Xenopus Laevis의 Oocytes의 Microinjection

요약

여기의 세포질 microinjection을 보여주 Xenopus laevis oocytes.

초록

얇은 sectioning 전자 현미경 (EM) 다음 Xenopus laevis의 oocytes의 Microinjection은 nucleocytoplasmic 전송을 공부하고있는 훌륭한 시스템입니다. 때문에 대형 핵 및 핵 기공 단지 (NPCs)의 높은 밀도, 핵 수송 Xenopus oocyte의 시각에서 쉽게하실 수 있습니다. 원자력 수출입의 메커니즘에 많은 통찰력이 시스템의 사용 (Panté 2006 년 검토)를 통해 얻은되었습니다. 또한, 우리는 호스트 핵의 복제 여러 바이러스의 핵 수입 경로를 해부하다에 Xenopus의 oocytes의 microinjection을 사용했습니다.

여기서 우리는 핵 수입 기판과 Xenopus의 oocytes의 세포질 microinjection을 보여줍니다. 우리는 또한에 의해 시각화를위한 주입 oocytes의 준비를 보여 얇은 sectioning 해부, 탈수, 그리고 에폭시 수지에 포함 oocytes의 포함 포함 EM​​합니다. 마지막으로, 우리는 baculovirus Autographa californica의 nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) 또는 마우스 (MVM)의 파르 보 바이러스의 할인 바이러스의 capsid와 microinjected, 그리고 기술의 잠재적인 응용 프로그램을 논의했습니다 oocytes에 대한 대표적인 결과를 제공합니다.

프로토콜

1 부 : microinjection에 대한 Xenopus의 oocytes의 작성

1. 88 MM NaCl, 1 MM KCl, 0.82 MM : 칼슘 무료 수정 바쓰의 호수에서 collagenase 용액 (5 MG / ML collagenase 20 ML을 포함하는 50 ML 원뿔 관에 Xenopus laevis의 난소의 작은 조각 (2cm에 대해) 장소 MgSO _4, 10 MM Hepes, 산도 7.5). Collagenase는 oocytes를 둘러싸고 뿌리 세포를 제거하는 데 사용됩니다.
2. 쉐이크 플랫폼에서 튜브를 장소와 한 시간 동안 (100 RPM에서) 부드럽게 그것을 바위. 이번 collagenase 다른 많은에 따라 다릅니다. 따라서 일시간 후, oocytes의 작은 샘플을 가지고 해부 현미경으로 그들을 검사합니다. 제대로 드 folliculated oocytes 잘 서로 구분해야하고, 그것은 oocyte에 유리 바늘을 삽입하기 쉬운해야합니다. oocytes가 충분히 드 folliculated하지 않으면, 그들은 collagenase 솔루션에 남겨진 또 수시로 확인하고 있습니다.
3. (MBS : 88 MM NaCl, 1 MM KCl, 0.82 MM MgSO _4, 0....

토론

얇은 sectioning EM과 함께 Xenopus의 oocytes의 Microinjection은 nucleocytoplasmic 전송을 연구를위한 매우 효과적인 도구입니다. 이 시스템은 같은 세포질 섬유와 핵 바구니 (Panté 2006에서 검토)로 NPC의 구조 구성 요소와 핵 수입 기​​판의 예를 들어 상호 작용에 대해, NPC를 통해 수입의 서로 다른 단계를 매핑하는 데 사용되었습니다. 또한 원자력 복제 바이러스의 핵 수입 (; 레이브 외, 2003;. 코헨과 Panté 2005 Panté와 칸, 2002) 연구에 사용되고 있습니다.

여기에 표시된 세포질 microinjection 기법 중 하나는 변형 핵 수출 기판 (Panté 외., 1997)의 핵 microinjection입니다. 핵 주사를 수행하려면, oocytes는 동물 채를가 얼굴 있도록 지향, microwell 접시에 배치, 4 ° C 하룻밤에 incubate.......