Name: アフリカツメガエル女性から卵子を入手 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-20T20:12:00.000+00:00
Duration: 4 min 47 s
Description: 学ぶXenopus laevisの卵子採取と前処理プロトコル。ヒト絨毛性ゴナドトロピンを用いて産卵を誘導し、ゼリー被膜除去と選別を行う。細胞生物学や発生生物学研究に有用な高品質な卵子を調製する方法です。

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この実験的なアプローチのための完全なテキストのプロトコルでは、利用可能です<a href="http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract?hd=author,Powers]">細胞生物学におけるカレントプロトコール</a> 。

著者に開示すべき事項はありません。

アフリカツメガエル女性から卵子を入手

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

、そのまま溶解、及び/または分画アフリカツメガエルの卵は、実験の様々な場合に便利です。このプロトコルは、産卵を誘発卵を収集し、dejelly、及び損傷した卵を除去するために卵をソートする方法を示しています。

アフリカツメガエル（Xenopus laevis）の卵は、そのままの状態、溶出後、および／または分画後の状態で、幅広い実験に有用です。本プロトコルでは、産卵を誘導する方法を説明します。

Xenopus labisの卵抽出物は、核の構築や核タンパク質の輸送などの細胞内イベントをin vitroで再構成するための、細胞質およびオルガネラ材料のソースとして有用です。もちろん、卵抽出物を使用する前に、まず雌のカエルから卵を得る必要があります。こんにちは、私はマリー・クロスです。ジョージア州アトランタのエモリー大学細胞生物学部のマリーン・パワー博士の研究室で大学院生をしています。本日は、成熟したopus lavisの雌からゼリー卵を採取し、脱ゼリー化する方法について解説します。この手順には、妊娠したmarereを用いて卵を産ませるためのカエルのプライミング、ヒト絨毛性ゴナドトロピンを用いて卵を産ませるための血清性ゴナドトロピンの導入、および不良卵や細胞の選別が含まれます。それでは始めましょう。卵を産出させるため、まず成熟した雌のカエルに妊馬血清性ゴナドトロピンを投与してプライミングを行います。プライミングの手順を開始するには、カエルを飼育するための100 mM NaClを含む水槽を準備します。注射後、プライミング中のカエルは、1リットルあたり約1匹の密度で飼育してください。カエルを18 °Cで飼育することにより、最適な卵生産が維持されます。1 mil シリンジに取り付けた27ゲージの針を用いて、200 units/mil のPregnant mare serum gonadotropinを 0.5 mil、カエルの背側リンパ嚢に皮下注射します。プライム状態のカエルを100 mMの塩化ナトリウムを含む水槽に戻します。2〜3日後、100 units/mLのヒト絨毛性ゴナドトロピンを0.5 µL注入し、再び背側リンパ嚢に皮下注射することで産卵を誘導します。注射後、各カエルを100 mMの塩化ナトリウム溶液5 Lに入れます。カエルによって卵の質が異なるため、個別の容器に分けて入れることが推奨されます。ヒト絨毛性ゴナドトロピンの注射から約16〜22時間後、カエルをきれいな水槽に移し、卵をビーカーに回収します。注射部位に感染の兆候がないか、1〜2日間カエルを観察することが推奨されます。この段階では、各卵は透明なゼリー層に包まれており、卵同士が接触するのを防いでいます。ゼリー状の卵を洗浄するため、卵を一度すすぎ、2%L-cysteine pH 8で処理した後、カエル1匹あたり100 µLの2%L-cysteine溶液に入れ、約5分間インキュベートし続けます。室温で、5分後に卵を緩やかに周期的に攪拌してください。システイン溶液をデジェ卵から注ぎ捨て、0.25 x modified ringer溶液で3回洗浄します。解剖顕微鏡の下で、卵を100 mmのガラス製ペトリ皿に注ぎ、不純物を除去します。パステールピペットを用いて、ペトリ皿から不良卵を取り除きます。成熟したxi

obtaining-eggs-from-xenopus-laevis-females

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

の受精アフリカツメガエル卵母細胞ホストの転送方式を使用して

アフリカツメガエル胚上皮は、上皮形態形成時の極性の開発と形状の変化などの細胞の挙動を研究する理想的なモデルシステムです。固定試料の伝統的な組織は、ますます生細胞の共焦点イメージングによって補完されています。ここでは、カエルの組織を分離し、生きた細胞の共焦点顕微鏡を使用して、ライブ上皮細胞とその細胞骨格を可視化する方法を示しています。...

生細胞イメージングとの胚上皮細胞の定量分析アフリカツメガエル</em

アフリカツメガエルの卵抽出物は、DNA損傷チェックポイントを調査するために有用なモデル系である。このプロトコルは、...

用いたDNA損傷チェックポイントの研究<em&gt;アフリカツメガエル</em&gt;卵抽出

我々は、未受精卵の集合を記述する...

の生産<em&gt;アフリカツメガエルトロピカ</em微小管関連RNAを識別するために、&gt;卵抽出

方法は、 アフリカツメガエル卵抽出物およびタンパク質分解の小分子モジュレーター用のハイスループットスクリーニングのために適応で放射性標識、ルシフェラーゼ融合タンパク質を用いてタンパク質分解を分析するために記載されている。...

β-カテニンの分解にの再構成<em&gt;アフリカツメガエル</em&gt;卵抽出

私たちは、Xenopus laevisの未熟卵子の操作方法、卵子の卵子へのin...

操作と<em&gt;インビトロ</emの&gt;成熟<em&gt;アフリカツメガエル</em細胞質内精子注入し&gt;卵母細胞、胚発生を研究するために

タンパク質合成制御は主に翻訳開始段階で行われ、その欠陥は多様な障害に関連しています。それらの病因をよりよく理解するために、ここでは、翻訳開始因子eIF4G1の変異体の存在下でmos転写産物の翻訳を評価するXenopus...

アフリカツメガエルは、翻訳減損を識別するためのモデルとして、 アフリカツメガエル

細胞および細胞内のスケーリングのメカニズムは、まだとらえどころのないままです。Xenopus胚抽出物の使用は、オルガネラサイズ制御のメカニズムを解明するためにますます一般的になっています。この方法は、胚抽出物の調製と、核サイズ調節のメカニズムを特定できる新しい核スケーリングアッセイについて説明するものです。...

用いた無細胞アッセイ<em&gt;アフリカツメガエル</em&gt;胚は、核サイズの規制のメカニズムを研究するために抽出します

このプロトコルは、脈管構造を視覚化し、 Xenopus tropicalisにおけるその複雑性を定量化する蛍光ベースの方法を実証する。インビボでの心臓血管発達を研究するために、遺伝的および/または薬理学的操作の後、胚の拍動する心臓に蛍光色素を注入した後、数分後に血管を撮像することができる。...

の胚性血管新生の可視化と定量分析<em&gt;ツメガエル</em

アフリカツメガエル卵からの希釈されていない細胞質抽出物の調製およびライブイメージングの方法を記載する。...

アフリカツメガエル 動的細胞質組織を可視化するための卵抽出物調製およびライブイメージング法

変容成長因子ßファミリー前駆体タンパク質が ゼノプス・ラエビス...

ゼノプス・ラエビス胚の芽球に分泌される成長因子ßファミリー切断産物の分析

学ぶXenopus laevisの卵子採取と前処理プロトコル。ヒト絨毛性ゴナドトロピンを用いて産卵を誘導し、ゼリー被膜除去と選別を行う。細胞生物学や発生生物学研究に有用な高品質な卵子を調製する方法です。

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