에서 복잡한 운전하는 동작의 연구 Drosophila melanogaster 주어진 파리의 움직임의 변화를 계량하는 능력에 의존적일 수 밖에 없습니다. 이 문서는 고해상도 추적 시스템을 사용하여이 작업을 수행하는 방법을 보여줍니다.
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이 논문에서
요약
초록
파리는이 분야에서 연구자에게 제공 유전 도구의 과다로 인해 복잡한 동작을 연구에 중요한 모델을 제공합니다. 에서 전위의 행동을 공부
프로토콜
1 부 : 파리의 수유 및 관리
- 파리는 누룩없는 표준 매체를 포함하는 병 재배한다. 당신은 파리의 큰 숫자가 필요합니다, 그래서 십자가는 적절하게 설정해야합니다. 25 º C.에 어두운주기 : 파리는 12 시간 조명으로 성장해야
- 파리는 (1-3일) 곧 eclosion 후 수집되어야합니다. 파리는 이산화탄소 디퓨저를 사용하여이 단계에서 같이 일한 수 있으며, autoclaved 또는 효모없이 미디어를 포함하는 테스트 튜브로 정렬되어야합니다. 우리는 테스트 튜브에만, 저장 남성 10를 사용합니다.
- 행동 실험을 실행하기 전에 이산화탄소의 사용 후 적어도 하루나 이틀이 소요됩니다. 우리는 ECLOSION 다음 3-5일 우리의 행동 분석에 파리를 실행합니다.
- Assays 항상 circadian 리듬에 문제가 발생하지 않도록 동일한 2-3시간 시간 창 매일 내에서 이루어져야한다.
2 부 : 제한된 환경에서 추적 시스템을 설정
- 모든 실험은 70 % 습도가 25 º C의 일정한 온도를 유지하는 환경 룸에서 이루어집니다.
- (카메라가 아래쪽으로 향하게) 기록으로 그 지역에있는 디지털 비디오 카메라를 일시 중지합니다. 우리 추적 소프트웨어....
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토론
우리의 설치 프로그램에서 적당히 강한 공기 펄스 transiently 플라이 운동을 중지합니다. 공기 펄스가 끝날 때, 파리는 그림 2에 표시된이 고정 상태와 일반적으로 locomote에서 발표됩니다. 이 공기 펄스 효과적으로 인구의 운동을 동기화하기 때문에, 우리는 또한 모멘텀적인 자극의 다음과 같은 운동의 발병을 공부할 수 있도록 재판을 시작하기 위해 그것을 사용합니다. 개시 다음과 같은 전위의 매개 변수가 공기 펄스 (그림 2)에 의해 영향을받지되기 때문에 분석은하지만, 공기 펄스없이 할 수 있습니다.
운동의 자동 분석 본 한 자주 발생하는 문제는 충돌의 문제입니다. 추적 프로그램은 충돌 파리 처리에 악명 나쁜 대부분입니다. 이 프로그램은 종종 충돌하는 동안 일시적으로 객체의 "시력"을 잃게하고, 새로운 개체로이 개체 레이블을 찾는시. 그 결과 실제로 챔버에 존재하는 것보다 더 많은 개체 추적을 출력하실 수 있습니다. 많은 사람들이 하나의 파리를 추적하.......
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감사의 글
이 작품은 LC 그리피스에게 수여 보건 부여 R01 GM54408 국립 연구소에 의해 지원되었다. 우리는 광장 챔버 설계 및 실내 건축 및 분석 문제에 대해 도움이 대화를 댄 발렌테 및 팀 Lebestky에 대한 브랜다 이스 대학 기계 공장에서 우리의 분석, 프랭크 멜로를 설정하는 모든 도움 프레드 울프 감사하고 싶습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| 정사각형 챔버 | 도구 | Machine Shop | 해당 없음 | Wolf et al. 20021 설계 |
| 디지털 카메라 | 카메라 | Sharp | ViewcamZ VL-23 | |
| 유량계 | 도구 | Cole-Parmer | SY-32003-12 | |
| 라이트 박스 | 도구 | DNASTAR | Seq-Easy | |
| 활성탄 필터 | 도구 | Fisher Scientific | 09-744-37 | |
| DIAS 3.2 | 소프트웨어 | Soll technologies | 해당 없음 | www.solltechnologies.com |
참고문헌
- Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T. High-Resolution Analysis of Ethanol-Induced Locomotor Stimulation in Drosophila. J Neurosci. 22 (24), 11035-11044 (2002).
- Soll, D. R. The use of computers in understanding how animal cells crawl. International rev....
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재인쇄 및 허가
