15.2: DNA 분리

DNA 분리 프로토콜은 추가 처리에 필요한 DNA의 유형과 품질에 따라 빠르고 간단할 수도 있고 복잡하고 시간이 많이 소요될 수도 있습니다. 예를 들어, 플라스미드 DNA 추출은 분리 중에 gDNA에서 플라스미드 DNA를 분리하기 위한 적절한 용해 방법이 필요하기 때문에 게놈 DNA 추출보다 약간 더 복잡합니다. 그러나 고품질 DNA 샘플의 우수한 수율이 필요한 장거리 DNA 염기서열분석과 같은 특정 응용 분야의 경우 게놈 DNA 추출을 위해서도 특정 프로토콜을 따라야 합니다.

게놈 DNA 추출 방법의 종류

게놈 DNA 추출 방법의 주요 목적은 단백질, RNA 및 기타 세포 함량에서 gDNA를 분리하는 것입니다. 여기에는 네 가지 기본 단계가 포함됩니다. – 1. 세포 용해물을 얻기 위해 기계적으로 또는 화학 물질을 사용하여 세포 구조를 파괴 2. 가공 중 DNA가 저하되지 않도록 보호 3. 세포 파편에서 용해성 DNA의 분리 4. 정제된 DNA의 용출.

대부분의 게놈 DNA 분리 프로토콜은 용액 기반 또는 고체상 추출 방법입니다. 용액 기반 방법은 침전 및 원심분리 단계를 사용하여 다른 세포 물질에서 DNA를 분리한 다음 유기 추출 또는 “염분”을 통해 세포 단백질에서 용해성 DNA를 분리합니다. 최종 DNA 침전은 에탄올을 사용하여 수행됩니다. 대조적으로, 고체상 추출 방법은 실리카 또는 셀룰로오스 매트릭스와 같은 고체 지지체를 사용하여 DNA를 결합한 다음 고체 지지체에서 세척 및 DNA 용출을 수행합니다. 여기에는 원심분리, 진공 또는 자기 방법을 포함하여 결합된 DNA를 다른 세포 구성 요소에서 분리합니다.

gDNA 추출 방법의 선택은 샘플의 유형, 한 번에 처리할 샘플의 수 및 DNA의 다운스트림 애플리케이션에 따라 달라집니다.