곤충 번데기 제거: 번데기 조사 방법

초록

출처: Fukutomi, Y., et al. 번데기 주기 및 Drosophila guttifera의 날개 색소 침착 측정 방법.J. Vis. 특급 (2018).

이 기사에서는 번데기 내부를 그대로 유지하면서 곤충의 번데기를 제거하는 기술에 대해 설명하므로 추가 조사에 적합합니다. 예시 프로토콜은 Drosophila guttifera를 사용한 절차를 보여줍니다. 그러나 이 기술은 다른 초파리 종에 적용할 수 있습니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Fukutomi et al., Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera, J. Vis. Exp. (2018)에서 발췌

한 것입니다.

1. 번데기 제거

참고 초파리의 번데기는 번데기(puparium)라는 구조로 덮여 있습니다. Muscomorpha (파리)의 곤충은 번데기에서 유충 표피를 흘리지 않습니다. 대신, apolysis 후에 큐티클을 단단하게 하고, 번데기, 번데기의 보호 덮개로 사용합니다. 번데기 안에 서식하는 번데기는 매우 부드럽고 연약한 진정한 번데기 표피를 가지고 있습니다. P4(ii) 부근에서 결점이 일어나기 전에는 상피와 번데기가 함께 붙어 있기 때문에 번데기를 손상시키지 않고 제거하는 것은 매우 어렵습니다. P5 이후에는 번데기를 제거하는 것이 힘들지만 번데기 단계의 형태학적 관찰 및 정의에 유용합니다. 프로세스는 다음과 같이 수행됩니다.

1. 종이 타월 한 장에 양면 테이프를 붙입니다.
2. 양면 테이프 복부 면이 위로 향하게 하여 번데기를 놓습니다(그림 1A).
3. 번데기의 앞쪽과 내부 번데기 사이의 공간을 찾습니다. 이 틈 주위의 번데기를 겸자로 잡고 제거하고 번데기 머리의 앞쪽을 노출시킵니다.
4. 집게의 끝을 전후 축과 평행하게 움직여 삽입합니다. 집게 끝을 들어 올려 번데기를 국부적으로 부수십시오. 파손이 번데기의 뒤쪽 부분에 도달 할 때까지이 작업을 반복하십시오. 번데기와 번데기 다리 사이에도 틈이 생기는지 확인하고 번데기의 복부 쪽을 부러뜨리고 내부 번데기의 손상을 최소화합니다(그림 1B).
5. 번데기를 최대한 부순 후 고운 붓(#5/0)을 사용하여 번데기를 꺼냅니다(그림 1C).
6. ddH₂O를 적신 티슈 페이퍼 위에 번데기를 놓고 플라스틱 페트리 접시(직경 60mm x 높이 15mm)에 넣습니다. 노출된 번데기는 취약하고 쉽게 건조하므로 가능한 한 빨리 사진을 찍으십시오.
    

결과

그림 1. 번데기를 제거하는 그림.(A) 양면 테이프 조각에 번데기 복부 쪽이 위로 향하게 놓습니다. 번데기의 앞부분을 제거합니다. (B) 복부 쪽에서 겸자로 번데기를 부러뜨립니다. (C) 번데기를 깨뜨린 후 붓을 사용하여 번데기를 꺼냅니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
초파리 guttifera	U.C. 샌디에이고의 초파리 종 재고 센터	15130-1971년 10	Drosophila guttifera, 이 기사에 사용된 초파리 종
NICETACK 양면 테이프	니치반	NW-15SF	양면 테이프, 번데기 제거용
Dumont #5 겸자	정밀 과학 도구	11252-20	번데기를 제거하기 위한 겸자
반 고흐 VISUAL 페인트 브러시	Talens, 일본	GWVR-#5/0	번데기를 제거하기 위한 페인트 브러시
실체현미경	올림푸스	사이즈16	형태학적 관찰을 위한 실체현미경
디지털 카메라	올림푸스	DSE-330-A	이미징용 디지털 카메라
Falcon 표준 조직 배양 접시	코 닝	353002	플라스틱 페트리 접시 (직경 60mm × 높이 15mm)

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