16.12: In-situ 하이브리드화

ISH(In situ hybridization)는 라벨링된 프로브를 사용하여 세포, 조직 또는 조직 섹션에서 특정 DNA 또는 RNA 분자를 검출하고 국소화하는 데 사용되는 기술입니다. 이 기술은 1969년 핵산 조사를 위해 처음 사용되었습니다. 현재 과학 연구 및 임상 환경, 특히 진단 목적의 필수 도구입니다.

프로브 및 레이블의 종류

프로브는 세포의 해당 뉴클레오티드 서열에 결합하는 DNA 또는 RNA의 상보적인 가닥입니다. 단일 가닥 DNA 프로브, 이중 가닥 DNA 프로브, 안티센스 RNA 프로브 또는 리보프로브, 합성 올리고데옥시뉴클레오티드 프로브와 같은 다양한 프로브가 in situ hybridization에 사용됩니다. 프로브의 선택은 민감도, 특이성, 안정성 및 조직 샘플에 대한 침투 용이성을 포함한 여러 요인에 따라 달라집니다.

이러한 프로브는 검출 목적으로 방사성 동위원소, 형광 염료 또는 기타 항원 분자로 표지할 수 있습니다. ³H, ³⁵S 및 ³²P는 널리 사용되는 방사성 표지 프로브이며, 비방사성 표지에는 비오틴, 디곡시제닌 및 플루오레세인이 포함됩니다. 이러한 라벨은 말단 라벨링, 닉 번역 또는 무작위 프라이머 합성 방법을 통해 프로브 DNA 분자에 부착할 수 있습니다. 자가 방사선 촬영, 형광 현미경 검사 또는 면역조직화학과 같은 검출 방법은 하이브리드 프로브에 부착된 라벨을 기반으로 한 표적 시각화에 사용됩니다.

in situ hybridization의 장점과 단점

현장 교잡의 주요 장점 중 하나는 동결 조직에도 적용하여 얻기 어려운 조직을 최대한 활용할 수 있다는 것입니다. 또한 면역조직화학(immunohistochemistry)과 같은 다른 기법과 결합하여 시료에서 단백질과 활성 mRNA를 검출할 수 있습니다. 그러나 DNA 및 RNA 사본이 낮은 샘플로 작업하는 동안에는 in situ hybridization을 사용하여 표적을 식별하기 어려울 수 있습니다.