21.10
DNA 복제에는 이중 나선의 두 가닥이 분리되는 과정이 포함되며, 각 가닥은 새로운 상보 가닥이 복사되는 주형 역할을 합니다. 복제 후, 각 이중 가닥 DNA에는 하나의 모 가닥 또는 "오래된" 가닥과 하나의 "새" 가닥이 포함됩니다. 이를 반보존적 복제라고 합니다.…
DNA 복제는 기존 가닥을 주형으로 사용하여 새로운 DNA 가닥을 합성하여 발생합니다. 두 개의 새로운 이중 나선은 각각 원래의 주형 가닥과 새로 합성된 딸 가닥을 포함하며 따라서 이 과정은 반보존적복제로 불리웁니다. 복제를 시작하기 위해 효소인 헬리카제는 DNA 나선을 풀고 두 가닥 사이의 수소 결합을 끊습니다.
그 다음 복제 포크로 알려진 Y형 구조를 형성하는 개별적인 가닥을 분리하는데 여기서 주형 가닥은 추가 효소에 의해 접근할 수 있습니다. 또 다른 효소인 프리메이즈는 프라이머라고 하는 짧은 RNA 단편을 각 주형 가닥에 추가합니다. 이러한 프라이머는 DNA 중합 효소가 기존 가닥에만 뉴클레오티드를 추가할 수 있기 때문에 DNA 합성에 필수적입니다.
DNA 중합 효소는 모든 주형 DNA 가닥에서 성장하는 딸가닥에 추가됩니다. 뉴클레오타이드의 추가는 DNA 쌍 규칙에 따라 원래의 DNA 가닥의 서열에 의해 유도됩니다. 딸가닥 중의 하나인 선도가닥의 합성은 복제 포크 이동 방향으로 발생합니다.
다른 가닥인 지체가닥은 반대 방향으로 합성됩니다. 이로 인해 선도가닥이 연속 중합체로 합성되는 반면 지체가닥은 짧은 단편으로 합성됩니다. 이는 DNA가 5'에서 3'방향으로만 합성될 수 있기 때문에 발생합니다.
성장하는 중합체에 첨가되기 전에 뉴클레오티드는 디옥시리보뉴클레오사이드 삼인산염으로 존재하며 3개의 인산염이 당에서 다섯 번째 탄소에 부착됩니다. 이 자유 뉴클레오티드 삼인산염은 3'히드록실기와 반응합니다. 이는 성장하는 가닥의 끝에 있는 당의 세 번째 탄소에 부착된 OH입니다.
이 반응은 피로인산염을 방출하고 두 뉴클레오티드 사이에 포스포디에스테르 결합을 형성합니다. 새로운 가닥인 RNase H 또는 DNA 중합효소의 추가 변형을 합성한 후 프라이머를 제거하고 그 자리에 DNA를 합성합니다. 단편 사이의 틈새는 DNA 리가제로 밀봉되어 연속 가닥을 생성합니다.
뉴클레오티드의 추가는 두 복제 포크가 서로 만날 때까지 계속되며 결국 복제가 완료됩니다.
View the full transcript and gain access to JoVE Core videos
Q1: Why is DNA replication called semiconservative?
DNA replication is semiconservative because each newly formed double helix contains one original template strand and one newly synthesized daughter strand. After replication, the two resulting DNA molecules each preserve one parental strand from the original double helix, ensuring genetic continuity while incorporating new genetic material.
Q2: What role does helicase play in DNA replication?
Helicase unwinds the DNA double helix by breaking hydrogen bonds between the two strands. This separation creates a Y-shaped structure called the replication fork, which exposes the template strands so that other enzymes can access and copy them during DNA synthesis.
Q3: Why are RNA primers necessary for DNA synthesis?
RNA primers are essential because DNA polymerase can only add nucleotides to an existing strand; it cannot initiate synthesis de novo. Primase adds short RNA fragments to each template strand, providing the 3'-OH group that DNA polymerase requires to begin extending the new DNA strand.
Q4: How does the directionality of DNA synthesis affect leading and lagging strand formation?
DNA polymerase synthesizes only in the 5' to 3' direction. The leading strand is synthesized continuously toward the replication fork. The lagging strand grows away from the fork, requiring DNA polymerase to repeatedly restart synthesis, producing short DNA fragments called Okazaki fragments separated by RNA primers.
Q5: What happens to nucleotide triphosphates when they are added to the growing DNA strand?
Nucleotide triphosphates react with the 3'-OH group at the end of the growing strand. This reaction releases pyrophosphate, and the energy from breaking phosphate bonds drives the formation of a phosphodiester bond between nucleotides, linking them together in the DNA backbone.
Q6: How are gaps sealed after DNA polymerase removes RNA primers?
After RNase H or DNA polymerase variants remove RNA primers and fill the gaps with DNA nucleotides, the enzyme DNA ligase seals the remaining nicks. DNA ligase catalyzes the formation of phosphodiester bonds between the 3'-OH end of one DNA fragment and the 5' phosphate end of the adjacent fragment.
Q7: How does eukaryotic DNA replication differ from prokaryotic replication?
Eukaryotic genomes are larger and more complex, with multiple origins of replication per chromosome, whereas prokaryotes have single origins. Eukaryotic replication occurs at approximately 100 nucleotides per second—ten times slower than prokaryotic replication. Despite these differences, the essential enzymatic steps and base pairing and its significance in DNA replication remain fundamentally similar.