여기, 우리는 콜라겐 기반 조직 골격 myoblasts를 포함하는 구성의 제조를 보여줍니다. 이러한 3 - D 설계 구조는 조직을 바꾸거나 수리하는 데 사용할 수 있습니다 생체내에. 우리 목적을 위해서도, 우리는 완전한 심장 블록의 수리를 위해 방실 전선관 이러한 디자인이 [1].
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이 논문에서
요약
초록
전자 맥박 조정기가있다는 사실에도 불구하고 생명을 구하는 의료 기기, 소아 환자에서 장기적인 성능이 아이의 작은 크기와 자신의 피할 수없는 성장에 의해 부과된 제한 문제 때문에 수 있습니다. 따라서 심장 리듬 장애와 소아 환자를 위해 특별히 설계된 혁신적인 치료법에 대한 진정한 필요가있다. 우리는 그 제안이 들어있는 콜라겐 기반 매트릭스로 구성된 전도성 생물 학적 대체 세포가 더 나은 성장에 적응 반복 수술의 필요성을 절감하며 크게 다음과 환자의 삶의 질을 향상시킬 수 autologously - 파생. 현재 연구에서 우리는 패션에 히드로겔 매트릭스 내에있는 마음의 상단과 하단 회의소 사이 전선관 될 것입니다 수술 - implantable 조직 구조를 기본 골격 myoblast 세포 문화를 통합을위한 절차를 설명합니다. 궁극적으로, 우리는 완전한 심장 블록과 어린이 방실 전기 전도를 복원할 수 있도록 설계 조직의이 유형을 사용하여 기대하고 있습니다. 그런 관점에서, 우리는 신생아 루이스 쥐 및 플레이트 그 규칙을 수정한 버전을 사용 laminin - 코팅 조직 문화 요리에의 골격 근육에서 myoblasts을 분리
프로토콜
1 부 : 주조 금형을 구축 조립
- 실리콘 튜브 (VWR)를 이등분하고 3cm 길이 조각으로 그것을 잘라 면도날을 사용합니다.
- 튜브의 각 끝 안쪽에 이식 등급 RTV 실리콘 접착제 (Rhodia)의 한 방울을 넣으십시오.
- 빨리 실리콘 접착제 드롭에 폴리에스터 메쉬의 작은 조각 (1cm X 1cm) (맥매스터 - 카)를 장소와 튜브의 끝 부분으로 맞춥니다. 이것은 건설 첨부 파일 약간 제기하고 평평한 표면을 제공합니다. 다른 쪽 끝을 위해 반복합니다.
- 금형 3 일 동안 실온에서 건조하도록 허용합니다. 이들은 본질적으로 일회용 있으므로 한 번에 20-30 금형을 만들기 위해 도움이 그것입니다.
- 접착제가 완전히 건조되면 그들이 필요 때까지, 70 % 에탄올로 가득 비커 이러한 금형을 저장합니다. 이 단계는 금형을 소독 도움이 될 것입니다 그리고 완성된 제품은 그림 1에 표시됩니다.
2 부 : myoblast 세포 격리를위한 준비
- 250 1 MG Laminin (시그마)를 희석 ML 0.22 μm의 필터 - 멸균 인산 버퍼 호수 (PBS)가 1퍼센트 페니실린 / 스트렙토 마이신 (Invitrogen)과 1 %의 Fungizone....
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토론
조직 구조가 캐스팅 될있는 금형은 어떤 모양과 크기로 만들 수 있지만, 첨부 파일이 최소한 두 지점이있을 필요합니다. 그렇지 않으면, 매트릭스 및 세포는 구형 구조를 형성하고 세포는 죽지. 현재 프로토콜에서, 우리는이 목적을 위해 폴리에스터 메쉬의 사용을 설명, 아직 우리는 성공적으로 스테인리스 메쉬를 사용했습니다. 물론, 큰 금형보다 세포와 다른 재료의 더 큰 볼륨을 요구할 것입니다. 금형을 만들 때 사용하는 실리콘 접착제의 양을 최소화하고이 튜브의 맨 끝에 위치하고 있는지 확인하는 것이 중요합니다. 접착제 근처 myoblasts도 치료의 몇 일 후에, 실용적 수없는 경향이 있기 때문입니다. 또한, 그것은 오염 섬유아 세포 빠르게 증식하고 결국 문화의 myogenic 구성 요소를 압도하므로 조직의 구조를 준비하기 전에 단 하루 두 판 myoblasts를 신중하게합니다. 서로 접촉 세포 융합 및 myotubes로 차별하기 시작되므로 마찬가지로, myoblasts는 밀도가 도금해서는 안됩니다. 조직 구조의 제조에 관해서는, .......
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공개 사항
동물 실험은 어린이 병원 보스톤에있는 기관 애니멀 케어 및 사용위원회에 의해 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었다.
감사의 글
, 쓰래서 연구 기금에서 새 연구원 수상하고, 어린이 병원 보스턴에서 심장 전도 기금에 기부,이 작품은 국립 보건원에서 연구 기금 (HL088206 HL068915)에 의해 지원됩니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 실리콘 튜브 | VWR international | 60985-724 | |
| 실리콘 접착제 | Rhodia Silicones | MED ADH 4300 RTV | |
| 폴리에스테르 메쉬 | McMaster-Carr | 93185T17 | |
| Laminin | Sigma-Aldrich | L2020 | |
| Nutrient Mixture F-10 HAM | Sigma-Aldrich | N6908 | |
| 소 태아 혈청 | Atlanta Biologicals | S11550 | |
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140 | |
| Fungizone | Invitrogen | 15290-018 | |
| Dispase-2 | Roche Group | 10295825001 | |
| Collagenase 2 | Worthington Biochemical | 46H8863 | |
| 염기성 섬유아세포 성장인자 | Promega Corp. | G5071 | |
| 150 mm 조직 배양 접시 | BD Biosciences | 353025 | |
| 0.05% (1X) Trypsin-EDTA | GIBCO, by Life Technologies | 25300 | |
| 1X Hanks Balanced Salt Solution | Invitrogen | 14170-112 | |
| 7.5% NaHCO3 | GIBCO, by Life Technologies | 25080-094 | |
| 70 μm 세포 스트레이너 | BD Biosciences | 352350 | |
| 6-웰 플레이트 | BD Biosciences | 353046 | |
| 50 mL 원추형 튜브 | BD Biosciences | 352098 | |
| 15 mL 원추형 튜브 | BD Biosciences | 352099 | |
| 0.2 μm 필터 | Nalge Nunc international | 194-2520 |
참고문헌
- Choi, Y. H. Cardiac conduction through engineered tissue. Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).
- Rando, T. A., Blau, H. M. Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy. J Cell Biol. 125
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재인쇄 및 허가
