10uM stocks</td></tr><tr><td>Illumina MiSeq Sequencer&nbsp;</td><td>Illumina&nbsp;</td><td>SY-410-1003&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lithium Chloride RNA Precipitation Solution&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>AM9480&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lonza 4D Nucleofector System&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>AAF-1002X&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ssRNA Ladder NEB</td><td>NEB</td><td>N0362S</td><td>5ul/ reaction</td></tr><tr><td>MiSeq Reagent Kit v3 (300 cycles)&nbsp;</td><td>Illumina&nbsp;</td><td>MS-102-3002&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>N1-Methyl-Pseudouridine-5&prime;-Triphosphate&nbsp;</td><td>TriLink Biotechnologies&nbsp;</td><td>N-1081&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NEBNext Ultra II Q5 Master Mix&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>M0544&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Nuclease-Free Water&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>AM9937&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NucleoCounter NC Slide A8&nbsp;</td><td>ChemoMetec&nbsp;</td><td>941-0008&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NucleoCounter NC-3000&nbsp;</td><td>ChemoMetec&nbsp;</td><td>NC-3000&nbsp;</td><td>10ul of cell solution and 0.4167 &mu;L of DAPI solution&nbsp;</td></tr><tr><td>Solution 15, Hoechst 33342, 1 mL 910-3015 Chemometec</td><td>Chemometec</td><td>910-3013&nbsp;</td><td>500 &mu;g/ml ~ 0.9 mM ~ 0.05%</td></tr><tr><td>Nucleocuvette Strips&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>V4XP-3032&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>P3 Primary Cell Nucleofector Solution&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>V4XP-3032&nbsp;</td><td>1 x 0.675 mL P3 Primary Cell Nucleofector&reg; Solution</td></tr><tr><td>Phusion High-Fidelity DNA Polymerase&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>F530L&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>EO0491&nbsp;</td><td>Quantity: 1mL, >600 U/mL (~20 mg/mL)</td></tr><tr><td>Q5 High-Fidelity DNA Polymerase&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>M0491&nbsp;</td><td>2,000 units/ml 100 units&nbsp;</td></tr><tr><td>QIAquick PCR Purification Kit&nbsp;</td><td>Qiagen&nbsp;</td><td>28104&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Qubit dsDNA High Sensitivity Assay Kit&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Q33230&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Qubit RNA Broad Range Assay Kit&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Q10211&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Qubit&trade; Assay Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Q32856</td><td></td></tr><tr><td>RNA Gel Loading Dye (2x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R0641</td><td>5ul/ reaction</td></tr><tr><td>RNA Purification Kit&nbsp;</td><td>Zymo Research&nbsp;</td><td>R1017&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RNase Away&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>1236B62&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>SDS, 10% solution</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>15553027</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Gold Nucleic Acid Gel Stain</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S11494</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Safe DNA Gel Stain&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>S33102&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Synthetic sgRNA / pegRNA&nbsp;</td><td>Synthego / IDT&nbsp;</td><td>Custom&nbsp;</td><td>2ug&nbsp;</td></tr><tr><td>HiScribe T7 High Yield RNA Synthesis Kit, 250 reactions</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>E2040L</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>12604013&nbsp;</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>TE buffer (Tris-EDTA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>&nbsp;AM9849</td><td>TE, pH 8.0, RNase-free Thermo</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.25%)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>25200056&nbsp;</td><td>1X&nbsp;</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS), Premium, 500 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A5670701</td><td></td></tr><tr><td>mTSER PLUS&nbsp;</td><td>STEM cell Technologies</td><td># 100-0276</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin Mixture 10,000 ug/mL, 100 mL, 4-pack</td><td>Quality Biological</td><td>120-095-721&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

一次哺乳類細胞におけるエディタrnaのエレクトロポレーションによるゲノム編集

Genome Editing in Primary Mammalian Cells via Electroporation of Editor RNA

一次哺乳類細胞におけるエディタRNAのエレクトロポレーションによるゲノム編集

CRISPR editors including nucleases, base editors, and prime editors can efficiently correct disease-causing genetic variants or disrupt target genes. ...

genome-editing-primary-mammalian-cells-via-electroporation-editor

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このようなジンクフィンガーヌクレアーゼ（ZFNを）および転写活性化因子のようなエフェクターヌクレアーゼ（TALENS）などのデザイナーヌクレアーゼは非相同エンド入社（NHEJ）と相同組換え（HR）経路の両方をトリガすることによって、マウスの着床前胚のゲノムを変更するために使用することができます。これらの進歩は、正確な遺伝子改変マウスの迅速な生成を可能にする。...

デザイナーヌクレアーゼを用いてマウスゲノムエンジニアリング

組立 Cas9 を利用した複雑なリボ核タンパク質 (RNP)...

強化されたゲノム細胞や生物の多様な Cas9 リボ核蛋白質と編集

CRISPR Cas は植物や動物の複雑なゲノムをエンジニア リングする強力な技術です。ここでは、我々 は異なる Ca 酵素を使用して人間のゲノムを効率的に編集するためのプロトコルを詳しく説明します。我々...

CRISPR Cas を用いた哺乳類細胞におけるゲノム編集

ここに提示される、チューブエレクトロポレーションを用いて哺乳動物細胞における効率的なCRISPR/Cas9リボヌクレオタンパク質媒介遺伝子編集のためのプロトコルである。...

CRISPR/Cas9リボヌクレオタンパク質媒介精密遺伝子編集チューブエレクトロポレーション

このプロトコルは、初代マウス肝細胞を肝臓から単離し、CRISPR-Cas9をリボヌクレオタンパク質およびmRNAとしてエレクトロポレーションして、肝臓の遺伝性代謝疾患に関連する治療標的遺伝子を破壊する技術について記載している。記載された方法は、エレクトロポレーション後に高い生存率および高レベルの遺伝子改変をもたらす。...

新たに単離された初代マウス肝細胞へのCas9リボヌクレオタンパク質およびmRNAのエレクトロポレーション媒介送達

接合子のCRISPRエレクトロポレーションによるマウスの効率的なゲノム編集

エレクトロポレーションCas9-sgRNA複合体を用いた初代骨髄由来マクロファージの高効率遺伝子破壊

このプロトコルは、遺伝子修正されたラットモデルを生成するための最適化されたアプローチを提示します。アデノ随伴ウイルス(AAV)はDNA修復テンプレートの送達に使用され、エレクトロポレーションはCRISPR-Cas9試薬の送達に使用され、2細胞胚のゲノム編集プロセスを完了します。...

アデノ随伴ウイルス(AAV)と2細胞胚エレクトロポレーションを用いたラット胚のCRISPR-Cas9ゲノム編集

このプロトコールは、プラスミドDNAトランスフェクションおよびmRNAヌクレオフェクションを使用したヒト細胞株におけるClustered Regularly Interspaced Short Palindromic...

プラスミドDNAトランスフェクションとmRNAヌクレオフェクションデリバリーを用いたヒト細胞におけるCRISPRエピゲノム編集

卵管核酸送達 による 改良ゲノム編集 (I-GONAD) 法の効率は、ドナーの女性から接合子を採取し、偽妊娠中の女性に移植する必要がある従来のマイクロインジェクションに匹敵します。このプロトコルは、CRISPR/Cas9 誘発変異を染色体 6 上の ROSA26...

ノックアウトマウス生成のための卵管核酸送達に基づくin vivoエレクトロポレーション技術によるゲノム編集の改善

Johns Hopkins University School of Medicine.  RNAとしてゲノム編集者を送達することは、一次哺乳類の細胞や細胞株のゲノム改変において特に強力な手段です。このプロトコルの目的は、ゲノム編集者をmRNAとして一次哺乳類の細胞および細胞株に届け、その後、Illuminaの標的シーケンスと解析を行って編集結果を定量化することです。

一次哺乳類細胞におけるエディタRNAのエレクトロポレーションによるゲノム編集

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