Name: キイロショウジョウバエの幼虫中枢神経系の解剖 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: 学ぶキイロショウジョウバエの幼虫中枢神経系の解剖法。神経発生研究において、DrosophilaのCNSを損傷なく取り出す技術を習得し、タンパク質発現解析や神経回路の構造・機能研究に応用できます。

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<ol><li>キューティクルに接続されている中枢神経系を残し、第3齢幼虫を解剖。 1.5 mlチューブ内の場所。 </li><li>振盪しながら40分間、2％ホルムアルデヒドを含むPBS（1X）に修正。 、5〜10解剖CNS用250ulを使用してください。 </li><li>ホルムアルデヒドを取り外して、簡単にPBS + 0.1％トリトンX - 100（PBST）で3回洗浄する。組織の損失を避けるために、細かくプルパスツールピペットを使用してください。 </li><li>非特異的タンパク質結合部位をブロックし、PBSTで組織1から8時間インキュベートすることにより細胞膜を透過性+ 4で揺れを5％BSA、℃を</li><li> 4℃で一晩PBST +5％BSAロッキングで希釈した一次抗体でインキュベートする。最適な抗体の希釈には、異なる抗体ごとに異なります。 </li><li> 4として2時間30分洗浄℃に続いてPBSTで3倍のリンス</li><li> PBSTで希釈した二次抗体でインキュベート+ 4で揺れ1〜3時間、5％BSA℃を4として2時間30分洗浄℃に続いてPBSTで3倍のリンス二次は光に敏感な化合物に共役である場合、アルミ箔で管を包む。 </li><li>さらに組織を解剖（必要に応じて）とスライド上にマウント。 </li></ol>

<ol>
	<li>Lin, D. M., Goodman, C. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopic+and+increased+expression+of+fasciclin+II+alters+motoneuron+growth+cone+guidance.">Ectopic and increased expression of fasciclin II alters motoneuron growth cone guidance.</a> Neuron. 13, 507-523 (1994).</li><li>Park, Y., Fujioka, M., Kobayashi, M., Jaynes, J., Datta, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=even+skipped+is+required+to+produce+a+trans-acting+signal+for+larval+neuroblast+proliferation+that+can+be+mimicked+by+ecdysone.+Development+128.">even skipped is required to produce a trans-acting signal for larval neuroblast proliferation that can be mimicked by ecdysone. Development 128.</a> , 1899-1909 (2001).</li></ol>

著者に開示すべき事項はありません。

このビデオでは、三齢ショウジョウバエの幼虫からCNSを分析する方法を示しています。解剖後、CNSは、標準の免疫組織化学のプロトコールを用いて染色することができます。現在、多くのまだそれは情報を格納して送信する方法成体神経系はだけでなく、どのように生成されるかについては不明です。開発ショウジョウバエ幼虫の中枢神経系の研究は、神経系の配線や機能の知識を強化していくべき。 ショウジョウバエの幼虫は、このような環境の手がかりへの応答としてstereotpyed行動、の数を示す。どのようにこれらの行動は、学習し、神経系に格納されていますか？幼虫の発育中の神経系の研究は、この質問に答えるのに役立ちます。 ショウジョウバエの開発のこの段階で、生物は蛹化時に発生する膨大な形態学的変化を受けるように準備を進めている。この時間の間に、神経筋システムの大規模な改造は、クロールウジから大人のフライにorgansim遷移として発生します。それは、ニューロンが開発のこの段階で変更すると動作が同じタイプの高等動物の神経細胞で観察できるかどうかを判断する興味深いものになる。

<table><tbody><tr><td>ピンセット</td><td>先端細型</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>9ウェル時計皿</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>プラスチック製ペトリ皿</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

キイロショウジョウバエの幼虫中枢神経系の解剖

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

ショウジョウバエの幼虫の中枢神経系（CNS）は、複雑でほとんどわかっていない。 CNSを調査する一つの方法は様々な小説やマーカータンパク質の発現を調べるために免疫組織化学を使用することです。タフなキューティクルが体腔内に侵入から抗体を妨げるため、全体の幼虫の染色は、非現実的です。これらの組織を染色するためには、固定と染色の前に動物を解剖することが必要である。この記事では、中枢神経系を損傷することなく、ショウジョウバエの幼虫を解剖する方法を示します。細かいピンセットで半分に幼虫を引き裂くことによって開始し、CNSを公開するために、キューティクル&quot;インサイドアウト&quot;をオンにします。解剖が注意深く行われている場合、CNSがキューティクルに接続されたままになります。我々は通常、固定と染色ステップを通して表皮に接続されている中枢神経系を維持、そして唯一の完全なガラススライド上にサンプルをマウントする直前に、キューティクルからCNSを削除します。我々はまた、イブ、中枢神経系における神経細胞のサブセットに発現する転写因子で染色された幼虫の中枢神経系のいくつかの代表画像を示す。資料では、この方法の実用的な使用方法と発生する可能性がある潜在的な問題のいくつかの議論で締めくくります。

この記事では、三齢ショウジョウバエの幼虫から中枢神経系を解明する方法を示します。

ショウジョウバエ幼虫の中枢神経系（CNS）は複雑であり、十分に解明されていません。CNSを調査する一つの方法は、免疫組織化学を用いて...

ネイサン・ファーです。プリンストン大学の大学院生です。それでは、線虫を見つけ、PBSが入ったディッシュに移します。このように見えます。これを半分に引き裂くと、中身がすべて飛び出します。ここでは、クチクラと内部構造がまとまった状態で、確実に裏返しになり、かつ中枢神経系（CNS）がまだ付着していることを確認しています。はい。ここにあります。ここです。どちらかと言うと、私の右のピンセットで見えている方です。2つの異なる葉があり、さらにそこから主根のように下方へ伸びているのがCNS（中枢神経系）です。暗色の口鉤（こうこう）とその他のクチクラの右側に位置しています。このようにCNSを分離しますか？はい、お願いします。取り外すことができます。これは上から見た状態です。そのため、2つの葉と、CNS自体が見えています。では、なぜこの実験を行うのでしょうか。私たちは、幼虫の神経系におけるタンパク質の発現を調べることに注目しています。そのため、最も有効な方法は、幼虫の組織を解剖することです。また、組織全体では抗体がクチクラを透過するのが困難であるため、まず幼虫のCNS（中枢神経系）を解剖し、得られた組織を用いて目的のタンパク質染色の解析を行います。なぜこの操作を行うのか、具体的にどのような理由があるのでしょうか。分析において何に関心があるかによって異なります。私が研究しているタンパク質は発生過程を通じて発現しており、タンパク質の局在がどのように変化するか、またどのような細胞タイプがこのタンパク質を発現しているかを確認したいと考えています。そのため、発生過程全体にわたるタイムコースを得たいと考えています。この実験における具体的な問題点は何でしょうか。まず述べたように、組織を解剖しなければならないことが問題の一つです。そのため、少なくとも初期段階においては、幼虫を安定して保持し、慎重に切り分け、反転法を行うための技術的な習熟が必要となります。CNSを露出させるには、先端の細いピンセットが必要です。ピンセットの先端が十分に細くない場合、指ではなくミトンをはめて作業しているような感覚になり、非常に困難になります。そのため、最初は手技を習得するのに少し苦労しますが、一度覚えればそれほど難しくはありません。また、染色はそれほど難しいものではありません。標準的な抗体染色です。ただし、組織が非常に小さい場合があるため、チューブ内で溶液をピペッティングする際に組織を紛失しないよう注意する必要があります。

dissection-of-larval-cns-in-drosophila-melanogaster

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JoVE Journal

Biology

生物学

このプロトコルは、分析する方法を示しています...

ショウジョウバエ幼虫NMJの解剖

キイロショウジョウバエの幼虫は、幼虫の分節神経内軸索輸送のメカニズムを調べるために理想的なモデルシステムを提供しています。この手順を使用して、様々な変異を有する第3齢幼虫は、野生型の幼虫と比較することができます。...

3の幼虫分節神経の可視化 RD齢ショウジョウバエ幼虫準備

我々は、Gal80発現パターンを決定するために組織特異的なFLPを可能にする、フリッパーゼ誘発性横切るGal80/Gal4弾圧（F​​INGR）メソッドを説明します。どこGal4のとFLPのオーバーラップは、Gal4の発現がオンになっています（Gal80アウト反転）またはオフ（Gal80がに反転）。...

エンハンサートラップフリッパーゼの幼虫における発現と成人のマッピングとその応用ショウジョウバエ CNS

このビデオでは、成体のショウジョウバエの脳を解剖し、分離する方法を説明しています。これは、キューティクル、目、気管組織によって隠されてしまう臓器を視覚化するために必要な手順です。この例のプロトコールは、ショウジョウバエの神経生物学における免疫染色およびイメージング法に使用できる高品質の調製物をもたらす詳細なデモンストレーションを示しています。...

ショウジョウバエ成人の脳解剖:ハエの神経生物学の方法

このビデオは、ショウジョウバエの幼虫からの脳外植片の解剖と取り付けを示しています。眼椎間板に付着した中枢神経系(CNS)を幼虫から抽出し、生理食塩水中のスライドガラスにマウントします。...

ショウジョウバエ幼虫の脳外植片の解剖と取り付け

中枢神経系の再生および修復を調査するために、ショウジョウバエの幼虫腹神経索を用いた傷害のパラダイムが記載されている。意図的に開発されたソフトウェアと遺伝との定量的な分析と組み合わせタイムラプスおよび固定標本でレーザー走査共焦点顕微鏡法、続いて刺すことは中枢神経系の再生および修復の分子メカニズムを解明するために使用されます。...

中枢神経系の修復を調査するために傷害パラダイム<em&gt;ショウジョウバエ</em

このプロトコルは、無傷の幼虫の脳のコンテキストで生細胞イメージングを行うために使用合理化された方法を説明します。ライブセルイメージングのアプローチは、一貫して、以前に見落とされたメカニズムを暴く、非対称神経幹細胞分裂の研究だけでなく、他の神経と発達過程のための非常に貴重である。...

のライブイメージング<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;幼虫の神経芽細胞

このプロトコルは、郭清と大人のショウジョウバエの染色について説明します脳の組織。具体的には、このプロトコルでは、神経の開発の多くの側面の基礎となる原則を明らかに正確に使用することができます例の神経細胞サブセットとしてショウジョウバエのきのこ体と光受容ニューロンの使用を強調表示します。...

郭清ときのこ体の免疫蛍光染色と大人のショウジョウバエ脳光受容器ニューロン

このプロトコルは、コスト効率的かつ便利な神経蛋白質の遺伝の突然変異の薬理学的エージェントのテストを有効にするショウジョウバエ中枢神経系の降下の電気的活動を記録する方法をについて説明しますや未踏の生理学的経路の役割。...

第三令キイロショウジョウバエの中枢神経活動の電気生理学的記録

このプロトコルは、イメージングのために幼虫および成虫の ショウジョウバエ...

視葉可視化のためのショ ウジョウバエ の幼虫および成虫の脳の解剖、免疫組織化学、およびマウント

本稿では,ショウ ジョウバエ・メラノガスター 第3齢幼虫から生きた外植片脳を作製,解剖,マウント,画像化し,生理条件下での細胞内・細胞内動態を観察するワークフローについて述べる.

ショウジョウバエメラノガスター第3齢幼虫脳の生細胞イメージング

学ぶキイロショウジョウバエの幼虫中枢神経系の解剖法。神経発生研究において、DrosophilaのCNSを損傷なく取り出す技術を習得し、タンパク質発現解析や神経回路の構造・機能研究に応用できます。

キイロショウジョウバエの幼虫中枢神経系の解剖

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