광합성
- 식물 색소 크로마토그래피
- 참고: 이 실험에서는 크로마토그래피 용지를 사용하여 시금치 잎에서 색소를 분리합니다. 개별 안료는 서로 다른 속도로 종이를 따라 이동하며 다른 색상을 가질 수 있습니다. 안료가 이동하는 상대적 거리, 해상도 계수를 계산하고 문헌 값과 비교하여 다른 안료를 식별할 수 있습니다. 가설: 이 실험에서 실험 가설은 시금치 잎 안에 다양한 파장의 햇빛을 흡수하는 여러 색소가 있을 것이라는 것입니다. 귀무 가설은 시금치 잎 내에 한 가지 유형의 색소만 있다는 것입니다.
- 연필을 사용하여 크로마토 그래피 용지의 한쪽 끝에서 2cm 떨어진 선을 만듭니다.
- 그런 다음 깨끗한 400mL 비커 상단에 파이프 클리너를 수평으로 놓습니다.
- 크로마토그래피 스트립의 연필로 표시된 면을 비커 바닥에 놓습니다.
- 다음으로, 아래쪽 가장자리가 비커 바닥에 거의 닿지 않도록 파이프 클리너에 종이를 감싼 다음 클립으로 고정합니다.
- 파이프 클리너에 종이가 고정되면 비커에서 종이를 제거한 다음 크로마토 그래피 용지의 표시된 선 위에 두드려 마른 시금치 잎을 놓습니다.
- 연필 선을 따라 시금치 잎 위에 동전을 굴리고 여러 번 앞뒤로 움직이며 일정한 압력을 가합니다. 잎이 제거되면 녹색 선이 명확하게 나타나야 합니다.
- 다음으로 비커에 크로마토그래피 용매 8mL를 넣습니다.
- 종이의 가장자리가 용매에 닿지만 녹색 선은 닿지 않도록 크로마토그래피 스트립을 비커로 내립니다. 필요한 경우 파이프 클리너를 조정하십시오.
- 비커를 방해하지 않고 용매가 종이 위로 올라가고 개별 안료가 분리 될 때 용매를 관찰하십시오.
- 용매가 크로마토 그래피 용지의 절반을 위로 이동했으며 약 10 분이 소요되고 안료가 잘 정의 된 띠로 분리되면 비커에서 종이를 제거하십시오.
- 연필로 솔벤트가 얼마나 멀리 이동했는지 표시한 다음 종이를 말리십시오. 참고: 용매가 빠르게 증발합니다.
- 다음으로 보이는 밴드의 수를 기록하고 색상과 상대적 크기를 설명합니다.
- 용매와 안료가 얼마나 멀리 이동했는지 측정하고 각 안료에 대해 이 정보를 표 1에 기록합니다. 표 1을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.
- 크로마토그래피 용매를 흄 후드 아래의 폐기물 용기에 폐기합니다. 크로마토그래피 스트립을 일반 쓰레기통에 버린 다음 비누와 물로 비커를 청소합니다.
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- 참고: 이 실험에서는 용액에 떠 있는 잎 디스크를 사용하여 광합성과 세포 호흡을 간접적으로 관찰합니다. 광합성을 하는 동안에는 기포가 잎을 뜨게 하고, 호흡하는 동안에는 디스크가 가라앉습니다. 가설: 이 연습에서 실험적 가설은 중탄산염이 광합성을 촉진하기 위해 추가 CO2를 제공하여 더 많은 잎 원반이 떠오르게 하기 때문에 잎 디스크가 중탄산염 용액에서 더 큰 광합성 속도를 가질 것이라는 것입니다. 또한 모든 디스크는 세포 호흡을 수행하기 때문에 어두운 조건에서 가라앉습니다. 귀무 가설은 중탄산염과 물 또는 밝은 처리와 어두운 처리 사이에 광합성 속도, 따라서 떠 다니는 디스크의 수에 차이가 없다는 것입니다.
- 잎 디스크를 진공 상태에서 놓으려면 먼저 20mL 주사기 2개에서 플런저를 제거한 다음 각 주사기 튜브 내부에 10개의 잎 디스크를 넣습니다. 한 주사기에는 "중탄산염"이라고 표시하고 다른 주사기에는 "물"이라고 표시합니다.
- 플런저를 교체하고 주사기에 소량의 공기 만 남을 때까지 플런저를 밉니다. 잎 디스크가 손상되지 않도록 주의하십시오.
- 중탄산염 용액 5mL를 주사기 중 하나에 넣습니다. 주사기를 뒤집고 휘젓기 위해 잎 디스크를 용액에 매달아 놓습니다.
- 용액을 배출하거나 잎 디스크를 손상시키지 않고 가능한 한 많은 공기를 밀어냅니다.
- 그런 다음 물 용액 5mL를 다른 주사기로 당겨 앞서 설명한 대로 휘젓습니다 (3 단계).
- 진공을 만들려면 플런저를 뒤로 당기면서 한 손가락으로 주사기 끝을 잡습니다. 주사기를 휘젓는 동안 10초 동안 이것을 유지하여 잎 디스크를 현탁 상태로 유지합니다.
- 그런 다음 진공 청소기를 해제하십시오. 참고: 디스크는 조직의 공기 공간으로 용액을 흡수해야 하며 가라앉는 것을 볼 수 있어야 합니다. 디스크가 가라앉지 않으면 진공 생성을 최대 3회까지 반복할 수 있습니다.
- 다음으로 플라스틱 컵이나 유리 비커에 50mL의 중탄산염 용액을 넣은 다음 중탄산염 진공 주사기의 디스크를 부드럽게 추가합니다.
- 대조군의 경우 동일한 컵에 동일한 양의 물을 넣은 다음 물 진공 주사기의 잎 디스크를 추가합니다. 용기에 적절하게 레이블을 지정합니다.
- 두 컵을 모두 광원 아래에 놓습니다.
- 20분이 지날 때까지 표 3의 컵 표면에 떠 있는 디스크의 수를 5분마다 기록합니다. 표 3을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.
- 다음으로, 광원에서 컵을 제거한 다음 소용돌이 쳐서 표면의 디스크가 표면의 가스와 혼합되도록합니다.
- 컵을 어두운 곳으로 옮깁니다. 20분이 지날 때까지 표면에 떠 있는 잎 디스크의 수를 5분마다 기록합니다. 어두운 곳에 다시 넣기 전에 매번 컵을 휘젓습니다.
- 청소하려면 잎 디스크를 쓰레기통에 버리고 중탄산 용액을 배수구에 붓습니다. 주사기와 컵을 철저히 씻으십시오.
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- 참고: 첫 번째 실험에서는 시금치 잎의 색소가 크로마토그래피 용지에서 얼마나 멀리 이동하는지 관찰했습니다. 다른 안료는 다른 파장의 빛을 흡수합니다.
- 색펜이나 연필을 사용하여 그림 3에 색소 밴드와 용매의 위치를 그립니다.
- 안료의 유지 계수 또는 Rf 값을 계산하며, 이는 문제의 안료가 라인에서 종이를 위로 이동 한 거리를 용매가 라인에서 종이를 위로 이동 한 거리로 나누어 수행됩니다.
- 계산된 Rf 값을 표 2의 값과 비교하여 안료의 정체를 확인합니다. 표 2를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.
- 이 데이터를 표 1에 기록합니다. 참고: 두 번째 실험에서는 광합성과 호흡의 간접적인 측정으로 떠다니는 잎 원반과 가라앉는 잎 원반을 관찰했습니다.
- x축에 시간과 분, y축에 플로팅 디스크 수를 사용하여 결과를 그래프로 표시합니다. 두 개의 다른 선을 사용하여 물 제어와 중탄산염 처리를 나타냅니다.
- 그래프에 선을 추가하여 디스크가 밝은 상태에서 제거되고 어둠 속에 놓인 지점을 나타냅니다.
- 다음으로 중탄산염 조건부터 시작하여 그래프를 사용하여 잎 디스크의 50 %가 떠있는 지점을 확인합니다. 이를 유효 시간 또는 ET50이라고 합니다. 참고: 디스크가 밝은 상태에서 한 번, 어두운 상태에서 다시 한 번 50% 부동 표시에 도달할 가능성이 있음을 알 수 있습니다.
- 물 샘플이 ET50 마크에 도달했거나 도달하지 않았을 수 있습니다. 이 경우 이 샘플에 대한 줄도 추가합니다.
- 마지막으로 ET50 값과 그래프를 나머지 클래스와 비교합니다.