FISH - 형광성 제자리 혼성화

형광 현장 혼성화(FISH)는 고정된 세포 내의 염색체에서 특정 유전자 또는 유전자 일부의 위치를 감지하는 데 사용되는 기술입니다.

이 기술에서는 형광 표지된 단일 가닥 DNA를 프로브로 사용하여 표적이라고 하는 상보적인 DNA 염기서열을 포함하는 염색체 부분을 결합하는 데 사용합니다.

첫째, 세포는 간기 또는 중기에서 정지됩니다. 포착된 세포는 완충 용액에 현탁되어 깨끗한 유리 슬라이드에 펴집니다.

다음으로, 표적 DNA와 표지된 프로브는 열 또는 화학 물질로 변성됩니다. 이 단계는 이중 가닥 DNA를 분리하여 프로브와 표적 DNA를 모두 염기쌍이 가능한 단일 가닥 염기서열로 남겨둡니다.

그런 다음 프로브와 표적 DNA를 함께 혼합하여 하룻밤 동안 배양합니다. 이를 통해 프로브는 염색체의 상보적 서열에 혼성화할 수 있습니다.

혼성화가 완료되면 초과 프로브가 씻겨 나옵니다.

프로브가 형광단으로 표지된 경우 혼성화된 DNA의 위치를 형광 현미경으로 직접 시각화할 수 있습니다.

그렇지 않은 경우 하이브리드화된 DNA는 시각화 전에 형광 표지가 필요합니다.이를 위해 프로브 염기서열에는 형광 항체와 같은 형광단이 부착할 수 있는 작은 분자인 hapten에 결합된 변형된 뉴클레오티드가 포함되어야 합니다.

이러한 유전자의 직접적인 시각화는 세포 기반 진단 분석에 매우 유용하며, 세포 분열 중 염색체의 손실, 이득 또는 재배열로부터 유전적 이상을 감지할 수 있습니다.