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<ol>
	<li>Vogel, J. W. et al. Spread of pathological tau proteins through communicating neurons in human Alzheimer&#8217;s disease. Nat Commun 11, 2612 (2020).</li>
	<li>Weber, A. J. et al. Tau seeds induce neurofibrillary tangle formation across brain regions via individual-specific connectivity. Neuron S0896627326001649 doi:10.1016/j.neuron.2026.03.001&#160;(2026).</li>
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	<li>Ferrer, I. et al. Involvement of Oligodendrocytes in Tau Seeding and Spreading in Tauopathies. Front. Aging Neurosci. 11, 112 (2019).</li>
	<li>Hopp, S. C. et al. The role of microglia in processing and spreading of bioactive tau seeds in Alzheimer&#8217;s disease. J Neuroinflammation 15, 269 (2018).</li>
	<li>Asai, H. et al. Depletion of microglia and inhibition of exosome synthesis halt tau propagation. Nat Neurosci 18, 1584-1593 (2015).</li>
	<li>Dickson, J. R. et al. Alzheimer disease-associated tau post-translational modification mimics impact tau propagation and uptake. Journal of Neuropathology &#38; Experimental Neurology 84, 459-470 (2025).</li>
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	<li>Evans, L. D. et al. Extracellular Monomeric and Aggregated Tau Efficiently Enter Human Neurons through Overlapping but Distinct Pathways. Cell Reports 22, 3612-3624 (2018).</li>
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	<li>Boland, B. et al. Autophagy induction and autophagosome clearance in neurons: relationship to autophagic pathology in Alzheimer&#8217;s disease. J Neurosci 28, 6926-6937 (2008).</li>
	<li>Mandrekar, S. et al. Microglia Mediate the Clearance of Soluble A&#946; through Fluid Phase Macropinocytosis. J. Neurosci. 29, 4252-4262 (2009).</li>
	<li>Oh-hashi, K., Furuta, E., Fujimura, K., &#38; Hirata, Y. Application of a novel HiBiT peptide tag for monitoring ATF4 protein expression in Neuro2a cells. Biochemistry and Biophysics Reports. 12, 40-45 (2017).</li>
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	<li>Boursier, M. E. et al. The luminescent HiBiT peptide enables selective quantitation of G protein&#8211;coupled receptor ligand engagement and internalization in living cells. Journal of Biological Chemistry 295, 5124-5135 (2020).</li>
	<li>Gibson, D. G. et al. Enzymatic assembly of DNA molecules up to several hundred kilobases. Nat Methods 6, 343-345 (2009).</li>
	<li>Shultz, A. et al. Extracellular tau clearance is governed by its aggregation state and independent of microglial activation by LPS and IFN-&#947;. Neurobiology of Disease 215, 107058 (2025).</li>
	<li>Rauch, J. N. et al. LRP1 is a master regulator of tau uptake and spread. Nature 580, 381-385 (2020).</li>
	<li>Rauch, J. N. et al. Tau Internalization is Regulated by 6-O Sulfation on Heparan Sulfate Proteoglycans (HSPGs). Sci Rep 8, 6382 (2018).</li>
	<li>Shultz, A., Mena, D., Roy, J. L., Nulman, J., &#38; Rauch, J. N. Protocol for the removal of bound endotoxin from tau protein produced in Escherichia coli. STAR Protocols. 6, 104177 (2025).</li>
	<li>Smith, P. K. et al. Measurement of protein using bicinchoninic acid. Analytical Biochemistry 150, 76-85 (1985).</li>
	<li>Bradford, M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry. 72, 248&#8211;254 (1976).</li>
	<li>Dr&#228;ger, N. M. et al. A CRISPRi/a platform in human iPSC-derived microglia uncovers regulators of disease states. Nat Neurosci 25, 1149-1162 (2022).</li>
	<li>Elias, R. D. et al. Cathepsin C&#8211;Catalyzed Ligation Generates Intralysosomal Amyloid Fibrils from Dipeptide Esters. Preprint at https://doi.org/10.64898/2025.12.23.696283 (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Accutase</td><td>Thermo Scientific</td><td>A1110501</td><td></td></tr><tr><td>Conical Sterile Polypropylene Centrifuge Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-268</td><td></td></tr><tr><td>Corning Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix, Phenol Red-free, LDEV-free</td><td>Corning</td><td>356231</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, HEPES</td><td>Thermo Scientific</td><td>11330057</td><td></td></tr><tr><td>Doxycycline</td><td>Clontech</td><td>631311</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermo Scientific</td><td>14-190-250</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Thermo Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Graphing Software</td><td>GraphPad Prism (or similar)</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Human GM-CSF</td><td>Thermo Scientific</td><td>300-03</td><td></td></tr><tr><td>KnockOut DMEM</td><td>Thermo Scientific</td><td>10829018</td><td></td></tr><tr><td>Luminescent Plate Reader</td><td>SpectraMax i3x (or similar) - Molecular Devices</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-682-002</td><td></td></tr><tr><td>Microplate, 96 Well, PS, Half-area, White</td><td>Greiner</td><td>675075</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR Plus</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>100-0276</td><td></td></tr><tr><td>Nano-Glo HiBiT Lytic Detection System</td><td>Promega</td><td>N3030</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysine hydrobromide&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>ICN15017750</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human IL-34</td><td>Thermo Scientific</td><td>200-34</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human M-CSF</td><td>Thermo Scientific</td><td>300-25</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human TGF-β1</td><td>Thermo Scientific</td><td>100-21C</td><td></td></tr><tr><td>Surface Treated Sterile Tissue Culture Plates</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012927</td><td></td></tr><tr><td>Tau-HiBiT protein</td><td>In house</td><td>n/a</td><td>Tau protein with a VSGWRLFKKIS peptide tag</td></tr><tr><td>Trypsin Inhibitor</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9128</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Thermo Scientific</td><td>5-200-072</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632 dihydrochloride</td><td>Bio-techne</td><td>1254</td><td></td></tr></tbody></table>

ミクログリアにおけるtauクリアランスの時間的解析測定のためのスプリットルシフェラーゼ補完アッセイ

A Split-Luciferase Complementation Assay for Temporally Resolved Measurement of Tau Clearance in Microglia

ミクログリアにおけるTauクリアランスの時間的解析測定のためのスプリットルシフェラーゼ補完アッセイ

As the resident immune cells of the central nervous system, microglia are central regulators of brain homeostasis and key mediators of neurodegenerative ...

a-split-luciferase-complementation-assay-for-temporally-resolved

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

このビデオは、生物学的サンプルから単離されたタンパク質凝集体の播種活性を検出するための蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)フローサイトメトリーアッセイを示しています。タウレポータータンパク質を発現する哺乳類細胞を、タウシードを含むリポソーム形質導入複合体とインキュベートします。これらのシードはレポータータンパク質の凝集を媒介し、フローサイトメーターでFRET陽性シグナルを生成します。...

タウシード誘導レポータータンパク質凝集を検出するためのFRETフローサイトメトリー技術

このビデオでは、pH感受性蛍光標識タウ凝集体を用いてマウスミクログリアによるタウの取り込みを定量化する細胞ベースのアッセイを紹介しています。これを蛍光活性化セルソーティングで分析し、定量的評価を行っています。...

ミクログリアによるタウタンパク質の取り込みを評価するための細胞ベースのアッセイ

タンパク質凝集体の細胞間移動、またはプロテオパシーシードは、神経変性疾患の病理進行の根底にある可能性があります。ここでは、組換えサンプルまたは生物学的サンプルからの播種活性を特異的かつ高感度に検出することを可能にする新しいFRETフローサイトメトリーアッセイについて説明します。...

FRETフローサイトメトリーでProteopathic播種活動の高感度検出

ここでは、トニックおよび酵素結合微小電極アレイ（MEA）を使用して、in vivoで相性の細胞外グルタミン酸変化を測定の空間的及び時間的に正確な方法のセットアップ、ソフトウェアナビゲーション、およびデータ分析を記載しています。...

アルツハイマー病のマウスモデルにおけるトニックと相性グルタミン酸を測定するための酵素ベースのバイオセンサーを使用して

我々 は正常に 2 つの基質特異的 γ-セクレターゼ アッセイを生成されます。ここに提示両方のセルベースのアッセイは、ホタル ルシフェラーゼ レポーターのアウトプットを介して γ...

Γ セクレターゼによるアミロイド前駆体タンパク質と細胞を用いたルシフェラーゼ レポーター アッセイ プラットフォーム ノッチ胸の谷間の定量的測定

ここより反タウ抗体の作用のメカニズムを特徴付けるため治験ツールの作成目的とミクログリアによるタウ摂取量を定量的に評価する細胞に基づく試金を記述します。...

タウの抗体を介したミクログリアによってクリアランスを勉強するセルベースのアッセイ

このプロトコルは、ヒトの神経細胞培養が変異型ヒトタウのためのコーディングをコードするレンチを用いて形質導入される手順を詳述する。形質導入培養物は、タウ凝集体および関連する病理を表示する。...

ヒトニューロンのレンチウイルス媒介性形質導入を用いたタウ凝集を研究するための in Vitro モデル

タウは、細胞質に存在する神経タンパク質であり、そこで微小管を結合し、核の中で、アルツハイマー病関連遺伝子の変調を含む非伝統的な機能を発揮する。ここでは、細胞質タウからの干渉を排除しながら核タウの機能を調べる方法について述べる。...

疾患関連遺伝子の発現を調べるツールとしてのタウ小細胞局在の変調

ここでは、初代海馬げっ歯類ニューロンのトランスフェクションと生細胞共焦点イメージングを組み合わせて、軸索輸送に対する病理学的タンパク質誘発性の影響を解析し、これらの影響を媒介する機構経路を特定する方法を示します。...

生細胞イメージングを使用して、初代海馬ニューロンの軸索輸送に対する病理学的タンパク質の影響を測定する

本論文は、スピニングディスク共焦点顕微鏡を用いて網膜におけるミクリアの運動性とシナプス後点との接触を可視化・定量化する方法を示します。...

病変マウス網膜におけるミクログリアの動態およびシナプスとの相互作用のライブイメージングおよび特徴付け

University of Massachusetts Amherst.  マイクロプレートを用いた発光システムを用いて、ヒト誘導多能性幹細胞(iPSC)由来のミクログリアにおける細胞外タウのクリアランスを測定する、感度が高く時間分解可能な定量的プラットフォームを記述します。このアプローチにより、マイクロウェル形式でのタウ劣化速度論の感度検出が可能となり、さまざまな実験条件下?...

ミクログリアにおけるTauクリアランスの時間的解析測定のためのスプリットルシフェラーゼ補完アッセイ

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