Name: バキュロウイルスによるチョウ目幼虫の経口感染するためのプロトコル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-09-03T23:29:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: 学ぶバキュロウイルスによるチョウ目幼虫の経口感染法。液滴給養バイオアッセイと餌プラグ法を用いて殺虫効力を評価する手法を解説。農業害虫管理や遺伝子組み換えウイルス開発に有用です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

をご覧ください<a href="http://www.springerprotocols.com/Abstract/doi/10.1007/978-1-59745-457-5_18">シュプリンガープロトコルを</a> insecidicalエージェントと、このアッセイで使用されている経口感染手法としてのエンジニアリングバキュロウイルスの詳細については。

著者らに開示すべき事項はありません。

バキュロウイルスによるチョウ目幼虫の経口感染するためのプロトコル

Protocols for Oral Infection of Lepidopteran Larvae with Baculovirus

バキュロウイルスは、広く蛋白質の発現ベクターとして、害虫防除剤としても使用されています。このビデオでは、鱗翅目の幼虫が液滴の栄養と食事プラグインベースのバイオアッセイによる多面体に感染することができる方法を示しています。この付属のシュプリンガープロトコルのセクションでは、殺虫剤としてのバキュロウイルスの使用のための賛否両論の議論、および改良された殺虫効力のためのバキュロウイルスの遺伝的強化の進展を含む殺虫剤、などのバキュロウイルスのバキュロウイルスのライフサイクルと使用の概要を説明します。

このビデオでは、我々は、殺虫効率を決定するために、バキュロウイルスによる鱗翅目幼虫の経口感染の手法を示します。

バキュロウイルスは、タンパク質発現ベクターとして、また害虫駆除剤として幅広く利用されています。本ビデオでは、鱗翅目（りんしもく）の幼虫をどのように……

Vaoウイルスは、タンパク質発現のために昆虫細胞株と組み合わせて使用されるDNAベクターとして一般的に利用されています。しかし、このウイルスが致死的な結果を伴いながら昆虫に効率よく感染するという事実は、優れた殺虫剤としても機能することを意味します。例えばブラジルでは、野生型のbaloウイルスが、ベルベット豆アワタガの防除を目的に毎年100万ヘクタール以上の大豆作物に散布されています。殺虫効率を高めるため、baloウイルスは、昆虫の血液（hemolymph）内で活性を持つ昆虫特異的毒素をコードする遺伝子を用いて遺伝子工学的に改変されています。このビデオでは、殺虫 efficacy を分析するために、鱗翅目幼虫にバキュロウイルスを経口感染させる方法を実演します。こんにちは、アイオワ州立大学眼科学科のボニグ研究室の（名前）です。そして、同じくボニグ研究室のウェンディ・スパークスです。本日は、鱗翅目幼虫へのバキュロウイルス感染に関する2つの手順をご紹介します。まず、液滴給餌バイオアッセイを用いて新生幼虫に感染させる方法を説明します。次に、血液添加飼料バイオアッセイを用いて中後期齢の幼虫に感染させる方法を説明します。それでは始めましょう。液滴給餌バイオアッセイは、アバカビルの致死量およびBaloウイルス感染幼虫の生存期間の決定に使用できます。本アッセイでは、一般的に初期齢または新生幼虫が使用されます。開始前に、適切な飼料を入れた飼料カップが手元にあることを確認してください。また、適切なウイルス希釈液を準備し、体積比で4%の濃度になるように緑色の食用色素を加えてください。致死的なウイルス濃度を決定するために、希釈液は1%から99%の範囲の死亡率を示す必要があります。適切なウイルス濃度の範囲を決定するために、予備的なバイオアッセイが必要な場合があります。ポリヘドラの沈殿を防ぐためにチューブをボルテックスした後、60 millimeterのペトリ皿にウイルス溶液の小さな液滴で2つの同心円を描いてください。使用するウイルスの各濃度について、陰性対照として模擬感染（mock infection）も設定することを忘れないでください。次に処理を行います。滅菌済みの絵筆を用いて、25～30匹の新生幼魚を同心円の中心に移動させます。ディッシュに蓋をし、幼魚が脱出しないようパラフィルムで密封します。処理間のコンタミネーションを防ぐため、ウイルス種ごとの転移にはそれぞれ異なる筆を使用するのが理想的です。幼虫が溶液を摂取できるよう、シャーレを室温で10～15分間静置します。摂食した幼虫は、緑色の食用色素の転移により前腸が緑色に染まっていることで識別できます。摂食した幼虫のみを、餌を入れた1オンスのプラスチックカップに1匹ずつ転移させます。幼虫を移したあと、カップに蓋をし、感染後24時間は28 °Cでインキュベートします。死滅した幼虫が入っているカップは取り除いてください。これらの早期死亡は、取り扱い時の損傷によるものであると考えられます。このバイオアッセイを用いて致死量を決定する場合、擬似感染させた幼虫および生存しているウイルス処理幼虫が化蛹したか、あるいは化蛹のために土に潜り始めるまで、2〜3日ごとに幼虫を確認する必要があります。ウイルスに感染した幼虫は餌の表面に留まり、数日後に死亡します。死死した幼虫は時に縮小し、黒色に変化します。感染により死亡した幼虫は、実質的にポリヘドラの袋となり、完全に溶解します。この時点で物理的に刺激を与え、各処理区における幼虫の死亡率を記録してください。致死濃度バイオアッセイは、異なる機会に3回または4回繰り返して実施してください。各ウイルス処理および対照処理について、投与量あたり30個体を使用してください。lc 50値、95%信頼区間、および適切な統計量を算出するために、poloやSASなどの適切なプロビット分析プログラムを使用してください。この液滴給餌アッセイは、ST 50生存時間の値を決定するためにも使用できます。この場合、幼虫の死亡率を4〜8時間ごとにスコアリングし、より頻繁に観察を行います。死亡率が高い場合は、ウイルスのlc 99用量を用いて生存時間バイオアッセイを実施します。中央生存時間および95%信頼限界は、S-PLUSまたはSASプログラムを用い、カプラン・マイヤー法によって算出します。Harangがドロップレット給餌バイオアッセイについて説明しましたので、次にダイエットプラグバイオアッセイについて説明します。ダイエットプラグバイオアッセイでは、致死量またはLD 50を決定するために、既知の用量のウイルスで処理したダイエットプラグを中〜後齢の幼虫に給餌します。このアッセイを行う前日に、カップから餌を取り除き、幼虫を一晩絶食させてください。このステップにより、幼虫がウイルスを消費する速度が高まります。翌日、接種済みの餌を約2立方ミリメートルの小さな立方体に切り分けて準備してください。餌の立方体が小さすぎると、乾燥してしまいます。餌のキューブが大きすぎると、幼虫が一晩でキューブ全体を消費できなくなります。ここで、各餌キューブに2～1 µLの核多面体懸濁液を添加します。この懸濁液には、体積比4%の食用色素が含まれています。懸濁液を餌に5〜15分間浸透させます。陰性対照として、模擬ウイルス処理した餌キューブも忘れずに準備してください。次に、各カップの各4齢幼虫に餌キューブを1つずつ転移させます。その後、カップを28 °Cのインキュベーターに一晩入れ、翌日、飼育用キューブを完全に食べきらなかった幼虫はすべて廃棄します。次に、残った幼虫がいる各カップに大きな飼育用キューブを1つずつ加えます。擬似感染させた幼虫およびウイルス感染して生存した幼虫が、十分に摂食するか、または蛹化し始めるまで、必要に応じて追加の飼育餌を補充しながら、28 °Cで幼虫を維持します。この時点で、死亡した昆虫と生存した昆虫の数を記録します。ここでは、昆虫にBaculovirusを感染させる2つの方法、すなわち出血法（feeding biopsy）と食事プラク法（diet plaque biopsy）について説明します。この手順を行う際は、Baculovirusで死滅した幼虫の死骸は通常脆弱であり、容易に破裂してウイルスが放出される可能性があることに注意してください。作業表面を滅菌し、汚染された手袋や使い捨て材料を適切に廃棄して、コンタミネーションを防止してください。以上です。ご視聴ありがとうございました。皆様の実験の成功をお祈りいたします。

protocols-for-oral-infection-of-lepidopteran-larvae-with-baculovirus

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このビデオでは、我々は、殺虫効率を決定するために、バキュロウイルスによる鱗翅目幼虫の感染させるために使用される2つのmicroapplicatorの手法を示します。...

バキュロウイルスによるチョウ目幼虫のMicroapplicatorアシスト感染するためのプロトコル

ここで説明する方法は、血体腔に昆虫病原細菌の直接注入を利用...

の飼育とインジェクション<em&gt;たばこスズメガ</em細菌毒性を評価するための&gt;幼虫

大きいワックス蛾の幼虫の経口およびイントラhaemocolic感染...

昆虫<em&gt;ハチノスツヅリガ</em&gt;細菌性病因を調査するための強力な感染モデルとして

このビデオは、オオウガであるGalleria mellonellaの幼虫にMycobacterium bovis感染モデルを確立する方法を示しています。Mycobacterium bovis...

昆虫幼虫における細菌感染モデルを確立する技術

地中海のショウジョウバエ(メドフライ)Ceratitis...

世界的な農業害虫昆虫における胚のマイクロインジェクションを介して、核酸の送達、<em&gt;チチュウカイミバエ</em

このプロトコルを記述する外国蛋白質を表現するまたは潜在的な外国蛋白質とその切り捨てられたのアミノ酸の抗アポトーシス活性を評価に使用することができます熱衝撃によるタンパク質発現システム (pDHsp/V5-彼/sf9...

昆虫細胞 (sf9) 蛋白質機能の試金のための外国遺伝子の一過性発現

このプロトコルでバキュロ ウイルスは Sf9 細胞にトランスフェクション バキュロ ウイルス プラスミドのプロデュース、無血清培養で増幅されます。上清はヘパリン親和性クロマトグラフィーによる精製、超遠心法でさらに集中しています。このプロトコルは、生産およびバキュロ...

生産およびバキュロ ウイルスの遺伝子治療応用のための浄化

ここでは、プロトコルを提案家フライ カルボキシルエステラーゼ タンパク質の in vitroバキュロ ウイルス媒介昆虫細胞発現系を生成し、後で機能的、それにより代謝ペルメトリンの役割を特徴づけるピレスロイドを授与セルベースの MTT...

殺虫剤抵抗性イエバエ、イエバエのカルボキシルエステラーゼの機能特性

ここでは、昆虫にセルとバキュロ ウイルス蛋白質結晶化の植物の分泌タンパク質の大量生産にタンパク質発現のシステムを利用するためのプロトコルを提案する.バキュロ ウイルス発現ベクターは、GP67 や植物タンパク質分泌発現昆虫細胞での昆虫ヘモリン...

植物昆虫細胞でのタンパク質を分泌生産するバキュロ ウイルス発現ベクターを変更します。

バキュロウイルス発現ベクターシステム(BEVS)は、生化学的、生物物理学的、および構造研究に使用されるタンパク質アルギニンメチルトランスレシナーゼ(PRMT)の発現スクリーニングおよび生産のための堅牢なプラットフォームです。物質のミリグラム量は、真核生物発現プラットフォームを必要とする関心のあるPRMTおよび他のタンパク質の大部分のために製造することができる。...

バキュロウイルス発現ベクターシステムを用いた組換えPRMTタンパク質の生産

ヒト膜トランスポーターの構造的および生化学的研究には、安定で無傷の均質なタンパク質がミリグラム単位で必要です。ここでは、コドン最適化遺伝子を用いてヒト溶質キャリアトランスポーターをスクリーニング、発現、精製するためのスケーラブルな方法について説明します。...

構造および生化学的研究のためのヒト溶質担体のハイスループット発現および精製(英語)

学ぶバキュロウイルスによるチョウ目幼虫の経口感染法。液滴給養バイオアッセイと餌プラグ法を用いて殺虫効力を評価する手法を解説。農業害虫管理や遺伝子組み換えウイルス開発に有用です。

バキュロウイルスによるチョウ目幼虫の経口感染するためのプロトコル

さらに動画を探す