방법 논문

6.5 DPC 마우스 태아의 해부

DOI:

10.3791/160

⸱

2007년 2월 25일

 , 
1Massachusetts General Hospital, Harvard Stem Cell Institute, Harvard Medical School

이 논문에서

요약

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postimplantation - 무대 배아의 격리는 한 유전자 patterning을 연구하고 개발하는 동안 배아 프로세스를 만드는 세포 혈통 결정을 분석할 수 있지만, 초기 배아의 적절한 절개 도전하실 수 있습니다. 이 프로토콜은 초기 원시 - 연속 단계의 배아를 분리하는 방법을 설명합니다 (~ 6.5 일 이후 coitum [DPC]).

초록

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포유류의 배아 발달의 초기 단계 동안 유전자 발현 패턴 분석 유전자 기능, 세포 - 세포 상호 작용 및 신호 메커니즘 그 가이드 배아 patterning에 대한 중요한 단서를 제공할 수 있습니다. 그러나, 곧 주입 후 decidua에서 마우스 배아의 해부는 도전적인 절차 될 수 있으며,이 과정에 대한 자세한 단계별 문서는 부족합니다.

여기 이후 주입 (6.5 DPC) 배아가 처음 임신 마우스 (질 플러그가 지정 일 0.5 poist의 coitum의 검출)의 자궁을 해부하고 그 후에 산모 decidua에서 배아를 해부하여 격리하는 방법을 보여줍니다. 레이처트의 막의 절개는 ectoplacental 원추의 제거뿐만 아니라 설명되어 있습니다.

프로토콜

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여성 마우스에서 생식 기관의 해부

  1. 임신 동물 압축 가스를 사용하여 CO 2 질식에 의해 euthanized 있습니다.
  2. 흡수 패드에있는 동물 부정사를 틀어서 마우스 머리로 절개를 오염의 위험을 줄이기 위해 70 %의 에탄올에 만끽해보세요.
  3. 피부를 꼬집어하고 정기적으로 수술 가위로 정중선에서 작은 측면 절개합니다. 확고하게 상기와 절개 아래의 피부를 잡고 머리와 복부를 노출 꼬리쪽으로 떨어져 피부를 당기십시오.
  4. 포셉로 복막을 파악하여 복강을 노출 그만 하죠.
  5. 이 자궁 뿔을, 수란관과 난소 : 뱃속의 지느러미 지역에서 생식 기관을 찾습니다.

원시 리크 단계 (6.5 DPC) 해부

  1. 수란관 아래 자궁 쥐고하여 자궁 경적을 제거하고 mesometrium 따라 그것이 무료로 잘라. 얼음 차가운 PBS의 해부 자궁 놓으십시오.

    figure-protocol-1

    그림 1

  2. 자궁 호른 함께 주입 사이트간에 절단하여 각 배아를 구분합니다.

    figure-protocol-2

    그림 2


  3. 주변 근육의 레이어와 싸여 decidua 조직 사이의 시계 제조인의 집게를 슬라이딩하여 근육의 자궁 내막을 파악. 다시 근육 계층 껍질, decidua을 알아가는 겁니다.

    figure-protocol-3

    그림 3

  4. 동봉된 배아의 midventral 또는 말초 팁을 노출됩니다 아펙스 (약 decidua 조직의 1 / 5)에서 노출 decidua의 일부를 클립.

    figure-protocol-4

    그림 4

  5. 배아는 포셉의 도움말을 사용하여 밖으로 껍질 수 있습니다. 피어스는 배아를 둘러싼 포셉와 오픈 포셉와 decidua 떨어져 decidua 찢어 수 있습니다.

    figure-protocol-5

    그림 5

  6. 일단 배아가 제거되어 Reichart의 멤브레인 여전히 ectoplacental 콘 (trophoblast)뿐만 아니라 첨부할 수 있습니다. 배아는주의 절개로 추가 해부하실 수 있습니다.

    figure-protocol-6
    그림 6

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토론

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마우스의 Postimplantation 4.5 DPC과 출산 사이에 발생합니다. 이 절개 방법은 이전 또는 이후 5.5-8.5 DPC에 무대 배아를 분리하기 위해 본질적으로 설명, 적용할 수 있습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
미세 해부용 포셉, 톱니 모양, 직선형도구Roboz Surgical Instruments Co.RS-51302쌍
미세 해부용 핀셋 Pattern #55 INOX도구Roboz Surgical Instruments Co.RS-50102쌍
Dulbecco’s 인산 완충 식염수 (1x)시약Invitrogen14190
Fisherbrand 멸균 폴리스티렌 페트리 접시도구Fisher Scientific08-757-12
PBS 내 4% 파라포름알데히드시약
직선형 날카로운 끝 해부용 가위도구Fisher Scientific08-940
임신한 암컷 생쥐동물
해부 현미경현미경

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Nagy, A., et al. Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. (2003).

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