방법 논문

전체 몽키 브레인에서 대규모 단백질 탐지에 대한 배치 Immunostaining

DOI:

10.3791/1286

⸱

2009년 7월 27일

 ,  ,  , 
1Cognitive Neuroscience Unit, Montreal Neurological Institute, 2Ècole d’Optomètrie, Universitè de Montrèal, 3Department of Psychology, McGill University

이 논문에서

요약

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전체 영장류 두뇌를 통해 대상 단백질의 대규모 면역이 포함 소설 조직을 고용하고 주어진 시간에 여러 자유 부동 섹션의 배치 얼룩을위한 창조적인 장치를 이용하여 결합 방법을 sectioning에서 가능합니다.

초록

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Immunohistochemistry (IHC)는 대상 단백질의 검출에 가장 널리 사용되는 실험 기법 중 하나입니다

프로토콜

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Immunohistochemisty 다양한 실험 동물 모델의 두뇌에있는 단백질 표현을 특성화를 위해 가장 널리 사용되는 기법 중 하나입니다. 유사한 두뇌 크기와 설치류 및 기타 일반적인 실험 모델의 두뇌에 체계적인 immunohistochemical 절차를 수행하기 위해 상대적으로 쉽습니다. 그러나, 전체 원숭이의 두뇌에 걸쳐 같은 면역 절차를 수행하는 방법에 대한 포괄적인 계정을 제공하는 우리의 지식에 게시된 작업은 없습니다. 어떤 다음은 다양한 대상 단백질의 대규모 immunohistochemical 감지에 대한 전체 원숭이 두뇌를 준비하는 방법에 대한 자세한 설명입니다. 이 작품은 상업 및 학문적 노력 사이의 협력의 결과로 떠오르고있다. 이와 같이 포함하고 sectioning 조직에 관한 세부 사항은 NSA의 독점적인 지식 남아 있습니다.

1 부 : 동물 치료 및 조직 준비

성인 vervet 원숭이 (Cercopithecus aethiops)에서 두뇌는 현재 프로토콜에 사용됩니다. 모든 절차는 생물 의학 연구 1 동물의 사용과 관리에 대한 애니멀 케어의 캐나다 협의회 (CCAC) 지침을 준수 실시하고 있습니다.

  1. 동물은 깊이 나트륨....

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토론

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가능한 전체 원숭이의 뇌에 단백질의 대규모 감지하게이 절차에서 두 중요한 단계가 있습니다. 하나는 NSA의 독점적인 지식 남아 삽입과 sectioning 프로토콜입니다. 다른 하나는 HistoTools에서 제공하는 얼룩 요리와 바구니를 사용하는 것입니다. 후자는 주어진 시간에 많은 (~ 40) 섹션을 쉽고 빠르게 처리하실 수 있습니다. 또한 균일하게 뇌 전체 부분을 치료를위한 수단을 제공하고 과학적으로 소리 histological 치료를합니다. 또한, 임베디드 랜드마크의 사용은 디지털 말린 coverslipped 슬라이드에서 얼룩 패턴을 습득하고 분석 다양한 형태로 디지털 파일을 대상 수있는의 추가한 이점을 제공합니다. 우리 세 항체의 예제를 제공하기는하지만,이 절차 특히 다른 표적 단백질뿐만 아니라 histological 얼룩, cytoarchitecture 다양한 대뇌 피질의 영역을 표시하고 따라서 매핑 목적으로 사용되는 이들의 다양한 적용할 수 있습니다.

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공개 사항

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저자는 공개할 것이 없습니다.

감사의 글

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우리는 프랭크 에르빈, 로버타 Palmour 및 영장류 작품들의 지속적인 지원 세인트 키츠, 서인도 제도에있는 Behavioural 과학 재단 연구소의 직원에게 감사하고 있습니다. 보건 연구 (AC)과 국립 공학 및 캐나다 (MP)의 연구위원회의 캐나다 연구소에서 운영 보조금 -이 작품은 깨지기 쉬운 X 리서치 SZ 캐나다의 재단 (FXRFC)와의 화목에 의해 지원되었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
anti-FMRP 단클론 항체Chemicon InternationalMAB2160고정 조직에서 항원 회수가 필요합니다.
anti-NeuN 단클론 항체Chemicon InternationalMAB377N/A
항신경필라멘트 H 단클론 항체Sternberger Monoclonals Inc.SMI32N/A
항원 마스킹 해제 솔루션Vector LaboratoriesH-3300N/A
일반 말 혈청Invitrogen16050122500 mL
비오틴화 안티 마우스 IgG (H+L), 말Vector LaboratoriesBA-2000
VECTASTAIN ABC Kit (Standard)Vector LaboratoriesPK-40001.5 mg
염색 접시 플로팅 섹션HistoTools1000912 x 65 mm
염색 운송 바구니HistoTools10012대형
(12 x 65 mm 접시에 맞음)
Triton X-100Fisher ScientificP8514BN/A
DABFisher ScientificAC11209-0050N/A

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Guide to the Care and Use of Experimental Animals. Olfert, E. D., Cross, B. M., McWilliam, A. A. , Canadian Council on Animal Care. Ottawa. (1993).
  2. Devys, D., Lutz, Y., Rouyer, N., Bellocq, J. P., Mandel, J. L. The FMR-1 protein is cytoplasmic, most abundant in neurons and appears normal in carriers of ....

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