우리는 양의 회장에서 '창자 고리'를 catheterizing위한 새로운 수술 방법을 설명합니다. 일단 동물이 수술에서 회복하고 항생제와 진통제를 통과해야 여러 치료는 카테터를 통해 루프에서 직접 입금하실 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
소장뿐만 아니라 영양분의 흡수에 관여하는 복잡한 구조이지만, 또한 개인과 외부 세계 사이의 장벽 역할을합니다. 따라서 소장은 immunosurveillance와 장용 병원균으로부터 보호에 중추적인 역할을합니다. 장 생리 및 면역학을 조사하는 것은 일반적으로 실험 모델로 '창자 고리'를 고용합니다. 이러한 루프 모델의 대부분은 소장에서 단기간 (<24 시간) 변경 (1-3) 학업 이외의 회복 수술 절차입니다. 우리는 이전에 구체적으로 백신, adjuvants, 그리고 바이러스 (4) 양이 다음과 같은 노출의 소장의 장기 (<6 MO) 면역 변화를 측정하기 위해 복구 장 루프 모델을 만들었습니다. 특정 '루프'이 절차는 현지화된 트리 트먼트, 우리가 소장의이 지역을 맛볼 수 있도록합니다. 이 방법의 큰 단점은 치료를 (수술 당시 IE) 관리 기회의 단일 창입니다. 또한 장의 점막과 luminal 내용을 모두 샘플은 프로젝트의 종료에서 찍은 수 있습니다. 위의 모델의 다른 분출 한계 수술 조작하고 필요한 사후 수술 조치 (항생제와 진통제의 예 기업청) 직접 치료 자체 및 /에 영향을 미치거나, 따라서 혼란함을 주죠 결과를 면역 기능을 변경할 수 있습니다. 따라서, 우리는 루프로 장기간 카테터를 삽입하여 장 루프 모델을 수정했습니다. 쉽 절차에서 완전히 회복하고 exteriorized 카테터에 의해 영향을받지 있습니다. 특히, 루프에서 카테터의 설립은 우리가 수술 중에 투여 약물의 수술과 통관의 복구 및 사후 수술 기간에 따라 연장 간격을 통해 여러 치료법을 소개하실 수 있습니다.
프로토콜
실험 절차 :
- 모든 악기 autoclaved되며 이외 autoclaveable 자료는 10 분 최소 Germex 차가운 살균 용액에 소독을하고 있습니다.
- 쉽 acepromazine (0.05 밀리그램 / kg), glycopyrrolate (0.005 밀리그램 / kg) 및 butorphanol tartrate의 (0.2 밀리그램 / kg) IM 사전 치료하고 있으며, 15-20 분 떠났다.
- 목이 면도와 피부 수술 하찮은 것입니다. 경정맥 정맥 시각되면, lidocaine의 0.1 ML이 정맥을 통해 SC 주입, 카테터가 정맥에 도입하여 가축 식별 태그 시멘트 2 "병원 테이프를 사용하여 피부에 안전합니다. 수술 동안, 동물 10 ML에게 부여됩니다 Plasmalyte 148의 / ㎏ / HR (중력 흐름에 의해).
- 다이아 제 팜 (0.2 밀리그램 / kg)은 IV 관리하고, 마취는 thiopental 나트륨 (10 밀리그램 / kg)를 유발합니다. Lidocaine endotracheal 스프레이가 보컬 주름에 적용되어 양이 수술의 기간 동안 (4 L / 분 속도 100 % O 2에 1.5-2.5 %) intubated, 그리고 isoflurane에 유지됩니다.
- 동물은 수술하는 동안 체온을 유지하기 위해 가열 매트에 지느러미 드러누움에 배치됩니다. 위장 튜브는 과도한 tympany을 방지하기 위해 제일위에 삽입됩니다.
- 복부 복부는 면도되고 피부는 세 Prepodyne 수술 스크럽과 함께 수술에 대한 준비가되어 있습니다. 복부는 수술 사이트의 적절한 노출 (꼬리 복부에 배꼽) 유지를 보장하고 draped 있습니다.
- 15~20센티미터의 정중선 절개는 caudally 배꼽에서 electroscapel를 사용하여 만든, 그리고 ileocecal 접어은 복부의 오른쪽 하단 사분면에 위치하고 있습니다. 꼬리 회장과 맹장은 다음 exteriorized 있습니다. 절차 전반에 걸쳐, 소장의 처리는 최소화하고 치료는 exteriorized 소장가와 젖은 유지되도록 취해 따뜻한 (37-39 ° C) 멸균 인산은 호수 (PBS, pH는 7.2) 버퍼.
- 회장의 85cm 세그먼트는 (즉, '장 세그먼트') 측정 후 세그먼트의 각 끝에 도옌의 포셉 (창자 클램프) 대형 켈리 포셉로 고정되어 있습니다. 창자 세그먼트 내에서 '루프'와 루프 사이에 'interspaces'가 설립됩니다. 도옌의 집게는 (문합)에 합류하는 회장의 측면에 배치되며, 켈리 포셉은 회장의 창자 세그먼트 사이드에 위치하고 있습니다.
- 회장은 각 도옌와 켈리 forcep 사이 절단이며 루프에 대한 지정 창자 부분은 부드럽게 ingesta를 제거하는 따뜻한 PBS 60 ML로 두 번 플러시됩니다.
- 광범위한 스펙트럼 항생제 (따뜻한 PBS, 60 ML 총 판매량 200 MG enrofloxacin 250 MG 메트로니다졸)의 칵테일은 창자 세그먼트에 걸쳐 분산 30 분 남아 있습니다.
- 회장 (장의 세그먼트 제외)의 근위 및 말초 컷 끝을는 지속적이고 기능적 창자를 형성에 가입하고 있습니다. 첫째, 회장이 각각 소장의 mesenteric 및 antimesenteric 경계에 위치, 두 숙박 봉합에 의해 정렬됩니다. 그런 다음, 간단한 연속 봉합 패턴 (2-0 Vicryl)는 함께 소장에 가입 대장의 양쪽에 완료됩니다.
- 따뜻한 PBS (3-5 ML)가 누설 및 치료 실패를 확인 문합 사이트에 주입합니다. 그런 다음, 켈리 forcep의 끝에이 소장의 serosal 표면에 대한 누르면, 문합 사이트의 사이트에 가까이하고, 문합 사이트에서 고급 안쪽은 장내 루멘가 크고 특허되도록합니다.
- 항생제 칵테일은 창자 세그먼트에서 제거됩니다. 2-0 Vicryl을 사용하여 반전 봉합 패턴 다음, 세그먼트의 각 부분이 간단한 연속 봉합 패턴 (2-0 Vicryl 흡수성 봉합사)으로 닫힙니다.
- 85cm 길이의 창자 세그먼트는 세 15cm '루프', 루프 사이를 둘 15cm 길이의 'interspaces', 그리고 창자 세그먼트의 테르 두 5cm 길이 무딘 엔드 구획 (그림 1)로 분할됩니다 . 루프는 2-0 비단을 사용하여 대장 주위에 묶인을 배치하여 만들어집니다. 그것이이 장의 생존을 유지, 혈액과 대장을 공급하는 데 필요한 주요 mesenteric 선박,이 절차를 수행하는 동안 출혈도 잡았되지 않습니다 주목할만한 것입니다. 그들이 카테터를 확보하는 데 사용되므로 또한, ligatures이 오래 남아 있습니다.
- 카테터 (예 : silastic 관)은 개별적으로 영구 마커를 사용하여 식별됩니다. 카테 테르를 encircling 실리콘 공을 (5mm 지름), 대장 (그림 1) 밖으로 미끄러져에서 카테터를 방지하기 위해 카테터 끝 4~5cm을 배치됩니다. autoclaving하여 살균 후, 이외의 항생제 연고 (Orbeseal)는 무균 카테 테르 엔드 (3~5밀리미터)에 삽입되는, 이것은 카테터 특허 유지 보장합니다 (즉, 그것이 루프 내에서 벗겨진 점막에 의해 연결되는하지 않습니다.)
- 작은 절개는 세 루프의 각 두개골 측면에 배치됩니다. 각 구멍은 카테 테르의 introducer (예 : '선박 확장시키는')로 확대하고, 카테터의 6-8센티미터 세그먼트가에 caudally 삽입루프는 silcone 볼 때까지 루멘 (그림 1)에 전달합니다.
- 장벽은 지갑 문자열 봉합사 (Vicryl 2-0)로 카테터 주위에 안전합니다. 카테 테르는 더욱 루프의 두개골 끝을 delineated 묶인 실크 카테터를 묶은하여 소장에게 안전합니다.
- 암피실린는 (5 ML, 따뜻한 PBS 100 MG / ML) 각 루프 및 공간에 주입되며, 소장이 복강에 다시 배치됩니다. Cefazolin (8 ML, 따뜻한 PBS 100 MG / ML)는 복부 절개를 통해 복막 캐비티에 주입합니다.
- 하나의 작은 자상 절개는 정중선 절개에 인접한 복벽을 통해 만들어이며, 카테터이 사이트를 통해 exteriorized 수 있습니다.
- 위치와 카테터의 긴장은 복막 캐비티 내에 조정됩니다. 복부 근육은 간단한 중단 봉합 패턴 (흡수성 봉합사, 장선 # 3)을 폐쇄하고, 피부가 중단될 수평 매트리스 패턴 (비 흡수성 봉합사, Supramid # 1)으로 닫힙니다.
- 곡선 중공 스테인레스 스틸 튜브 (7mm의 ID, 10mm OD, 길이 65cm)가 목에 막 꼬리 출구 사이트에 피부 아래와 어깨 사이에 터널링, 복부 절개 근처의 피부 아래에 삽입됩니다. 카테터는 튜브 삽입 및 튜브 길이의 최소 50 % 앞으로 밀고있다. 카테터와 튜브는 다음 카테터를 노출, 출구 사이트의 피부에서 가져온 것입니다.
- 카테터의 긴장은 자상 절개 사이트에 조정이며, 피부는 Supramid # 1 닫힙니다.
- 개인 카테터를 식별하고 Supramid # 1 피부에 봉합하는 반창고 "주머니"내에 게재됩니다. 주머니는 이후의 손상에서 카테터를 보호합니다.
- 포스트 operatively, 양은 초기 복용량에 flunixin (SID)와 인스턴트 메시지 주사 2.2 MG / kg, 3 일간 1.1 MG / kg SID의 유지 보수 복용으로 따라갔다. 양도 각각 3과 5 일 동안 Hemostam (3 ML)과 enrofloxacin (2.5 밀리그램 / kg) 시드와 인스턴트 메시지를 주입하고 있습니다. 동물은 그 흐름 (145 ML / HR)에 관계없이 자세의 지속을 보장하기 위해 연동 펌프와 함께 지속적으로 실시 5 % 덱스 트로 오스 솔루션과 정맥 Plasmalyte 148에 유지됩니다. 그들은 광고 libitum를 마실 수 있지만, 일반 제일위 및 대장의 기능이 복원되기 전까지는 피드가 제한됩니다. 식품 섭취, 물 소비, 체온, 대변과 소변, 굿 소리, 복부 통증, 태도 및 혈당 농도의 통로가 밀접 (입찰) 모니터되며 필요한 경우 정맥 체액의 포도당 농도는 혈당 농도를 유지하기 위해 조정됩니다 정상치입니다. 혈액 화학 및 혈액학 (즉, 알부민, 알칼리 인산 분해 효소, 알라닌 aminotransferase, 아밀라아제, 칼슘, 콜레스테롤, 크레아티닌, 포도당, 무기 인산염, 총 빌리루빈, 총 단백질, 요소, 글로불린, 나트륨, 칼륨, 염화물, 부분 압력 산소, 산도, 부분 압력 이산화탄소, 중탄산염 및 총 이산화탄소, 빨강과 백혈구 계산, 혈소판, 혈색소, 차등 백혈구 개수 및 혈소판 개수)는 수술 전과 후 즉시 모니터링, 그리고 다른 모든 일 이후입니다. 일단 정상적인 창자 기능이 개시 정맥 유체 치료가 종료되고 동물 파독스으로 전송됩니다 (예 : 5~7일 포스트 - 수술). 동물은 따라서 스트레스와 그들의 카테 테르의 파우치 (예 : penmate으로 씹는)에 손상을 유지의 기회를 감소 개별 펜 (다른 동물의 시력 이내)에 보관됩니다.
- 개별 루프에 트리 트먼트를 삽입하려면, 치료 5 ML은 18 게이지, 무딘 엔드 바늘로 장착 멸균 주사기를 사용하여 카테터로 주입됩니다. 루프에 치료의 모든 증언을 보장하기 위해, 카테 테르는 다음 PBS 3 ML로 주입됩니다.
중요 포인트 :
이 수술의 성공에 결정적인 중요성의 수속은 다음과 같습니다 (1) 소장은 교합 (anastomosis)을 수립하기 전에 자체에 트위스트 아니라는 것을 확인, (2) 문합의 무결성과 명백을 확보 (3) 적절하게하기 위해 카테터를 확보 루프 루프의 두개골 끝을 delineating 묶인과 벽지만, 첨부 파일은 카테 테르의 명백에 영향을주지 않습니다 있도록 (4) 창자 처리를 최소화하고 exteriorized 소장이 촉촉한 보관 있도록이 (5) 적절한 카테터를 보장 긴장 (6)는 카테터의 무결성이 근육과 피부 suturing 동안 영향을받지 있도록, (7) (POST 수술 장폐색의 기간 동안 IE) 양 수술에 의해들에게 빠져 방지 ruminal impaction과 손상을 일으킬 수 제일위 기능, 동물들이 가장 먼저 3~5일 수술에 대한 충분한 정맥 유체 치료를받을 수 있도록하고 (8), 그 혈중 포도당 농도는 신중하게 모니터링하고 정맥 체액의 포도당 농도가 adjus입니다테드 저혈당을 방지하기 위해 필요한 경우. 
그림 1. catheterized ileal 루프의 구조 표현. 참고 세 15cm 길이의 '루프'catheterized, 루프, 두 5cm 길이 터미널 세그먼트 사이에 설립된 두 15cm 길이 아닌 catheterized 'interspaces'는 모두 85cm 길이의 '창자 세그먼트 내에 설립 '쉽 회장니다.
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토론
이 절차에서는, 우리는 성공적으로 양 회장 내에 설립된 장 루프에 카테터를 설정할 수 있었다. 엄격한 사후 수술 치료 준수하면서, 동물은 빠르게 절차에서 발견한 및 수술 후 정상적인 활동 5-7일을 재개. 우리는 루프 내에서 카테터의 설립이 장의 점막이나 면역 기능 (데이터가 표시되지 않음)에 영향을주지 않고 동물들이 수술 후 최소한 8 주 살 수있는 결정. 이 절차는 우리가 한 동물 수술에서 회복, 확장된 간격을 통해 서로 다른 면역 구획으로 여러 치료법을 소개하고, 경험적으로 이러한 치료의 생리 및 면역 효과를 측정할 수 있습니다.
이후의 실험에 대한 중요한 고려 사항은 소장 내에서 창자 세그먼트의 위치입니다. 이 절차에서는 수술 자주 ileal (지속) Peyer의 패치 (5,6)에 의해 정의된 '기능 immunologically 회장'내의 창자 세그먼트를 만들었습니다. 이 지역은 ileocecal 배 이상 cranially 최대 2m를 확장할 수 있습니다...
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공개 사항
실험 동물에있는 모든 절차는 기관 동물 케어위원회의 승인 (동물 사용 프로토콜 # 0609)와 애니멀 케어의 캐나다 협의회가 정한 지침을 따라했다.
우리는 공개 없어요.
감사의 글
연구는 농업과 아그리 - 푸드 캐나다 연구 센터, 레스 브리지, 앨버타, 캐나다의 헌신과 많은 사람의 노력없이 완료되지 않았을 수 있습니다. 그 점에 관해서는, 우리는 감사 : 사전 및 사후 수술 동물의 치료, 수술 준비 및 마취, 샘플의 분석 및 비디오 영상과 함께 도움을 타라 셸턴, 사전 및 사후 수술 치료에 대한 랜디 와일드와 에스텔라 코스타; 샘플 분석을 위해 제니 Gusse, 투관침 이미지 바이런 리 및 양의 축산을위한 브라이언 Egland. 우리는 또한 비디오 장비 및 조언뿐만 아니라 다른 도움을 (즉, 이그 제 큐 티브 생산) 제공 브렌트 셀린저을 (생물 과학학과, 레스 브리지 대학) 감사 및 교육 과정 다시 개발 센터, videography 전문 지식에 대한 레스 브리지 대학. 이 연구는 고급 식품 소재 네트워크 (GDI), 캐나다 앨버타 쇠고기 산업 개발 기금 (GDI), 그리고 농업과 아그리 - 식품 캐나다 (GDI와 JPK)에서 부여에 의해 일부 지원되었다.
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재료
| 카테고리 / 항목 번호 | 회사 | 카탈로그 |
| 외과 의사 공급 | ||
| 수술 장갑 | WDDC | 103091 |
| 외과 마스크 | WDDC | MAX53013 |
| 수술 가운 | CDMV B | 3365 |
| OB 에이프런 | WDDC | 900062 |
| 외과 캡 | WDDC | 903271 |
| EZ 스크럽 브러시 | WDDC | BDC377479 |
| 마취와 약물 | ||
| 마취 기계 | 보일 | |
| Sodasorb | WDDC | 108638 |
| 후두경 | WDDC | |
| 후두경 블레이드 (밀러 블레이드 # 4) | WDDC | 902667 |
| Endotracheal 튜브 (7.0-8.5 mm) | WDDC | |
| Lidocaine endotracheal 스프레이 | WDDC | 103364 |
| Acepromazine | WDDC | AUS01020 |
| Glycopyrrolate | WDDC | SAB2880 |
| Butorphanol tartrate의 | WDDC | AYE304541 |
| 다이아 제 팜 | WDDC | sab790 |
| Thiopental 나트륨 | WDDC | 103508 |
| 에피네프린 염산염 | WDDC | 103856 |
| Doxapram | 스트라 스 코나 약국 | |
| Isoflurane | WDDC | 100339 |
| Hemostam | WDDC | 103857 |
| Flunixin | WDDC | sch140100 |
| Enrofloxacin | WDDC | hll0049 |
| 메트로니다졸 | WDDC | 101653 |
| 암피실린 | WDDC | NOV67185 - 6 |
| Cefazolin | WDDC | nov69397 |
| 수술 장비 및 소모품 | ||
| Electroscapel | Macan | MV8 |
| 난방 매트 | 칸 | PHMD - 48 |
| 위 튜브 (Nalgene 튜빙 16분의 5 "ID) | 피셔 사이 언티픽 | |
| 니들 드라이버 | WDDC | 108338 |
| 애디슨 브라운 forcep | WDDC | 911075 |
| 랫 치아 forcep | CDMV | 5275 |
| 켈리 forcep | WDDC | 901133 |
| 모기 hemostat | WDDC | 108471 |
| Carmalt forcep | WDDC | 901225 |
| 메스 핸들 | WDDC | 900285 |
| 메스 블레이드 # 22 | WDDC | 900511 |
| Metzenbaum의 가위 | WDDC | 901166 |
| 날카로운 날카로운 가위 | WDDC | 108264 |
| 타월 클램프 | WDDC | 901213 |
| 앨리스 조직 forcep | WDDC | 901201 |
| 도옌의 forcep | WDDC | 904226 |
| 스테인리스 그릇 | WDDC | 903601 |
| 스테인리스 스틸 투관침 (곡선) | 지역 업체 | |
| 카테 테르의 introducer | WDDC | 11,440 |
| 외과 수건 | CDMV | 7972 |
| 일회용 드레이프 | WDDC | 900035 |
| Steri의 드레이프 | CDMV | 2323 |
| 드레이프 (40 X 40cm) | CDMV | 8358 |
| 외과 드레이프 (7 "X 11"오프닝) | CDMV | 2694 |
| Vicryl (2-0) | WDDC | JJMJ333H |
| 실크 2-0 | WDDC | 105248 |
| # 3 장선 | WDDC | CSL547 - 2070 |
| Supramid # 1 | WDDC | CSL547 - 3040 |
| 바늘 (절단 및 비 절삭) | WDDC | |
| 카테 테르 | ||
| Silastic 관 (0.040 "ID, 0.085"OD) | 피셔 사이 언티픽 | 11-189 - 15D |
| Orbeseal 연고 | WDDC | 106344 |
| 지우기 실리콘 (732 다목적 밀봉제) | 지역 업체 | |
| 블런트 최종 바늘 | WDDC | 905035 |
| 마커 (영구 산업) | 지역 업체 | |
| 카테 테르 파우치 (Elastoplast 7.5 cm의 건설) | WDDC | 104094 |
| 붕대 | ||
| 병원 테이프 (2 ") | WDDC | 103842 |
| 병원 테이프 (1 ") | WDDC | VLMRENF20 |
| 거즈 스폰지 4X4 | WDDC | 107551 |
| 거즈가 집착 | WDDC | 107633 |
| Elastoplast 7.5cm | WDDC | 104094 |
| Elastoplast rippable 붕대 | WDDC | 104093 |
| NEedles 및 주사기 | ||
| 주사기 (60 ML) | WDDC | 104004 |
| 주사기 (10 ML) | WDDC | bdc301604 |
| 25G 니들 | WDDC | BDC305122 |
| 20G 니들 | WDDC | BDC305175 |
| 18G 니들 | WDDC | 903353 |
| 정맥 | ||
| Intracath IV 카테터 (16G 8 ") | WDDC | bdc3831621 |
| IV 관리 세트 (10 방울) | WDDC | 101797 |
| 0.9 % NaCl 용액 | WDDC | BAXJB1322P |
| Plasmalyte 148 솔루션 | WDDC | BAXJB2534 |
| 우선당 | WDDC | MCT60190 |
| 연동 펌프 | 콜 파머 | 7524-10 |
| 가축 식별 태그 시멘트 | 지역 업체 | |
| Sanatizers / disinfectants | ||
| Germex 솔루션 | WDDC | mtc60270 |
| 이소 프로필 알코올 | WDDC | 104590 |
| Stanhexidine의 클렌저 | WDDC | 109248 |
| Prepodyne 솔루션 | WDDC | 105710 |
| Prepodyne 스크럽 | WDDC | 105711 |
서양 의약품 유통 센터 주식 회사, 에드먼턴, AB.
B 베티 약물 유통 센터 주식 회사, 세인트 시아신쓰, QE.
참고문헌
- Vidal, J. E., McClane, B. A., Saputo, J., Parker, J., Uzal, F. A. Effects of Clostridium perfringens beta-toxin on the rabbit small intestine and colon. Infect. Immun. 76, 4396-4404 (2008).
- Santos, R. L., Zhang, S., Tsolis, R. M., Baumler, A. J., Adams, L. G. Morphologic and molecular characterization of Salmonella typhimurium infection in neonatal calves. Vet. Pathol. 39, 200-215 (2002).
- Uzzau, S., Leori, G. S., Petruzzi, V., Watson, P. R., Schianchi, G., Bacciu, D., Mazzarello, V., Wallis, T. S., Rubino, S. Salmonella enterica serovar-host specificity does not correlate with the magnitude of intestinal invasion in sheep. Infect. Immun. 69, 3092-3099 (2001).
- Gerdts, V., Uwiera, R. R. E., Mutwiri, G. K., Wilson, D. J., Bowersock, T., Kindane, A., Babiuk, L. A., Griebel, P. J. Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses. J. Immunol. Methods. 256, 19-33 (2001).
- Greibel, P. J., Davis, W. C., Reynolds, J. D. An analysis of the growth and differentiation of b cells isolated from follicles from ileal Peyer's patch of sheep. Immunology. 75, 601-607 (1992).
- Motyka, G., Greibel, P. J., Reynolds, J. D. Agents that activate protein kinase C resue sheep ileal Peyer's patch B cells from apoptosis. Eur. J. Immunol. 23, 1314-1321 (1993).
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