안정적인 농도 기울기에 박테리아 Chemotaxis을 Quantifying위한 Microfluidic 장치

요약

이 프로토콜은 chemoeffectors의 안정적인 농도 기울기에 박테리아 chemotaxis 조사를위한 microfluidic 장치의 개발을 설명합니다.

초록

Chemotaxis은 박테리아가 유인 화학 물질의 소스를 접근하거나 혐오감을 화학 물질의 소스를 피할 수 있습니다. 박테리아는 지속적으로 집중하는 현재의 농도를 비교하여 특정 chemoeffectors의 농도를 모니터 앞에서 몇 초를 발견했습니다. 이 비교는 운동의 순 방향을 결정합니다. 여러 경쟁 그라디언트는 종종 자연 속에서 공존하지만, 박테리아 chemotaxis를 조사하는 기존 방법은 attractants과 repellents의 농도 기울기에 대한 응답으로 마이 그 레이션을 quantifying위한 suboptimal 있습니다. 여기, 우리는 박테리아에 chemoeffectors의 정확하고 안정적​​인 농도 기울기를 제시하고 양적 적용된 그라디언트들의 반응을 조사하는 microfluidic chemotaxis 모델의 개발을 설명합니다. 이 장치는 원하는 절대 농도와 기울기 강도의 농도 기울기에 다양한는 쉽게 잘 퍼지는 혼합에 의해 생성하실 수 있습니다. 장치는 응답을 사용하여 증명

프로토콜

1. 표준 SU - 8 석판술 ^1을 (이 동영상에 표시되지 않습니다)를 사용하여 실리콘 마스터의 제작.

1. microfluidic 네트워크 및 chemotaxis 챔버를 포함하는 PDMS 금형을 fabricating위한 SU - 8 "마스터"(SU - 8 2025, MicroChem, 뉴턴, MA)를 만드는 표준 SU - 8 석판술 방법을 사용하십시오. 이러한 마스터 금형은 모든 microfabrication 시설 (; 예를 들어, 스탠포드 Microfluidics 주조에서 가공 수 있습니다 http://thebigone.stanford.edu/foundry/ ).
2. 이전 PDMS의 복제, 마스터에서 PDMS의 쉬운 버전을 촉진하기 위하여 진공 소스에 연결된 건조기에 플루오로 실란 수증기에 SU - 8 마스터를 노출. 종이 타월로 플루오로 실란의 드롭을 추가 한 분 진공을 적용합니다. 진공을 제거하고 플루오로 실란의 증착을위한 30 분 수 있습니다. 나중에 사용하기 위해 닫힌 용기에 SU - 8 마스터 보관하십시오.

2. SU - 8 마스터에서 PDMS의 ....

토론

마오 외 ^5에서 설명한대로 chemotaxis 파티션 계수 (CPC) 및 chemotaxis 마이 그 레이션 계수 (CMC)을 계산하실 수 있습니다. 세포가 높은 농도 측면에서 감지되는 경우 낮은 농도 측면에서 감지 세포가 -1의 값을 주어진 반면, 그것은, 하나의 값을 주어집니다. 값이 최대 표현하고 클릭당 비용 (CPC)을 생성하는 세포의 총수로 나누어집니다. CPC (긍정적이거나 부정적인)의 신호는 마이 그 레이션의 방향을 (신호에서 방향 또는 거리) 제공합니다. 클릭당 비용 (CPC)은 세포가 유인 또는 혐오감을, 그것이 chemotaxis의 범위를 계량하지 않는 등 화학 물질에 반응하는지 여부를 나타냅니다 있지만. 이를 위해, 우리는의 거리에 따라 64 섹션 (세포 입구의 양쪽에 32)에 장치의 던졌다 박테리아의 공간적 분포 프로필을 나누어, 각 섹션에서 세포에 가중치를 지정하여 CMC를 계산 마이 그 레이션. 센터 (섹션 1과 64)에서 멀리 떨어져 섹션들은 최대 거리를 마이 그.......