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drosophila에서 wolbachia 세균 감염

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Drosophila에서 Wolbachia 세균 감염

제 이름은 Voia Friedman이며, 프린스턴 대학교의 부연구원입니다. 오늘은 제가 개발한 몇 가지 프로토콜에 대해 말씀드리겠습니다. 이 프로토콜들은 감염된 파리에서 hemolymph를 분리하고, 나중에 이를 감염되지 않은 파리에 주입하는 과정에 관한 것입니다.기본적으로, 이는 기초적인 수준에서 hemocyte만을 분리하기 위한 매우 간단한 프로토콜입니다. Mepo의 이 장치는 E-tube 상단에 장착되는 필터를 포함하고 있습니다. 기본적으로 약 100마리의 초파리로 시작합니다. 초파리를 마취시킨 후 필터 장치에 넣는데, 깔때기를 사용하면 이 장치에 초파리를 매우 쉽게 옮길 수 있으며, 그 후 70% ethanol로 세척합니다.먼저 에탄올을 제거합니다. 에탄올을 버린 후, 마지막 세 번째 세척은 멸균수를 사용하여 수행하는데, 이는 박테리아에 에탄올 흔적이 남아 있는 것을 원하지 않기 때문입니다. 그런 다음 새로운 원심분리관으로 옮겨 마이크로 원심분리기로 2분 동안 원심분리합니다. 이후 이를 주입할 수 있으며, 영향을 받지 않은 파리들에게만 먹이를 제공합니다.기본적으로 양면테이프를 준비하십시오. 보통 이러한 양면테이프는 두 면이 있으며, 한쪽 면에 이면지가 붙어 있습니다. 파리를 그 위에 붙여야 하므로 이면지가 있는 쪽을 위로 향하게 두십시오. 기본적으로 가스 장치 상단에 이 슬라이드가 있으면 가스 흐름이 차단되며, 슬라이드 위에 있는 파리들이 깨어나게 됩니다.따라서 테이프를 사용하여 작은 후드나 챔버를 만들어 흐름을 직접 조절할 수 있습니다. 그런 다음 가스가 초파리 위로 흐르도록 유도합니다. 이렇게 테이프로 이 조명을 고정하면, 초파리가 준비된 상태가 됩니다.초파리들을 테이프 상단에 모두 동일한 방향으로 고정시키며, 바늘이 들어올 방향으로 머리를 향하게 합니다. 그렇게 하면 날개를 피해 바늘을 찌를 수 있으며, 초파리가 시술 중에 깨어나더라도 도망가지 않도록 확실히 고정할 수 있습니다.따라서 초파리 꼬리 부분의 날개 쪽에 약간의 팁과 압력을 가해주십시오. 날개가 손상되어도 괜찮습니다. 주입 후 초파리를 들어 올릴 때 어차피 날개가 소실될 가능성이 높으며, 그럼에도 불구하고 초파리는 생존할 것입니다.이는 파리를 잃지 않게 해주므로 유용할 수 있습니다. 따라서 그는 마이크로미터의 바늘 뒷부분에 미네랄 오일을 바른 다음, 바늘 주입기를 연결하고, 압력을 조절하여 물질을 바늘 끝까지 올립니다. 저는 10~15 nL 사이의 양을 주입했는데, 일관성 있게 주입하는 것이 중요합니다. 여기서 한 가지 중요한 세부 사항은 주입 시 바늘이 복부 상단부의 가능한 깊숙한 곳까지 들어가야 한다는 점입니다.기본적으로 여기서 바늘이 관통할 때 상하로 움직일 수 있는 공간이 더 넓기 때문입니다. 그리고 큐티클에 더 가깝게 위치시키면, 수술 과정에서 주요 장기를 관통할 가능성이 낮아집니다. 예를 들어, 수술 중인 플라이의 장에 구멍을 낼 가능성이 매우 낮아지며, 이는 플라이를 죽게 만들 수 있기 때문입니다.제 이름은 Voia Friedman입니다. 저는 Princeton University의 Eric Hels 연구실 소속 부연구원입니다. 오늘은 방금 시연으로 보신 이 프로토콜에 대해 설명드리고자 합니다.본 프로토콜은 UBA가 조직을 통과할 수 있음을 증명하기 위해 수행되었습니다. UBA는 지구상에서 가장 성공적인 세포 내 기생충 중 하나로, 곤충과 많은 절지동물의 20%에서 70%까지 감염시킵니다.또한, 이들은 온코세르카리아시스(강변 실명증)나 림프사상충증과 같은 질병을 전파하는 선충을 감염시키기 때문에 인간 질병 측면에서도 매우 중요합니다. 그리고 CCA는 이러한 벌레들의 필수적인 내공생균입니다. 따라서 모기에 의해 전파되는 기생충 질환을 조절하는 수단으로 CCA를 활용하는 것에 대해 매우 큰 관심이 있으며, 여기에는 말라리아나 뎅기열과 같은 모기 전파 질환이 포함됩니다.따라서 이 프로토콜은 CCA가 초파리의 복강 내에 존재할 때, 조직을 가로질러 생식세포에 도달할 수 있음을 보여주기 위해 개발되었습니다. 기본적으로 여기서 보시는 것은 초파리 난소의 형태이며, CCA가 혈림프 내에 존재하면 난소를 둘러싸고 있는 분홍색 복막초를 통과할 수 있습니다.그런 다음 근육층을 가로질러 이동합니다. 실제로 이들이 난소 내부로 들어가는 첫 번째 장소 중 하나가 바로 체세포 줄기세포 영역입니다. 그 후 이들은 생식세포 계열에 도달할 수 있습니다.또한 이 박테리아는 미토콘드리아와 동일한 방식으로, 즉 난자에 존재하는 모체 세포질을 통해 전해집니다. 따라서 당연히 이들이 생식세포계열에 존재해야 합니다. 이것이 바로 이 프로토콜이 개발된 이유입니다.이 프로토콜은 매우 유용할 수 있습니다. 기본적으로 전통적인 방식에서는 wbaaa를 전염시키기 위해 wbaaa를 취해 새로운 곤충 종에 도입하려 했을 것입니다. 이는 배아에 미세 주입을 수행함으로써 이루어지지만, 해당 방법은 훨씬 더 복잡합니다.기본적으로 우리는 여기서 바이러스의 생물학적 특성을 이용하고 있습니다. 바이러스는 조직을 가로질러 이동할 수 있으며, 줄기세포 조직으로 이동하여 생식세포열까지 전달될 수 있기 때문입니다. 따라서 감염된 특정 곤충 종으로부터 UBA를 추출하는 것이 더 수월하며, 이를 감염되지 않은 종으로 전염시킬 수 있습니다. 아마도 주입 과정 그 자체가 원인이라고 생각합니다.기본적으로 파리를 최대한 잘 고정하는 것이 중요합니다. 저희는 양면 테이프를 사용하고 있으며, 바늘을 파리와 최대한 가깝고 평행하게 찔러 넣어 너무 깊게 들어가지 않도록 해야 합니다. 그렇게 해야 수술 후 파리가 죽을 가능성이 낮아집니다.

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