요나 크랩의 stomatogastric 신경계 (STNS) ( C. 보레알리스) 전기 생리학, immunohistochemistry, 그리고 세포 배양 연구에 사용될 수 있습니다. STNS 추출은 두 부분으로 이루어집니다 : 총 훌륭한 절개를.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
그것이 잘 특징 세포의 비교적 적은 수의 (약 25 C. 보레알리스)를 포함하고 있기 때문에 stomatogastric 신경절 (STG)는 휴대 전화 및 네트워크 상호 작용을 공부를위한 훌륭한 모델입니다. STG의 세포는 출력의 광범위한 전시와 복부의 모터 동작에 대한 책임이 있습니다. 위 세 가지 내부 치아와 음식, 그리고 midgut에 도달하기 전에 음식을 필터 pylorus를 나누기 위의 밀 포함되어 있습니다. STG는 위장 공장 및 중앙 패턴 발생기 (CPGs)로 알려진 pylorus를 제어하는 두 리듬 출력을 생산하고 있습니다. STG의 각 세포는 이러한 리듬 중 하나 또는 둘 모두에 참여할 수 있습니다. 이러한 CPGs는 neuromodulation의 연구, 항상성, 휴대 전화 및 네트워크 다양성, 네트워크 개발 및 네트워크 복구를 위해 수 있습니다.
요나 크랩 (암 보레알리스)에서 stomatogastric 신경계 (STNS)의 절개는 두 부분으로 이루어집니다, 총 훌륭한 절개를. 총 해부에서 전체 복부는 게에서 해부하는 것입니다. 미세 절개 동안 STNS은 해부 현미경과 미세 해부 도구를 (그림 1 참조)를 사용하여 위장에서 추출됩니다. STNS는 STG, oesophageal 신경절 (OG), 그리고 commissural 신경 (COG)뿐만 아니라 복부 근육을 신경을 분포시키다 신경을 포함합니다. 여기, 우리는 세포 레코딩에 사용 될 STG의 세포가 intracellularly와 주변 신경에서 녹화한 것입 전기 생리학 실험 준비 STNS의 전체 절개를 수행하는 방법을 보여줍니다. 원하는 신경을 찾기위한 적절한 기술은 somata와 neuropil을 나타내기 위해 신경을 desheathing 우리의 기술뿐만 아니라 표시됩니다.
프로토콜
1. 총 해부
- 동물의 무딘 감각과 모터 시스템에 30 분간 얼음에 게 놓으십시오. 얼음 사방에 포위하라. 게를 다룰 때 장갑을 착용하여야한다.
- 해부의 팬 및 사용 도구를 밖으로 누워하여 총 해부 준비. Rongeurs는 뼈가 절단 가위, 작은 가위, 톱니 포셉, 테이퍼 에지있는 주걱, 검은 Sylgard - 코팅 요리, 그리고 곤충 핀이 필요합니다.
- 곤란 않도록하고 해부 냄비에 배치하기 위해 뒷다리 다리로 얼음 양동이에서 게를 제거합니다.
- 안으로 각 하나를 복잡하게 먼저 발톱을 제거합니다. 그런 다음 동일한 비틀 모션을 사용하여 각 다리를 제거합니다.
- rongeurs 사용하여 입을 덮고있는 maxilla를 제거합니다. 또한 부드러운 maxillule를 제거합니다.
- rongeurs를 사용하면 다시 등딱지의 측면 후부 월말부터 시작하고 그것의 가장자리에 좋은 입씨름을. rongeurs로 다운 클램프와 등딱지의 일부를 끊다. 주걱가 시작을 입력할 수 있도록 충분히 등딱지의를 제거했는지 확인하십시오. 눈 등딱지 가장자리를 제거 계속 반대쪽에 반복합니다.
- 주걱의 테이퍼 측면으로 부드럽게 등의 등딱지의 지붕에서 떨어져 부드러운 내부 조직을 다쳤어요. STNS 손상을 방지하기 ....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
STNS의 해부는 전기 생리학 또는 immunohistochemistry 실험, 또는 세포 배양을위한 세포를 얻기위한 수행의 첫 단계입니다. 상관없이 의도 실험, 총 해부는 변경되지 않습니다. 그러나, 미세 절개가 다를 수 있습니다. 앞으로도에서 기록 세포와 신경 어느 시간 계획하는 것이 중요합니다. STG 대부분의 뉴런은 복부에있는 하나 이상의 근육 신경을 분포시키다 (그림 2 참조)하고 innervated 대상에 따라 분류되어 프로세스가 있습니다. 따라서, 세포외 음반 완전히 intracellularly 기록되고 세포의 신원을 확인하기 위해 필요합니다. pyloric 리듬의 주파수와 견고은 준비의 건강을 모니터링하는 데 사용됩니다. 따라서, 많은 실험 lvn에서 세포외 기록을 포함합니다. dgn은 일반적으로 위장 리듬을 모니터링하는 데 사용됩니다. 거기에 많은 modulatory 세포가 STNS의 앞쪽에 결국에는하고 신경을 severing하면 pyloric과 위장 리듬이 불규칙를 중지하거나이.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
감사의 글
우리는 기꺼이 Marder 연구실의 구성원을 인정합니다. 우리는 그녀의 지원과 격려를위한 고문, 박사 이브 Marder을 감사합니다. 이 연구는 국립 신경 장애 뇌졸중 연구소 보조금 NS - 17813 및 NS - 058110에 의해 지원되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| Black Sylgard 170 | 기타 | Dow Corning | 170 | 대조해부 |
| 미세 가위 | 수술 | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| 곤충 핀 6번 | 수술 | Fine Science Tools | 26000-65 | |
| 마요 가위 | 수술 | Fine Science Tools | 14110-17 | |
| 미세 스파출라 | 수술 | WARD’s Natural Science | 15 V 4313 | |
| 론저 (골삭제 겸자) | 수술 | Fine Science Tools | 16000-14 | |
| 조직 포셉 | 수술 | Fine Science Tools | 11021-12 | |
| 미세 텅스텐 와이어 (0.001 in. 직경) | 수술 | California Fine Wire Company | 미세 해부 | |
| 포셉 #5 | 수술 | Fine Science Tools | 91150-20 | |
| 미누텐 핀 | 수술 | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| 모리아 스프링 가위 (7mm 날) | 수술 | Fine Science Tools | 15370-52 | |
| 페트리 접시 (100x15mm) | 기타 | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
| 핀 홀더 | 수술 | Fine Science Tools | 26018-17 | |
| 초미세 포셉 #5SF | 수술 | Fine Science Tools | 11252-00 | |
| Sylgard 182 | 기타 | Dow Corning | 182 | |
| 텅스텐 바늘 | 수술 | Fine Science Tools | 10130-05 | |
| 해부 현미경 | 현미경 | Wild | MC3 | 기타 |
| 요나게 ( C. borealis) | 동물 | Commercial Lobster |
참고문헌
- Harris-Warrick, R. M., Marder, E., Selverston, A. I., Moulins, M. Dynamic Biological Networks: The stomatogastric nervous system. , MIT Press. Boston. (1992).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.<....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
