호스트 및 바이러스성 유전자 발현의 헬라 세포 및 분석의 우두 감염 프로토콜. 3 부 1.
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이 논문에서
요약
프로토콜
1 부 : 감염을 설정
- flasks의 헬라 세포 성장과 세포가 약 80 % 합류 때까지 기다립니다.
- 2퍼센트 FBS와 정기 DMEM없이 추가 항생제 : 실험에 대한 충분한 바이러스성 성장 매체를 준비합니다.
- 감염이 중 원유 알려진 titer와 우두 바이러스 재고, 또는 당신이 호스트 유전자 발현이 염려되는 경우에는 알려진 titer와 바이러스를 정화 자당과 함께 수행할 수 있습니다.
- 당신이 자당 정화 바이러스를 사용하는 경우, 2 부 직접 진행합니다.
- 방금 전에 감염, 원유 우두 바이러스 주식을 사용하는 경우 대부분 얼음 목욕과 약간의 물과 컵 sonicator에 바이러스의 나누어지는을 sonicate.
- 20 초 동안 30W 주변에 Sonicate.
- 소용돌이 튜브를 얼음과 추위로 가득한 컵을 유지하기 위해 필요할 경우 더 많은 얼음을 추가 sonication에게 3 번 반복합니다.
- 각 sonication 단계 사이에 소용돌이.
- 2 부 진행합니다.
- 또는, 당신이 컵 sonicator을 가지고하지 않으면 원유 바이러스 주식 및 0.....
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토론
중요 단계
파트 1 & 2
동기 우두 감염을 설정하는 몇 가지 중요한 단계가 있습니다, 바이러스의 첫번째 목표가되어주의 sonication (또는 trypzinizing), 바이러스 입자를 disaggregate하기 위해서. 우두는 통합으로 높은 경향이 있으며, 바이러스 입자의 장애는 세포도 감염을 보장하는 것이 중요합니다. 동기 감염을 달성하기 위해, (2보다 큰) 뫄 높은 각 세포가 감염되었는지 확인하는 데 사용해야합니다. 감염과 감염되지 않은 세포의 혼합 감염의 여러 회진 시간 지점의 이기종 혼합물, 그리고 비동기 바이러스성 및 호스트 transcriptional 반응으로 이어질 것입니다. 감염은 세포에 바이러스의 최대 흡착을 허용하는 미디어의 최소 금액에 실시해야합니다. 또한, flasks 또는 문화 요리 (10 분 간격)의 정기적인 흔들림은 술병에 걸쳐 바이러스의 배포를 가능하게하고 세포가 건조하지 않도록 보장합니다........
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감사의 글
화이트 헤드 연구소 펠로 자금
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| TRIzol 시약 | 시약 | Invitrogen | 15596-026 | Roche의 TriPure와 같은 유사한 시약도 사용 가능합니다. |
| BCP 상분리 시약 | 시약 | Molecular Research Center | BP151 | |
| RNase-Free DNase 세트 | 시약 | Qiagen | 79254 | DNase 처리는 선택 사항입니다. |
참고문헌
- KH, R. ubins, LE, H. ensley, GW, B. ell, Wang, C., EJ, L. efkowitz, PO, B. rown, DA, R. elman Comparative analysis of viral gene expression programs during poxvirus infection: a transcriptional map of the vaccinia and monkeypox genomes. PLoS ONE. 3 (7), e2628-e2628 (2008).
- Assarsson, E., Greenbaum, J. A., Sundström, M., Schaffer, L., Hammond, J. A., Pasquetto, V., Oseroff, C., Hendrickson, R. ....
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